], kuid antioksüdantide kui keemiliste ühendite määratlus ei anna täielikku pilti uuritava objekti kaitsvatest omadustest: need ei ole määratud mitte ainult konkreetse antioksüdandi koguse, vaid ka igaühe aktiivsuse järgi. Antioksüdantne aktiivsus või antioksüdantne aktiivsus, AOA, on antioksüdandi ja vaba radikaali (kInH) reaktsiooni kiiruskonstant. Kemoluminestsentsi (CL) meetod võimaldab määrata proovis antioksüdante siduvate radikaalide koguhulka (antioksüdantide kogumaht, TAU) ning CL kineetika matemaatilise modelleerimise meetodi kasutamisel ka radikaalide tekke ja reaktsiooni kiirust. antioksüdantidega, see tähendab AOA [, ,].

Kõige levinum kemoluminestsentsi meetodi modifikatsioon antioksüdandi kogumahu määramiseks põhineb luminooli kasutamisel kemoluminestsentsi aktivaatorina [, , ,]. Proov asetatakse kemiluminomeetri küvetti, millele on lisatud luminooli, vesinikperoksiidi ja ühendit, mis on võimeline iseenesliku lagunemise (termolüüsi) tulemusena moodustama radikaale, näiteks 2,2'-asobis-(2-amidinopropaan)divesinikkloriidi (ABAP). ): ABAP → 2R. Molekulaarse hapniku juuresolekul moodustab alküülradikaal R peroksüülradikaali ROO: R + O 2 → ROO. Järgmisena oksüdeerib peroksüülradikaal kemoluminestsentssondi luminooli (LH 2) ja moodustub luminoolradikaal (LH): ROO + LH 2 → ROOH + LH. LH-st tekib vaheainete (luminoolhüdroperoksiid ja luminoolendoperoksiid) moodustumisel elektrooniliselt ergastatud olekus luminooli oksüdatsiooni lõpp-produkti aminoftaalhappe molekul, mis kiirgab footoni ja selle tulemusena täheldatakse kemoluminestsentsi. . CL intensiivsus on võrdeline footonite tootmise kiirusega ja see omakorda võrdeline LH statsionaarse kontsentratsiooniga süsteemis. Suheldes radikaalidega, katkestavad antioksüdandid kirjeldatud transformatsioonide ahela ja takistavad footoni teket.

Termolüüsile vastuvõtlikud ühendid ei ole ainsaks võimalikuks radikaalide allikaks proovi antioksüdantse võimekuse analüüsimisel kemoluminestsentsmeetodil. Alternatiivideks on süsteemid mädarõika peroksidaas-vesinikperoksiid [, ], hemiin-vesinikperoksiid, tsütokroom Koos–kardiolipiin–vesinikperoksiid jne. Luminooli oksüdeerimise reaktsiooniskeemi peroksidaaside toimel on käsitletud Cormier et al. .

Nende süsteemide CL kineetilised kõverad peegeldavad reaktsiooni kahte etappi: CL intensiivsuse suurenemise staadium ja platoo või luminestsentsi järkjärgulise languse etapp, kui CL intensiivsus on kas konstantne või aeglaselt väheneb. Töös kirjeldatakse kahte lähenemisviisi antioksüdantide koguvõimsuse mõõtmiseks, mis võtavad arvesse seda kõverate omadust. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) meetod põhineb CL varjatud perioodi mõõtmisel. τ ja neid saab kasutada antioksüdantide, nagu Trolox või askorbiinhape, määramiseks: neid iseloomustab suur reaktsioonikiiruse konstant radikaalidega ja seetõttu võib neid nimetada tugevateks antioksüdantideks. Varjatud perioodil toimub nende täielik oksüdeerumine. TAR (Total Antioxidant Reactivity) meetod mõõdab kemoluminestsentsi summutamise astet q kemoluminestsentsi kõvera platool või maksimumis: valem, kus I on kemoluminestsentsi intensiivsus ilma antioksüdandita ja I 1 on CL intensiivsus antioksüdandi juuresolekul. Seda meetodit kasutatakse juhul, kui süsteem sisaldab valdavalt nõrku antioksüdante, millel on madalad koostoimete kiiruskonstandid radikaalidega – palju madalam kui luminooli konstandiga.

Antioksüdantide toimet iseloomustavad mitte ainult näitajad τ Ja q. Nagu on näha töödest [,], antioksüdantide, nagu kusihappe toime hemiin-H 2 O 2 –luminooli süsteemis või tokoferool, rutiin ja kvertsetiin tsütokroomsüsteemis Koos–kardiolipiin–H 2 O 2 –luminool, mida iseloomustab CL maksimaalse suurenemise kiiruse muutus ( v max). Nagu kineetika matemaatilise modelleerimise tulemused näitavad, on nende antioksüdantide ja radikaalide interaktsiooni kiiruskonstantide väärtused lähedased luminoolikonstandi väärtusele, seetõttu võib selliseid antioksüdante nimetada keskmise tugevusega antioksüdantideks.

Kui uuritav materjal, eriti taimne tooraine, sisaldas ainult ühte tüüpi antioksüdante, saab nende sisaldust iseloomustada ühega kolmest ülaltoodud näitajast ( τ , q või v max). Kuid taimsed materjalid sisaldavad erineva tugevusega antioksüdantide segu. Selle probleemi lahendamiseks kasutasid mõned autorid [ , , , ] kemoluminestsentsi valguse summa muutust teatud aja jooksul ∆S, mis arvutati valemiga , kus ∆ S 0 ja ∆ S S- CL valgus summeerib etteantud aja kohta t vastavalt kontroll- ja katseproovides. Aeg peab olema piisav kõigi süsteemis olevate antioksüdantide oksüdeerumiseks, st et uuritava proovi CL kõver jõuaks kontrollproovi CL kõvera tasemeni. Viimane eeldab, et teadlased ei pea mitte ainult jäädvustama kuma valguse summat, vaid salvestama ka piisavalt pika aja jooksul CL kineetikakõvera, mida alati ei tehta.

Kuna kõik mõõdetavad näitajad sõltuvad seadmest ja mõõtmistingimustest, siis tavaliselt võrreldakse uuritavas süsteemis aine antioksüdantset toimet mingi standardiks võetud antioksüdandi, näiteks Trolox [,] toimega.

Paljud autorid on taimsete materjalide antioksüdantide koguvõimsuse analüüsimiseks kasutanud mädarõika peroksüdaasi-vesinikperoksiidi süsteemi. Töödes [ , ] kasutati proovides sisalduvate antioksüdantide hulga hindamiseks CL varjatud perioodi (TRAP meetod) ning töödes [ , , ] - CL arengukõvera alust pindala. Loetletud tööd aga ei anna selget põhjendust ühe või teise parameetri valikule OAU hindamiseks.

Uuringu eesmärk oli välja selgitada, kuidas eri tüüpi antioksüdantide vahekord mõjutab TOA-d, ning modifitseerida kemoluminestsentsmeetodit selliselt, et oleks võimalik taimsete materjalide TOA-d täpsemalt määrata. Selleks seadsime endale mitu ülesannet. Kõigepealt võrrelge uuritavate objektide CL kineetikat kolme tüüpi standardsete antioksüdantide (tugevad, keskmised ja nõrgad) kineetikaga, et mõista, millist tüüpi antioksüdandid annavad peamise panuse uuritavate objektide OAU-sse. Teiseks arvutage uuritavate objektide OAE, mõõtes CL valguse summa vähenemist nende objektide mõjul võrreldes antioksüdandi toimega, mis annab suurima panuse OAE-sse.

MATERJALID JA MEETODID

Uuringu objektideks olid JSC Krasnogorskleksredstva (Venemaa) toodetud viirpuu, pihlaka ja kibuvitsa marjade tööstuslikud proovid, samuti autorite poolt Moskva oblastis looduslikes kasvutingimustes kogutud ja temperatuuril 60–80 ° kuivatatud vaarika viljad. C, kuni nad lõpetasid vajutamisel mahla eraldumise ja deformatsiooni.

Reaktiivid antioksüdandi võimekuse analüüsimiseks kemoluminestsentsmeetodil olid: KH 2 PO 4, 20 mM puhverlahus (pH 7,4); mädarõika juurte peroksidaas (aktiivsus 112 ühikut/mg, M = 44 173,9), 1 mM vesilahus; luminool (5-amino-1,2,3,4-tetrahüdro-1,4-ftalasiindioon, 3-aminoftaalhappe hüdrasiid, M = 177,11), 1 mM vesilahus; vesinikperoksiid (H202, M = 34,01), 1 mM vesilahus; antioksüdantide lahused (askorbiinhape, kvertsetiin, tokoferool). Kõik reaktiivid toodab Sigma Aldrich (USA).

Viirpuu-, pihlaka- ja kibuvitsamarjade keetmised ning vaarikaviljade leotis valmistati NSV Liidu Riikliku Farmakopöa meetoditel, mis on sätestatud üldfarmakopöa artiklis “Leotised ja keetmised”.

Antioksüdandi kogumahu määramiseks registreeriti kemoluminestsents Lum-100 kemiluminomeetril (DISoft, Venemaa), kasutades PowerGraph 3.3 tarkvara. OAE määramiseks taimsetes materjalides 40 μl luminooli kontsentratsiooniga 1 mM, 40 μl mädarõika peroksidaasi kontsentratsiooniga 0,1 μM, 10 kuni 50 μl keetmist või infusiooni (olenevalt kontsentratsioonist) ja fosfaatpuhvrit vajaminev kogus asetati seadme küvetti, et viia proovi kogumaht 1 ml-ni. Küvett paigaldati seadmesse ja CL salvestati, jälgides taustasignaali. Pärast 48-sekundilist taustsignaali salvestamist lisati küvetti 100 μl H2O2 kontsentratsiooniga 1 mM ja CL-i salvestamist jätkati 10 minutit. Iga taimeobjekti erineva kontsentratsiooniga valmistati neli proovi. CL registreeriti ka askorbiinhappe, kvertsetiini ja tokoferooli lahuste puhul iga antioksüdandi viie erineva kontsentratsiooniga. Seejärel arvutati keetmiste ja infusioonide proovide OAU ümber kvertsetiiniks.

Luminooli, mädarõika peroksidaasi ja vesinikperoksiidi kontsentratsioonid valiti selliselt, et määrata ravimtaimsete materjalide vesiekstraktide antioksüdantne võime vastuvõetava aja jooksul (mitte rohkem kui 10 min). Selle aja jooksul jõudsid antioksüdantide askorbaadi ja flavonoidi kvertsetiini (peamised taimsete materjalide antioksüdandid) kemoluminestsentsi kõverad platoole, mis näitab antioksüdantide täielikku hävimist süsteemis. Uuritud proovide lahjendused ja standardsete antioksüdantide lahuste kontsentratsioonid (näidatud jooniste legendides) valiti selliselt, et kõik CL kineetilised kõverad mõõdeti seadme sama tundlikkuse juures.

Antioksüdantide võime arvutati pindala muutuse (∆ S) kemoluminestsentsi (valgussumma) kineetilise kõvera all antioksüdanti sisaldava aine lisamisel. Selleks arvutasime S 0 antioksüdandita süsteemi jaoks ja lahutas sellest ala S S, mis iseloomustab süsteemi, millele antioksüdant lisati. Väärtus ∆ S oleneb kemiluminomeetri tundlikkusest ja mõõtmistingimustest. Suhe ∆ S/C V(Kus C- uuritava bioloogilise materjali kontsentratsioon küvetis, g/l ja V- küveti maht, l) väljendab 1 g uuritava materjali, st taimse tooraine antioksüdantset võimekust.

Antioksüdandi võime ∆ arvutati sarnaselt S A standardse antioksüdandi, näiteks kvertsetiini lahus, mis asetatakse reaktsioonisegu samasse mahtu. Suhe ∆ S A / C A V(Kus C A- antioksüdandi massikontsentratsioon küvetis, g/l) väljendab 1 g antioksüdandi antioksüdantset võimekust.

Iga standardse antioksüdandi puhul registreeriti mitme kontsentratsiooniga lahuste signaal, et tagada arvutuste lineaarne seos ja saadud tulemuste reprodutseeritavus. Tõepoolest, saadi lineaarne sõltuvus (∆ S A = k A C A) signaali kontsentratsioonist, mille põhjal arvutati stöhhiomeetriline koefitsient k A. Fisheri kriteeriumi kohaselt saadakse standardsete antioksüdantide väärtused k A statistiliselt oluline tõenäosusega 0,975. Järgmisena registreeriti kõigi nelja taimeproovi jaoks nelja kontsentratsiooni signaal ja kõigi proovide puhul saadi signaali lineaarne sõltuvus kontsentratsioonist (∆ S = k·C), mille põhjal arvutati stöhhiomeetriline koefitsient k. Tõenäosusega 0,975 (Fisheri test) on taimeproovide puhul saadud k väärtused statistiliselt olulised. Taimse materjali kogu antioksüdantne võime standardse antioksüdandi massina (mg%) leiti valemi abil.

Väärtused esitati aritmeetilise keskmise ± standardhälbena (M ± δ) p juures

UURIMISTULEMUSED

Kemoluminestsentsi kineetika uuring naatriumaskorbaadi juuresolekul (Joon. 1. Sodium ascorbate mõju kemoluminestsentsi kineetikale" data-note="Süsteemi komponentide kontsentratsioonid: luminool - 40 µM, mädarõika peroksidaas - 4 nM, vesinikperoksiid - 100 uM. Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,05 uM; 3 - 0,10 uM; 4 - 0,15 uM; 5 - 0,2 uM; 6 - 0,25 uM naatriumaskorbaat.">Joonis 1) on näidatud selle antioksüdandi kohta mida iseloomustab varjatud periood, mil CL on peaaegu täielikult alla surutud Selle kestus on võrdeline antioksüdandi kogusega süsteemis. Samas ei muutu ei CL kõverate kalle ega CL intensiivsus platool Seda seletatakse asjaolu, et askorbiinhape on tugev antioksüdant, mis peatab kõik süsteemis moodustunud radikaalid, sealhulgas luminooli radikaalid, ja CL ei arene enne, kui kogu askorbaat on oksüdeerunud.

Ka teised teadlased on näidanud, et keemilise analüüsi tulemused ja kemoluminestsentsmeetodil määratud TAU väärtus ei lange sageli kokku. Töös korreleerus peroksidaas-luminool-vesinikperoksiid süsteemis määratud antioksüdantide summaarne võimekus triterpeeniühendite sisaldusega. Samas ei täheldanud samade autorite töödes, kus uurimisobjektiks oli teine ​​taim, OAE korrelatsiooni ühegi ainerühma, sealhulgas flavonoidide sisaldusega.

Sellised lahknevused on seotud vähemalt kolme teguriga. Esiteks on oluline antioksüdantide aktiivsus ehk nende koostoime määr radikaalidega, mis on erinevate taimeproovis sisalduvate antioksüdantide puhul erinev. Izmailovi sõnul korreleeruvad meksidooli, tokoferooli ja kvertsetiini vastavate reaktsioonide kiiruskonstandid 0,04: 2: 60. Teiseks võib iga antioksüdandi molekul, sattudes keemilisesse reaktsiooni, katkestada erineva arvu radikaale. Töö kohaselt lõid kvertsetiin, kusihape ja askorbiinhape vastavalt 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 ja 0,5 ± 0,2 radikaali reageerinud antioksüdandi molekuli kohta (kasutati hemiin-H 2 O 2 süsteemi -luminool). Kolmandaks võib uuringu tulemusi mõjutada peroksidaasi aktiivsuse olemasolu taimeproovides endis, nagu ka töös, aga ka kaltsiumi sisaldus proovides, mis, nagu tööst nähtub, on võimeline suurendama. mädarõika peroksüdaasi aktiivsus teatud tingimustel. Tavaliselt põhjustab see platool kõrgemat CL intensiivsust kui kontrollkõveratel, mida me aga ei täheldanud.

Esimene tegur piirab järsult sellise parameetri kasutamist valguse summa muutmisena, kuna kemoluminestsentsi mõõtmise aeg peab olema pikem kui kõigi uuritavas proovis sisalduvate antioksüdantide kulumise aeg. Selle hetke toimumist saab hinnata ainult kemoluminestsentsi kineetikat mõõtes. Lisaks alahinnatakse järsult nõrkade antioksüdantide panust TAU-sse, kuna nende täieliku oksüdeerumise aeg on mitu korda pikem kui vastuvõetav mõõtmise kestus (10–20 min).

Antioksüdandi stöhhiomeetriline koefitsient on veelgi olulisem. Radikaalide arv n pealtkuulatud on võrdne , Kus ρ on stöhhiomeetriline koefitsient ja ∆ m- antioksüdandi kontsentratsiooni muutus mõõtmise ajal, meie puhul - uuritava aine algkontsentratsioon uuritavas proovis.

Luminestsentsi valgussumma erinevus antioksüdandi puudumisel ja selle olemasolul on proportsionaalne n. Peatatud radikaalide koguarv on , kus ρ i on konkreetse antioksüdandi stöhhiomeetriline koefitsient ja m i- selle kontsentratsioon mõõtmise ajal. Peatatud radikaalide koguarv ei ole ilmselt võrdne antioksüdantide koguhulgaga, kuna koefitsiendid ρ i mitte ainult ei võrdu ühtsusega, vaid erinevad oluliselt ka erinevate antioksüdantide puhul.

Suurusjärk n on võrdeline teatud aja jooksul mõõdetud valguse summade erinevusega antioksüdanti sisaldava proovi ja antioksüdantideta kontrollproovi vahel: S = k n, Kus k- koefitsient, konstantne samadel mõõtmistingimustel.

Artiklis käsitletud meetod võimaldab määrata kogu antioksüdantide võimekust, keemiline analüüs aga antioksüdantide kogusisaldust tootes. Seetõttu näib kemoluminestsentsi meetod olevat informatiivsem kui keemilised analüüsid.

Tingimused, mille valisime taimsete toorainete antioksüdantide koguvõimsuse hindamiseks, registreerides kemoluminestsentsi kineetika mädarõika peroksidaasist, vesinikperoksiidist ja luminoolist koosnevas süsteemis (komponentide kontsentratsioonid - vastavalt 4 nM, 100 µM ja 40 µM; 20 mM fosfaati puhver, pH 7,4), tagas tugevate antioksüdantide (askorbiinhape) ja keskmise tugevusega antioksüdantide (kvertsetiin) oksüdatsiooni 10 minutiga. Selline mõõtmise kestus on mugav ja tagab vajaliku mõõtmiskvaliteedi.

Kemoluminestsentsi kineetika analüüs näitas, et uuritavatel objektidel (pihlakaviljade, kibuvitsamarjade, viirpuu dekoktid ja vaarikaviljade infusioon) on peamisteks antioksüdantideks keskmise tugevusega antioksüdandid, sh flavonoidid, ja nõrga tugevusega (tokoferool jt). Kemoluminestsentsvalguse summa vähenemise põhjal arvutati uuritavate objektide antioksüdantide summaarne võimekus. Saadud TAU väärtuste võrdlemine keemilise analüüsi tulemustega näitas, et tooted, mis sisaldavad sama kogust erineva vahekorraga antioksüdante, võivad erineda oma võime poolest kaitsta keha tõhusalt vabade radikaalide kahjulike mõjude eest. Kirjeldatud tehnika on paljutõotav erinevate antioksüdantide segu sisaldavate taimsete objektide uurimiseks. Samal ajal iseloomustab seda lihtsus ja madal uurimistöö hind. Kemoluminestsentsi kineetika mõõtmise kombinatsioon reaktsioonide matemaatilise modelleerimisega mitte ainult ei automatiseeri TAU määramise protsessi, vaid määrab ka üksikute antioksüdantide rühmade panuse indikaatorisse.

Märksõnad

vaba radikaal/antioksüdant/ antioksüdantne aktiivsus / kogu antioksüdantne võime / kemoluminestsents/ luminool / vabad radikaalid / antioksüdant / antioksüdantne aktiivsus / kogu antioksüdantne võime / kemoluminestsents / luminool

annotatsioon teaduslik artikkel keemiateadustest, teadusliku töö autor - Georgi Konstantinovitš Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Ravimtaimed on inimorganismi üheks antioksüdantide allikaks. Taimsete objektide antioksüdantide sisalduse määramise meetodite hulgas on laialt levinud kemoluminestsentsanalüüsi meetod. Selles töös kasutati seda hinnangu andmiseks kogu antioksüdantne võime(OAE) pihlakaviljade, kibuvitsamarjade ja viirpuu dekoktid ning vaarikaviljade infusioon. Kineetika registreeriti katses kemoluminestsents süsteemis, mis koosneb mädarõika peroksidaasist, vesinikperoksiidist ja luminoolist. Süsteemi komponentide kontsentratsioonid ja maht proovis valiti nii, et tugevad antioksüdandid (askorbiinhape) ja mõõdukad antioksüdandid (kvertsetiin) oleksid mõõtmisaja (10 min) jooksul täielikult oksüdeerunud. On välja pakutud ja põhjendatud meetod OAE arvutamiseks, mis põhineb valguse summa muutustel kemoluminestsents taimeproovide juuresolekul. Kineetika analüüs kemoluminestsents näitas, et uuritavatel objektidel domineerisid keskmise tugevusega antioksüdandid, sh flavonoidid, ja nõrgad antioksüdandid (tokoferool jne). Uuritud objektide arvutatud OAE väärtuste ja nende keemilise analüüsi andmete võrdlus näitas, et tooted, mis sisaldavad tüübiti erinevas vahekorras sama kogust antioksüdante, võivad erineda võime poolest kaitsta keha vabade radikaalide kahjulike mõjude eest. . Kirjeldatud tehnika on paljutõotav erinevat tüüpi antioksüdantide segu sisaldavate taimeobjektide uurimiseks.

Seotud teemad keemiateaduste teadustööd, teadusliku töö autor - Georgi Konstantinovitš Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

• 2016 / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.

• Antioksüdantide määramine aktiveeritud kemoluminestsentsi abil, kasutades 2,2"-aso-bis(2-amidinopropaani)

  2012 / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

• Dihüdrokvertsetiini ja rutiini antioksüdantne toime tsütokroom c katalüüsitud peroksidaasi reaktsioonides

  2008 / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

• Bioloogiliste substraatide oksüdatiivse ja antioksüdantse võime hindamine Fentoni reaktsioonist põhjustatud kemoluminestsentsi abil

  2016 / Piskarev Igor Mihhailovitš, I.P. Ivanova

• Lipohüdroperoksiidide sisalduse määramine seerumi lipoproteiinides mikroperoksidaas-luminool süsteemi abil

  2011 / Teselkin Juri Olegovitš, Babenkova Irina Vladimirovna

• Antioksüdantide uurimismeetodid

  2004 / Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V.

• Tuva etnomeditsiinis kasutatavate taimede antioksüdantne toime

  2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Ljubitski O.B.

• Fospreniili antioksüdantsete omaduste uurimine erinevates bioloogilistes testimissüsteemides

  2017 / A. V. Sanin, A. N. Narovljanski, A. V. Pronin, T. N. Koževnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova

• Polüklooritud bifenüülide erinevate annuste mõju täisvere spontaanse ja immunoglobuliinist põhjustatud luminoolist sõltuva kemoluminestsentsi seisundile

  2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samokhodova O.V.

• Essentsiaalse arteriaalse hüpertensiooniga laste antioksüdantse kaitse lipiidide peroksüdatsioonisüsteemi hindamine spektrofotomeetria ja kemoluminestsentsmeetodite abil

  2014 / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Kogu antioksüdandivõime kemiluminestsents määramine ravimtaimmaterjalis

Ravimtaimne materjal on üks inimorganismi antioksüdantide allikaid. Kemiluminestsentsanalüüs on üks levinumaid meetodeid taimsete materjalide antioksüdantide sisalduse määramiseks. Meie töös kasutati kemoluminestsentsanalüüsi pihlaka, roosi ja viirpuu puuviljade keetmise, samuti vaarika puuviljade infusiooni antioksüdantide koguvõimsuse (TAC) määramiseks. Katsetega tehti kindlaks mädarõika peroksidaasist, vesinikperoksiidist ja luminoolist koosneva süsteemi kemoluminestsentsi kineetika. Süsteemi komponentide kontsentratsioonid ja mahud valiti nii, et tugevad antioksüdandid (askorbiinhape) ja keskmise jõuga antioksüdandid (kvertsetiin) oksüdeerusid mõõtmise ajal (10 minutit) täielikult. Pakuti välja ja põhjendati TAC arvutamise meetod, mis põhineb kemoluminestsentsvalguse summa muutustel taimeproovide juuresolekul. Kemoluminestsentsi kineetika analüüs näitas, et uuritavates objektides domineerivad keskmise jõuga antioksüdandid, sealhulgas flavonoidid ja nõrgad antioksüdandid (tokoferool jt). Uuritavate objektide arvutatud lubatud kogupüügi väärtuste ja nende keemilise analüüsi andmete võrdlus näitas, et toodetel, mis sisaldavad sama kogust antioksüdante erineva antioksüdantide vahekorraga, võib erineda nende võime kaitsta keha vabade radikaalide kahjulike mõjude eest. . Kirjeldatud tehnika on paljulubav erinevat tüüpi antioksüdantide segu sisaldavate taimsete objektide uurimiseks.

Teadusliku töö tekst teemal “Kemoluminestsentsmeetod kogu antioksüdantse võime määramiseks ravimtaimsetes materjalides”

kemoluminestsentsmeetod ravimtaimsete materjalide antioksüdantide koguvõimsuse määramiseks

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1 M. V. Lomonosovi Moskva Riikliku Ülikooli meditsiinilise biofüüsika osakond, fundamentaalmeditsiini teaduskond

2 Farmakognoosia osakond, farmaatsiateaduskond,

Esimene I. M. Sechenovi nimeline Moskva Riiklik Meditsiiniülikool, Moskva

Ravimtaimed on inimorganismi üheks antioksüdantide allikaks. Taimsete objektide antioksüdantide sisalduse määramise meetodite hulgas on laialt levinud kemoluminestsentsanalüüsi meetod. Käesolevas töös kasutati seda pihlaka-, kibuvitsa- ja viirpuuviljade keetmise ning vaarikaviljade infusiooni antioksüdantide kogumahu (TAC) hindamiseks. Katses registreeriti kemoluminestsentsi kineetika süsteemis, mis koosnes mädarõika peroksidaasist, vesinikperoksiidist ja luminoolist. Süsteemi komponentide kontsentratsioonid ja maht proovis valiti nii, et tugevad antioksüdandid (askorbiinhape) ja mõõdukad antioksüdandid (kvertsetiin) oleksid mõõtmisaja (10 min) jooksul täielikult oksüdeerunud. Välja on pakutud ja põhjendatud meetod OAE arvutamiseks, mis põhineb kemoluminestsentsi valgussumma muutustel taimeproovide juuresolekul. Kemoluminestsentsi kineetika analüüs näitas, et uuritavates objektides on ülekaalus keskmise tugevusega antioksüdandid, sh flavonoidid, ja nõrgad antioksüdandid (tokoferool jne). Uuritud objektide arvutatud OAE väärtuste ja nende keemilise analüüsi andmete võrdlus näitas, et tooted, mis sisaldavad tüübiti erinevas vahekorras sama kogust antioksüdante, võivad erineda võime poolest kaitsta keha vabade radikaalide kahjulike mõjude eest. . Kirjeldatud tehnika on paljutõotav erinevat tüüpi antioksüdantide segu sisaldavate taimeobjektide uurimiseks.

Võtmesõnad: vabad radikaalid, antioksüdant, antioksüdantne aktiivsus, kogu antioksüdantne võime, kemoluminestsents, luminool

Rahastamine: tööd toetas Venemaa Teadusfond, grant nr 14-15-00375.

Ex3 Kirjavahetuseks: Georgi Konstantinovitš Vladimirov

119192, Moskva, Lomonosovski pr-t, 31, maja 5; [e-postiga kaitstud]

Artikkel saabus: 03.10.2016 Artikkel vastu võetud avaldamiseks: 18.03.2016

kogu antioksüdantse võimekuse määramine ravimtaimmaterjalis kemoluminestsentsmeetodil

1 Meditsiinilise biofüüsika osakond, Fundamentaalmeditsiini teaduskond, Lomonossovi Moskva Riiklik Ülikool, Moskva, Venemaa

2 Farmakognoosia osakond, farmaatsiateaduskond,

Esimene Sechenovi Moskva Riiklik Meditsiiniülikool, Moskva, Venemaa

Ravimtaimne materjal on üks inimorganismi antioksüdantide allikaid. Kemiluminestsentsanalüüs on üks levinumaid meetodeid taimsete materjalide antioksüdantide sisalduse määramiseks. Meie töös kasutati kemoluminestsentsanalüüsi pihlaka, roosi ja viirpuu puuviljade keetmise, samuti vaarika puuviljade infusiooni antioksüdantide koguvõimsuse (TAC) määramiseks. Katsetega tehti kindlaks mädarõika peroksidaasist, vesinikperoksiidist ja luminoolist koosneva süsteemi kemoluminestsentsi kineetika. Süsteemi komponentide kontsentratsioonid ja mahud valiti nii, et tugevad antioksüdandid (askorbiinhape) ja keskmise jõuga antioksüdandid (kvertsetiin) oksüdeerusid mõõtmise ajal (10 minutit) täielikult. Pakuti välja ja põhjendati TAC arvutamise meetod, mis põhineb kemoluminestsentsvalguse summa muutustel taimeproovide juuresolekul. Kemoluminestsentsi kineetika analüüs näitas, et uuritavates objektides domineerivad keskmise jõuga antioksüdandid, sealhulgas flavonoidid ja nõrgad antioksüdandid (tokoferool jt). Uuritavate objektide arvutatud lubatud kogupüügi väärtuste ja nende keemilise analüüsi andmete võrdlus näitas, et toodetel, mis sisaldavad sama kogust antioksüdante erineva antioksüdantide vahekorraga, võib erineda nende võime kaitsta keha vabade radikaalide kahjulike mõjude eest. . Kirjeldatud tehnika on paljulubav erinevat tüüpi antioksüdantide segu sisaldavate taimsete objektide uurimiseks.

Märksõnad: vabad radikaalid, antioksüdant, antioksüdantne aktiivsus, kogu antioksüdantne võime, kemoluminestsents, luminool

Rahastamine: seda tööd toetas Venemaa Teadusfond, grant nr. 14-15-00375.

Tänuavaldused: autorid tänavad Andrey Aleksejevit Moskva Riiklikust Ülikoolist Lomonossovi abi eest eksperimendi läbiviimisel. Kirjavahetus tuleks adresseerida: Georgiy Vladimirov

Lomonosovski prospekt, d. 31, k. 5, Moskva, Venemaa, 119192; ur [e-postiga kaitstud] Saabunud: 10.03.2016 Vastu võetud: 18.03.2016

Kehas moodustunud vabad radikaalid rikuvad rakumembraanide struktuuri, mis omakorda viib erinevate patoloogiliste seisundite tekkeni. Radikaalide hävitavat oksüdatiivset mõju hoiab ära organismi antioksüdantne kaitsesüsteem, milles on oluline roll madala molekulmassiga ühenditel – radikaalide püüduritel (lõksudel). Üheks antioksüdantide allikaks on ravimtaimed, aga ka nendel põhinevad ravimid, mille antioksüdantse potentsiaali uurimine aitab suurendada nende ennetavat ja ravitoimet.

Töödes on käsitletud peamisi antioksüdantide määramise meetodeid, kuid antioksüdantide kui keemiliste ühendite määratlus ei anna täielikku pilti uuritava objekti kaitsvatest omadustest: neid ei määra mitte ainult konkreetse antioksüdandi kogus, vaid ka antioksüdantide määramine. vaid ka igaühe tegevuse järgi. Antioksüdantne aktiivsus või antioksüdantne aktiivsus, AOA, on antioksüdandi ja vaba radikaali (kInH) reaktsiooni kiiruskonstant. Kemoluminestsentsi (CL) meetod võimaldab määrata antioksüdante siduvate radikaalide koguhulka proovis (antioksüdantide kogumahutavus, TCA) ning CL kineetika matemaatilise modelleerimise meetodi kasutamisel ka nende moodustumise ja reaktsiooni kiirust. antioksüdantidega radikaalid, see tähendab AOA.

Kõige tavalisem kemoluminestsentsi meetodi modifikatsioon antioksüdandi kogumahu määramiseks põhineb luminooli kasutamisel kemoluminestsentsi aktivaatorina. Proov, millele on lisatud luminooli, vesinikperoksiidi ja ühendit, mis on võimeline iseenesliku lagunemise (termolüüsi) tulemusena moodustama radikaale, näiteks 2,2"-asobis-(2-amidinopropaan)divesinikkloriid (ABAP):

Molekulaarse hapniku juuresolekul moodustab alküülradikaal R^ peroksüülradikaali ROO^:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv LH-st tekib vaheainete (luminoolhüdroperoksiid ja luminoolendoperoksiid) moodustumisel elektrooniliselt ergastatud olekus luminooli oksüdatsiooni lõpp-produkti aminoftaalhappe molekul, mis kiirgab footoni. ja selle tulemusena täheldatakse kemoluminestsentsi. CL intensiivsus on võrdeline footonite tootmise kiirusega ja see omakorda võrdeline LH statsionaarse kontsentratsiooniga süsteemis. Suheldes radikaalidega, katkestavad antioksüdandid kirjeldatud transformatsioonide ahela ja takistavad footoni teket.

Termolüüsile vastuvõtlikud ühendid ei ole ainsaks võimalikuks radikaalide allikaks proovi antioksüdantse võimekuse analüüsimisel kemoluminestsentsmeetodil. Alternatiivideks on mädarõika peroksidaas-vesinikperoksiid, hemiin-vesinikperoksiid, tsütokroom c-kardiolipiin-vesinikperoksiid jne. Luminooli oksüdeerimise reaktsiooniskeemi peroksidaaside toimel käsitleb Cormier et al. .

Nende süsteemide CL kineetilised kõverad peegeldavad reaktsiooni kahte etappi: CL intensiivsuse suurenemise staadium ja luminestsentsi platoo või järkjärgulise languse etapp, kui

CL intensiivsus on kas konstantne või väheneb aeglaselt. Töös kirjeldatakse kahte lähenemisviisi antioksüdantide koguvõimsuse mõõtmiseks, mis võtavad arvesse seda kõverate omadust. Meetod TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) põhineb CL t varjatud perioodi mõõtmisel ja seda saab kasutada antioksüdantide, nagu Trolox või askorbiinhape, määramiseks: neid iseloomustab kõrge reaktsioonikiiruse konstant radikaalidega ja sel põhjusel võib nimetatakse tugevateks antioksüdantideks. Varjatud perioodil toimub nende täielik oksüdeerumine. TAR (Total Antioxidant Reactivity) meetodit kasutatakse kemoluminestsentsi kustutamise astme q mõõtmiseks kemoluminestsentsi kõvera platool või maksimumis:

kus I on kemoluminestsentsi intensiivsus ilma antioksüdandita ja 11 on CL intensiivsus antioksüdandi juuresolekul. Seda meetodit kasutatakse juhul, kui süsteem sisaldab valdavalt nõrku antioksüdante, millel on madalad koostoimete kiiruskonstandid radikaalidega – palju madalam kui luminooli konstandiga.

Antioksüdantide toimet iseloomustavad mitte ainult näitajad t ja c. Nagu töödest näha, iseloomustab antioksüdantide, nagu kusihappe hemiin-H2O2-luminooli süsteemis või tokoferooli, rutiini ja kvertsetiin tsütokroom c-kardiolipiin-H2O2-luminooli süsteemis toimet maksimaalse kiiruse muutus. CL (utx) suurenemisest. Nagu kineetika matemaatilise modelleerimise tulemused näitavad, on nende antioksüdantide ja radikaalide interaktsiooni kiiruskonstantide väärtused lähedased luminoolikonstandi väärtusele, seetõttu võib selliseid antioksüdante nimetada keskmise tugevusega antioksüdantideks.

Kui uuritav materjal, eelkõige taimne tooraine, sisaldas ainult ühte tüüpi antioksüdante, siis nende sisaldust võiks iseloomustada ühega kolmest ülaltoodud näitajast (t, c või V). Kuid taimsed materjalid sisaldavad erineva tugevusega antioksüdantide segu. Selle probleemi lahendamiseks kasutasid mõned autorid kemoluminestsentsi valguse summa muutust teatud aja jooksul DE, mis arvutati valemiga

DE = DE0 - DE,

kus DE0 ja DE5 on CL valguse summad antud aja kohta? vastavalt kontroll- ja katseproovides. Aeg peab olema piisav kõigi süsteemis olevate antioksüdantide oksüdeerumiseks, st et uuritava proovi CL kõver jõuaks kontrollproovi CL kõvera tasemeni. Viimane eeldab, et teadlased ei pea mitte ainult jäädvustama kuma valguse summat, vaid salvestama ka piisavalt pika aja jooksul CL kineetikakõvera, mida alati ei tehta.

Kuna kõik mõõdetavad parameetrid sõltuvad seadmest ja mõõtmistingimustest, siis tavaliselt võrreldakse uuritavas süsteemis aine antioksüdantset toimet standardse antioksüdandi, näiteks Troloxi toimega.

Mädarõika peroksidaas-vesinikperoksiid süsteemi on taimsete materjalide kogu antioksüdantse võime analüüsimiseks kasutanud paljud autorid. Antioksüdantide hulga hindamiseks proovides kasutati CL varjatud perioodi (TRAP meetod) ning töödes kasutati CL arengukõvera alust pindala. Loetletud tööd ei anna aga selget põhjendust

ühe või teise parameetri valik OAU hindamiseks.

Uuringu eesmärk oli välja selgitada, kuidas eri tüüpi antioksüdantide vahekord mõjutab TOA-d, ning modifitseerida kemoluminestsentsmeetodit selliselt, et oleks võimalik taimsete materjalide TOA-d täpsemalt määrata. Selleks seadsime endale mitu ülesannet. Kõigepealt võrrelge uuritavate objektide CL kineetikat kolme tüüpi standardsete antioksüdantide (tugevad, keskmised ja nõrgad) kineetikaga, et mõista, millist tüüpi antioksüdandid annavad peamise panuse uuritavate objektide OAU-sse. Teiseks arvutage uuritavate objektide OAE, mõõtes CL valguse summa vähenemist nende objektide mõjul võrreldes antioksüdandi toimega, mis annab suurima panuse OAE-sse.

MATERJALID JA MEETODID

Uuringu objektid olid JSC Krasnogorskleksredstva (Venemaa) toodetud viirpuu, pihlaka ja kibuvitsa tööstuslikud proovid, samuti autorite poolt Moskva piirkonnas looduslikes kasvutingimustes kogutud ja temperatuuril 60-80 ° kuivatatud vaarika viljad. C, kuni nad lõpetasid vajutamisel mahla eraldumise ja deformatsiooni.

Reaktiivid antioksüdandi võimekuse analüüsimiseks kemoluminestsentsmeetodil olid: KH2PO4, 20 mM puhverlahus (pH 7,4); mädarõika juurte peroksidaas (aktiivsus 112 ühikut/mg, M = 44 173,9), 1 mM vesilahus; luminool (5-amino-1,2,3,4-tetrahüdro-1,4-ftalasiindioon, 3-aminoftaalhappe hüdrasiid, M = 177,11), 1 mM vesilahus; vesinikperoksiid (H2O2, M = 34,01), 1 mM vesilahus; antioksüdantide lahused (askorbiinhape, kvertsetiin, tokoferool). Kõik reaktiivid toodab Sigma Aldrich (USA).

Viirpuu-, pihlaka- ja kibuvitsamarjade keetmised ning vaarikaviljade leotis valmistati NSV Liidu Riikliku Farmakopöa meetoditel, mis on sätestatud üldfarmakopöa artiklis “Leotised ja keetmised”.

Antioksüdandi kogumahu määramiseks registreeriti kemoluminestsents Lum-100 kemiluminomeetril (DISoft, Venemaa), kasutades PowerGraph 3.3 tarkvara. OAE määramiseks taimsetes materjalides 40 μl luminooli kontsentratsiooniga 1 mM, 40 μl mädarõika peroksidaasi kontsentratsiooniga 0,1 μM, 10 kuni 50 μl keetmist või infusiooni (olenevalt kontsentratsioonist) ja fosfaatpuhvrit vajaminev kogus asetati seadme küvetti, et viia proovi kogumaht 1 ml-ni. Küvett paigaldati seadmesse ja CL salvestati, jälgides taustasignaali. Pärast 48-sekundilist taustsignaali salvestamist lisati küvetti 100 μl H2O2 kontsentratsiooniga 1 mM ja CL-i salvestamist jätkati 10 minutit. Iga taimeobjekti erineva kontsentratsiooniga valmistati neli proovi. CL registreeriti ka askorbiinhappe, kvertsetiini ja tokoferooli lahuste puhul viie erineva kontsentratsiooniga iga antioksüdandi jaoks. Seejärel arvutati keetmiste ja infusioonide proovide OAU ümber kvertsetiiniks.

Luminooli, mädarõika peroksidaasi ja vesinikperoksiidi kontsentratsioonid valiti selliselt, et määrata ravimtaimsete materjalide vesiekstraktide antioksüdantne võime vastuvõetava aja jooksul (mitte rohkem kui 10 min). Selle aja jooksul ilmuvad antioksüdantide askorbaadi ja flavonoidi kvertsetiini (taimsete materjalide peamised antioksüdandid) kemoluminestsentsi kõverad.

jõudis platoole, mis viitab antioksüdantide täielikule hävimisele süsteemis. Uuritud proovide lahjendused ja standardsete antioksüdantide lahuste kontsentratsioonid (näidatud jooniste pealkirjades) valiti selliselt, et kõik CL kineetilised kõverad mõõdeti seadme sama tundlikkuse juures.

Antioksüdantide võime arvutati pindala (AS) muutuse põhjal kemoluminestsentsi (valgussumma) kineetilise kõvera all antioksüdanti sisaldava aine lisamisel. Selleks arvutasime ilma antioksüdandita süsteemile S0 ja lahutasime sellest pindala SS, mis iseloomustab süsteemi, kuhu antioksüdant lisati. AS väärtus sõltub kemiluminomeetri tundlikkusest ja mõõtmistingimustest. Suhe AS/C ■ V (kus C on uuritava bioloogilise materjali kontsentratsioon küvetis, g/l ja V on küveti maht, l) väljendab 1 g uuritava materjali antioksüdantset võimekust, st taimset toorainet.

Sarnasel viisil arvutasime standardse antioksüdandi, näiteks kvertsetiini, lahuse antioksüdandivõime ASa, mis asetati samasse ruumalasse reaktsioonisegu. Suhe AS/CÄ ■ V (kus CA on antioksüdandi massikontsentratsioon küvetis, g/l) väljendab 1 g antioksüdandi antioksüdantset võimekust.

Iga standardse antioksüdandi puhul registreeriti mitme kontsentratsiooniga lahuste signaal, et tagada arvutuste lineaarne seos ja saadud tulemuste reprodutseeritavus. Tõepoolest saadi signaali lineaarne sõltuvus (ASa = kA ■ CA) kontsentratsioonist, millest arvutati stöhhiomeetriline koefitsient kA. Fisheri kriteeriumi kohaselt on standardsete antioksüdantide kA väärtused statistiliselt olulised tõenäosusega 0,975. Järgmisena registreeriti nelja kontsentratsiooni signaal iga nelja taimeproovi kohta ja kõigi proovide puhul saadi signaali lineaarne sõltuvus kontsentratsioonist (AS = k ■ C), millest arvutati stöhhiomeetriline koefitsient k. Tõenäosusega 0,975 (Fisheri test) on taimeproovide puhul saadud k väärtused statistiliselt olulised. Taimse materjali kogu antioksüdantne võime standardse antioksüdandi massina (mg%) leiti valemiga

OAE = k ■ 105. k

Väärtused esitati aritmeetilise keskmise ± standardhälbena (M ± 5) p juures<0,05.

UURIMISTULEMUSED

Kemoluminestsentsi kineetika uuring naatriumaskorbaadi juuresolekul (joonis 1) näitas, et seda antioksüdanti iseloomustab varjatud periood, mil CL on peaaegu täielikult alla surutud. Selle kestus on võrdeline antioksüdandi kogusega süsteemis. Sel juhul ei muutu ei CL-kõverate kalle ega CL-i intensiivsus platool. Seda seletatakse asjaoluga, et askorbiinhape on tugev antioksüdant, mis peatab kõik süsteemis moodustunud radikaalid, sealhulgas luminooli radikaalid, ja CL ei arene enne, kui kogu askorbaat on oksüdeerunud.

Tokoferooli toime (joonis 2) väljendus CL intensiivsuse vähenemises platool, mis on tüüpiline nõrkadele antioksüdantidele, kuigi tokoferooli peetakse üheks kõige enam.

võimsad antioksüdandid. Võib-olla on see lahknevus tingitud asjaolust, et meie katses olid vabad radikaalid vesilahuses, samas kui tokoferooli toimet uuritakse tavaliselt mittepolaarses keskkonnas. Uuringus, kus radikaalide allikaks oli tsütokroom c kompleks kardiolipiiniga ja reaktsioon luminooliga toimus selles kompleksis, oli tokoferoolil keskmise tugevusega antioksüdandi omadused.

Olles uurinud erinevate kontsentratsioonide kvertsetiini mõju meie süsteemile (joonis 3) ning võrreldes selle ja naatriumaskorbaadi ja tokoferooli kineetilisi kõveraid, võib märkida, et kvertsetiini peamine toime avaldub kvertsetiini kalde muutuses. kõverad, st CL-i arengukiirus, mis on tüüpiline keskmise tugevusega antioksüdantidele.

Kõigi uuritud keetmiste CL-kõverad (joonis 4) sarnanevad kvertsetiini kõveratega, mille lõpus, st saavutamisel, CL-i intensiivsus veidi väheneb.

Aeg, min

Riis. 1. Naatriumaskorbaadi mõju kemoluminestsentsi kineetikale

Süsteemi komponentide kontsentratsioonid: luminool - 40 µM, mädarõika peroksidaas - 4 nM, vesinikperoksiid - 100 µM. Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,05 uM; 3 - 0,10 uM; 4 - 0,15 uM; 5-0,2 uM; 6-0,25 uM naatriumaskorbaati.

platoo. Nagu töös näidatud, on selline käitumine tüüpiline keskmise tugevusega antioksüdantidele, mis meie puhul hõlmavad polüfenoole – flavonoide ja tanniine. Vaarika viljade infusioonil (joon. 4, D) on platoo tasemel märgatav kemoluminestsentsi vähenemine, mis on tüüpiline nõrkadele antioksüdantidele, nagu antud juhul tokoferool. Kvertsetiini ja tokoferooli osas sisaldab vaarika infusioon 4,7 ± 0,9 µmol/g kvertsetiini ja 11,9 ± 0,8 µmol/g tokoferooli.

Kui võrrelda nelja uuritud taimse materjali vesiekstrakti erinevate kontsentratsioonide korral saadud kemoluminestsentsi kõveraid, siis selgus, et keskmiste ja nõrkade antioksüdantide panus proovide koguantioksüdantsusesse vähenes järgmistes seeriates: vaarika viljade infusioon (joon. 4). , D), kibuvitsa keetmine (joonis 4, B), pihlaka viljade keetmine (joonis 4, A), viirpuu viljade keetmine (joonis 4, B). Tabelis on toodud AS-i väärtused, mis põhinevad uuritava aine kontsentratsioonil C küvetis ja kogu antioksüdandivõime väärtused kvertsetiinis.

TULEMUSTE ARUTELU

Katsete käigus saadud andmeid ja nende põhjal arvutatud uuritud objektide OAE väärtusi võrreldi neis sisalduvate peamiste antioksüdantide sisaldusega, mis määrati keemiliste analüüsimeetodite abil. Vaatamata sellele, et positiivne korrelatsioon antioksüdantide üldkoguse ja TAU vahel erinevates objektides on vaieldamatu, on nende näitajate vahel siiski märgatavaid erinevusi. Näiteks kui võtta flavonoidide, parkainete ja askorbiinhappe sisalduse summa, siis osutub see kõigi uuritud objektide arvestuslikust TAU-st suuremaks, välja arvatud viirpuuviljade keetmine (tabel).

Ka teised teadlased on näidanud, et keemilise analüüsi tulemused ja kemoluminestsentsmeetodil määratud TAU väärtus ei lange sageli kokku. Töötamisel määratakse kogu antioksüdantide maht

46 Aeg, min

ma" "h chi----.

Riis. 2. Tokoferooli mõju kemoluminestsentsi kineetikale

Süsteemi komponentide kontsentratsioonid: luminool - 40 µM, mädarõika peroksidaas - 4 nM, vesinikperoksiid - 100 µM. Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,01 uM; 3 - 0,025 uM; 4 - 0,06 uM; 5-0,1 uM; 6-0,2 uM tokoferooli.

46 Aeg, min

Riis. 3. Kvertsetiini mõju kemoluminestsentsi kineetikale Süsteemi komponentide kontsentratsioonid: luminool - 40 µM, mädarõika peroksidaas - 4 nM, vesinikperoksiid - 100 µM. Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,02 uM; 3 - 0,03 uM; 4 - 0,04 uM; 5-0,05 uM; 6-0,06 uM kvertsetiini.

Aeg, min

46 Aeg, min

46 Aeg, min

120 I 100 80\60 40 20

46 Aeg, min

Riis. 4. Pihlaka viljade (A), viirpuu (B), kibuvitsamarjade (C) ja vaarika viljade infusiooni (D) mõju kemoluminestsentsi kineetikale Süsteemi komponentide kontsentratsioonid: luminool - 40 µM, mädarõika peroksidaas - 4 nM, vesinikperoksiid - 100 uM. (A) Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l pihlaka viljade keetmine. (B) Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l viirpuu viljade keetmine. (B) Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l kibuvitsamarja keetmine. (D) Kõverad: 1 - kontrollproov; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g/l vaarika viljade infusioon.

peroksidaas-luminool-vesinikperoksiid süsteemis korreleerus triterpeeniühendite sisaldusega. Samas ei täheldanud samade autorite töödes, kus uurimisobjektiks oli teine ​​taim, OAE korrelatsiooni ühegi ainerühma, sealhulgas flavonoidide sisaldusega.

Sellised lahknevused on seotud vähemalt kolme teguriga. Esiteks on oluline antioksüdantide aktiivsus ehk nende koostoime määr radikaalidega, mis on erinevate taimeproovis sisalduvate antioksüdantide puhul erinev. Izmailovi sõnul korreleeruvad meksidooli, tokoferooli ja kvertsetiini vastavate reaktsioonide kiiruskonstandid 0,04: 2: 60. Teiseks võib iga antioksüdandi molekul, sattudes keemilisesse reaktsiooni, katkestada erineva arvu radikaale. Töö kohaselt lõid kvertsetiin, kusihape ja askorbiinhape reageerinud antioksüdandi molekuli kohta vastavalt 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 ja 0,5 ± 0,2 radikaali (kasutati hemin-H2O2-luminooli süsteemi). Kolmandaks võib uuringu tulemusi mõjutada peroksidaasi aktiivsuse olemasolu taimeproovides endis, nagu ka töös, aga ka kaltsiumi sisaldus proovides, mis, nagu tööst nähtub, on võimeline suurendama. mädarõika peroksüdaasi aktiivsus teatud tingimustel. See toob tavaliselt kaasa rohkem

kõrgem CL intensiivsus platool kui kontrollkõveratel, mida me aga ei täheldanud.

Esimene tegur piirab järsult sellise parameetri kasutamist valguse summa muutmisena, kuna kemoluminestsentsi mõõtmise aeg peab olema pikem kui kõigi uuritavas proovis sisalduvate antioksüdantide kulumise aeg. Selle hetke toimumist saab hinnata ainult kemoluminestsentsi kineetikat mõõtes. Lisaks alahinnatakse järsult nõrkade antioksüdantide panust OAU-sse, kuna nende täieliku oksüdeerumise aeg on mitu korda pikem kui vastuvõetav mõõtmise kestus (10-20 min).

Antioksüdandi stöhhiomeetriline koefitsient on veelgi olulisem. Selle poolt katkestatud radikaalide arv n on võrdne

kus p on stöhhiomeetriline koefitsient ja Am on antioksüdandi kontsentratsiooni muutus mõõtmisaja jooksul, meie puhul uuritava aine algkontsentratsioon uuritavas proovis.

Luminestsentsi valguse summa erinevus antioksüdandi puudumisel ja selle juuresolekul on võrdeline n-ga Peatatud radikaalide koguarv on võrdne n = Y.p. m,

kus on konkreetse antioksüdandi stöhhiomeetriline koefitsient ja m on selle kontsentratsioon mõõtmise ajal

Uurimisobjekt Flavonoidid, mg%* Tanniinid, mg%* Askorbiinhape, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. ühikut TAU, mg% kvertsetiin

Pihlaka viljade keetmine 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Kibuvitsamarjade keetmine 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Viirpuu viljade keetmine 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Kuivatatud vaarika puuviljade infusioon 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Märkus: * - kirjanduse andmed, . AS - valguse summa muutus proovi jaoks, rel. ühikut, C - proovi kontsentratsioon küvetis, g/l. Arvutatud väärtused on usaldusväärsed p<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

Renia. Peatatud radikaalide koguarv ei ole kindlasti võrdne antioksüdantide koguhulgaga, kuna pt-koefitsiendid ei ole mitte ainult võrdsed ühtsusega, vaid erinevad ka oluliselt erinevate antioksüdantide puhul.

Väärtus n on võrdeline valguse summade erinevusega, mis on teatud aja jooksul mõõdetud antioksüdanti sisaldava proovi ja antioksüdante mittesisaldava kontrollproovi vahel:

kus k on koefitsient, mis on samadel mõõtmistingimustel konstantne.

Artiklis käsitletud meetod võimaldab määrata kogu antioksüdantide võimekust, keemiline analüüs aga antioksüdantide kogusisaldust tootes. Seetõttu näib kemoluminestsentsi meetod olevat informatiivsem kui keemilised analüüsid.

Valisime tingimused taimse tooraine kogu antioksüdantse võimekuse hindamiseks, registreerides kemoluminestsentsi kineetika mädarõika peroksidaasist, vesinikperoksiidist ja luminoolist koosnevas süsteemis (komponentide kontsentratsioonid - vastavalt 4 nM, 100 µM ja 40 µM; 20 mM fosfaati puhver, pH 7,4),

tagas tugevate antioksüdantide (askorbiinhape) ja keskmise tugevusega antioksüdantide (kvertsetiin) oksüdatsiooni 10 minutiga. Selline mõõtmise kestus on mugav ja tagab vajaliku mõõtmiskvaliteedi.

Kemoluminestsentsi kineetika analüüs näitas, et uuritavatel objektidel (pihlakaviljade, kibuvitsamarjade, viirpuu dekoktid ja vaarikaviljade infusioon) on peamisteks antioksüdantideks keskmise tugevusega antioksüdandid, sh flavonoidid, ja nõrga tugevusega (tokoferool jt). Kemoluminestsentsvalguse summa vähenemise põhjal arvutati uuritavate objektide antioksüdantide summaarne võimekus. Saadud TAU väärtuste võrdlemine keemilise analüüsi tulemustega näitas, et tooted, mis sisaldavad sama kogust erineva vahekorraga antioksüdante, võivad erineda oma võime poolest kaitsta keha tõhusalt vabade radikaalide kahjulike mõjude eest. Kirjeldatud tehnika on paljutõotav erinevate antioksüdantide segu sisaldavate taimsete objektide uurimiseks. Samal ajal iseloomustab seda lihtsus ja madal uurimistöö hind. Kemoluminestsentsi kineetika mõõtmise kombinatsioon reaktsioonide matemaatilise modelleerimisega mitte ainult ei automatiseeri TAU määramise protsessi, vaid määrab ka üksikute antioksüdantide rühmade panuse indikaatorisse.

Kirjandus

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Vabad radikaalid kui regulatiivsetes ja patoloogilistes protsessides osalejad. In: Grigoriev A.I., Vladimirov Yu.A., toimetajad. Põhiteadused – meditsiin. Biophys. kallis. tehn. M.: MAX Press; 2015. kd 1. lk. 38-71.

3. Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V. Antioksüdantide uurimise meetodid. Chem. rast. toored materjalid. 2004; (3): 63-75.

4. Vasiliev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Butovska D. I., Trofimov A. V. Kalkoonide antioksüdantne aktiivsus. Reagentide ja vaheühendite reaktiivsuse kemiluminestsentsmääramine ning energiate ja struktuuride kvantkeemiline arvutamine. Kineetika ja katalüüs. 2010; 51 (4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil"ev RF, Veprintsev TL. Peroksü-

radikaalide poolt vahendatud kemoluminestsents: mehaaniline mitmekesisus ja antioksüdantide analüüsi põhialused. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Antiradikaalsuse hindamine H2O2-hemiini poolt indutseeritud luminooli kemoluminestsentsi järgi. J Agric Food Chem. 2003 3. detsember; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V. Vabad radikaalid ja raku kemoluminestsents. Uspekhi biol. chem. 2009; 49: 341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kineetiline kemoluminestsents kui meetod vabade radikaalide reaktsioonide uurimiseks. Biofüüsika. 2011; 56 (6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Antioksüdandi aktiivsuse määramine kemoluminestsentsi kineetika mõõtmise teel. Fotobioloogia ja fotomeditsiin. 2011; 7 (2): 70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminooli luminestsents, mis on indutseeritud 2,2"-aso-bis(2-amidinopropaani) termolüüsiga. Tasuta

Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminooli luminestsentsi summutamise kasutamise kohta SOD aktiivsuse hindamiseks. Tasuta Radic Biol Med. 1994 juuni; 16 (6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Antioksüdantide kogupotentsiaali (TRAP) ja antioksüdantide kogureaktiivsuse hindamine luminooliga võimendatud kemoluminestsentsi mõõtmiste põhjal. Tasuta Radic Biol Med. 1995 veebruar; 18 (2): 153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Luminooli luminestseeruva peroksüdatsiooni mehhanismi uurimine peatatud voolu meetodite abil. J Biol Chem. 1968 25. september; 243 (18): 4706-14.

21. Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. Antioksüdantide määramine aktiveeritud kemoluminestsentsi abil, kasutades 2,2"-aso-bis(2-amidinopropaani). Vestn. MGU. Ser. 2. Chem 2012;53(3): 187-93.

24. NSV Liidu Tervishoiuministeerium NSV Liidu Riiklik Farmakopöa XI toim. Vol. 2 „Üldised analüüsimeetodid. Ravimtaimede tooraine." M.: Meditsiin; 1987. Lk. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. Kibuvitsa ekstraktsioonipreparaatide uurimine. apteek. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Viirpuu viljade uurimine, kasutades erinevaid konserveerimis- ja vesiekstraktsiooni meetodeid. apteek. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Puuviljade bioloogiliselt aktiivsed ained ja hariliku vaarika vesiekstraktid. apteek. 2014; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Viirpuu viljade bioloogiliselt aktiivsete ainete uurimine - tooraine homöopaatiliste maatriksi tinktuuride valmistamiseks. Laupäeval teaduslik tr. XXIV Moskva materjalide põhjal. rahvusvaheline homöopaat. konf. “Homöopaatilise meetodi arendamine kaasaegses meditsiinis”; 24.-25.01.2014; Moskva. M.; 2014. lk. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Erinevate säilitusmeetodite ravimtaimede toorainete bioloogiliselt aktiivsete ainete koostise uurimine. Laupäeval teesid, mis põhinevad XX Rossi materjalidel. rahvuslik kongr. "Inimene ja meditsiin"; 15.-19.aprill 2013; Moskva. M.: EKOOnis; 2013. lk. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M. A., Neiman P. L. Peroksidaasi aktiivsuse uurimine mädarõika risoomide ja juurte ekstraktides ning selle stabiilsus erinevate mõjude suhtes. Vestn. Moskva Riiklik Ülikool. Ser. 2. Chem. 2006; 47 (5): 350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Svobodnye radikaly kak uchastniki regulaatornykh i patologicheskikh protsessov. In: Grigor"ev AI, Vladimirov YuA, toimetajad. Fundamental"nye nauki - medicitsine. Biofizicheskie meditsinskie technologii. Moskva: MAKS Press; 2015.v. 1. lk. 38-71. vene keel.

2. Chanda S, Dave R. In vitro mudelid antioksüdantse toime hindamiseks ja mõned antioksüdantsete omadustega ravimtaimed: ülevaade. Afr J Microbiol Res. 2009 detsember; 3 (13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal"tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Himija Rastitel"nogo Syr"ja. 2004; (3): 63-75. Vene.

4. Vasil"ev RF, K""ncheva VD, Fedorova GF, B""tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti i kvantovo-khimicheskii raschet energii i stroeniya reagentov ja intermediatov. Kineetika ja katalüüs. 2010; 51 (4): 533-41. vene keel.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA jt. Kurkumiiniga seotud ühendite antioksüdantne potentsiaal, mida uuriti kemoluminestsentsi kineetika, ahela katkestamise efektiivsuse, puhastusaktiivsuse (ORAC) ja DFT arvutuste abil. Beilstein J Org Chem. 2015 11. august; 11: 1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil"ev RF, Veprintsev TL. Peroksüradikaalide vahendatud kemoluminestsents: mehaaniline mitmekesisus ja antioksüdantanalüüsi põhialused. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil"ev RF. Lihtne kemoluminestsentsanalüüs taimsete lipiidide antioksüdatiivsete omaduste jaoks: põhialused ja illustreerivad näited. Analyst. 2009 oktoober; 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-hemiini poolt indutseeritud luminooli antiradikaalivõime hindamine

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Svobodnye radikaly i kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49: 341-88. vene keel.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya kak metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. Biofüüsika. 2011; 56 (6): 1081-90. vene keel.

11. Izmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metoodika izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobioloogia ja fotomeditsiin. 2011; 7 (2): 70-6. vene keel.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminooli luminestsents, mis on indutseeritud 2,2"-aso-bis(2-amidinopropaani) termolüüsiga. Free Radic Res Commun., 1992, 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminooli luminestsentsi summutamise kasutamise kohta SOD aktiivsuse hindamiseks. Tasuta Radic Biol Med. 1994 juuni; 16 (6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Nähtav kemoluminestsents, mis on seotud methemoglobiini või oksühemoglobiini vahelise reaktsiooniga vesinikperoksiidiga. Photochem Photobiol. 1994 nov; 60 (5): 405-11.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Antioksüdantide kogupotentsiaali (TRAP) ja antioksüdantide kogureaktiivsuse hindamine luminooliga võimendatud kemoluminestsentsi mõõtmiste põhjal. Tasuta Radic Biol Med. 1995 veebruar; 18 (2): 153-8.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV jt. Liposomaalsete flavonoolide antioksüdantse aktiivsuse in vitro hindamine HRP-H2O2-luminooli süsteemi abil. J Mikrokapsel. 2011; 28 (4): 258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Mehhanismi uurimine

luminooli luminestseeruv peroksüdatsioon peatatud voolu meetodite abil. J Biol Chem. 1968 25. september; 243 (18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Viie ravimtaimeekstrakti fütokeemilised omadused, vabade radikaalide püüdmine ja neuroprotektsioon. Evid Based Complement Alternatiivne Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 10. august.

19. Chang CL, Lin CS. Terminalia chebula Retziuse ekstraktide fütokeemiline koostis, antioksüdantne aktiivsus ja neuroprotektiivne toime. Evid Based Complement Alternatiivne Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10,1155/2012/125247. Epub 2011, 5. juuli.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Erinevate flavonoidide antioksüdantse aktiivsuse hindamine kemoluminestsentsmeetodil. AAPS PharmSci. 2003; 5 (2): 111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksüdantide aktiivsuse meetod khemilluminestsentsi ispol"zovaniem 2,2"-aso-bis(2-amidinopropaan). Moskva ülikooli keemiabülletään. 2012; 53 (3): 187-93. vene keel.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. Optimeeritud kemoluminestsentsanalüüsi rakendamine taimeekstraktide antioksüdantse võime määramiseks. Luminestsents. 2012 nov-detsember; 27 (6): 505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Madala molekulmassiga antioksüdantide üldkogus kokkuvõtliku parameetrina, kvantifitseeritud bioloogilistes proovides kemoluminestsentsi inhibeerimise testiga. Nat Protoc. 2010 sept; 5 (10): 1627-34.

24. Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. 11. väljaanne Iss. 2. "Obštšie meetod analüüs."

Lekarstvennoe rastitel "noe syr"e". Moskva: Medltsina; 1987. lk 147-8. Vene k.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. apteek. 2012; (2): 14-6. vene keel.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii i vodnykh izvlechenii. Farmatsia. 2010; (5): 16-8. vene keel.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsia. 2014; (1): 8-10. vene keel.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr"ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. Moskva 14. rahvusvahelise homöopaatia konverentsi "Razvitie gomeopaticheskogo methoda v" Moskva "Razvitie gomeopaticheskogo methoda v";20-4. jaanuar 20-4;20-4. 014. lk 146- 7. Vene keel.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicalheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr"e razlichnykh sposobov konservatsii. Venemaa 20. rahvuskongressi "Chelovek i lekarstvo" toimetised; 2013 aprill 1519; Moskva. Moskva: EkOOnis; 2013. lk. 184-90. vene keel.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktakh iz kornevishcha i kornei khrena i ee stabil"nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moscow University Chemistry Bulletin. 2006; 47 (5): 350-2. Vene.

1 Bolshakova L.S. 1Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Föderaalne riigieelarveline kõrgharidusasutus "Oryoli osariigi majandus- ja kaubandusinstituut"

2 Föderaalne riigieelarveline asutus "Kemikaliseerimise ja põllumajandusliku radioloogia keskus "Orlovsky"

3 Föderaalne riigieelarveline kõrgharidusasutus "Riigiülikool – haridus-, teadus- ja tootmiskompleks"

Uuriti kemoluminestsentsi kasutamise võimalust toitainete antioksüdantse aktiivsuse hindamiseks. Kavandatav meetod põhineb luminooli kemoluminestsentsil leeliselises keskkonnas, mille intensiivsus sõltub peroksiidide hulgast kemoluminestsentsproovis. Kemiluminestsentsi registreerimiseks kasutati välja töötatud seadet, mis sisaldas doseerimispumpa, valguskindlat kambrit, klaasist vaakumfotokordistit ja arvutisüsteemi. Kemoluminestsentsi suurendamiseks lisati luminoolile kaaliumraudsulfiidi lahust. Muutused kemoluminestsentsi intensiivsuses registreeriti analüüsitud proovi luminoolilahusesse viimise hetkel. Analüüsitud proovina kasutati madalal temperatuuril kuivdestilleerimisel saadud võililleekstrakti. See sisaldab fenoolseid ühendeid, mis on tuntud oma kõrge antioksüdantse toime poolest. On kindlaks tehtud, et kemoluminestsentsmeetodit saab kasutada erinevate toiduühendite antioksüdantsete omaduste määramiseks.

Uuriti kemoluminestsentsi kasutamise võimalust toitainete antioksüdantse aktiivsuse hindamiseks. Kavandatav meetod põhineb luminooli kemoluminestsentsil leeliselises keskkonnas, mille intensiivsus sõltub peroksiidide hulgast kemoluminestsentsproovis. Kemiluminestsentsi registreerimiseks kasutati välja töötatud seadet, mis sisaldas doseerimispumpa, valguskindlat kambrit, klaasist vaakumfotokordistit ja arvutisüsteemi. Kemoluminestsentsi suurendamiseks lisati luminoolile kaaliumraudsulfiidi lahust. Muutused kemoluminestsentsi intensiivsuses registreeriti analüüsitud proovi luminoolilahusesse viimise hetkel. Analüüsitud proovina kasutati madalal temperatuuril kuivdestilleerimisel saadud võililleekstrakti. See sisaldab fenoolseid ühendeid, mis on tuntud oma kõrge antioksüdantse toime poolest. On kindlaks tehtud, et kemoluminestsentsmeetodit saab kasutada erinevate toiduühendite antioksüdantsete omaduste määramiseks.

Bibliograafiline link

Panichkin A.V., Bolšakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. KEEMILUMINETSTSSSI KASUTAMINE TOIDUAINETE ANTIOKSIDANTSTE OMADUSTE HINDAMISEKS // Ratsionaalne toitumine, toidu lisaained ja biostimulandid. – 2014. – nr 6. – Lk 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (juurdepääsu kuupäev: 17.12.2019). Toome teie tähelepanu kirjastuse "Loodusteaduste Akadeemia" poolt välja antud ajakirjad

lõputöö

1.4 Antioksüdantide uurimismeetodid

antioksüdantne aktiivsus klassifitseeritakse: avaldunud AOA registreerimismeetodite järgi (mahuline, fotomeetriline, kemoluminestsents, fluorestseeruv, elektrokeemiline); oksüdatsiooniallika tüübi järgi; oksüdeeritava ühendi tüübi järgi; oksüdeeritud ühendi mõõtmise meetodil.

Kõige tuntumad meetodid antioksüdantse aktiivsuse määramiseks on aga:

1 TEAC (troloksi ekvivalentne antioksüdantide võime): meetod põhineb järgmisel reaktsioonil:

Metmüoglobiin + H 2 O 2 > Ferrüülglobiin + ABTS > ABTS * + AO.

Troloxi ekvivalentide meetod (TEAC) põhineb antioksüdantide võimel redutseerida 2,2-asinobis radikaali katioone (ABTS) ja seeläbi pärssida neeldumist spektri pika lainepikkuse piirkonnas (600 nm). Meetodi oluline puudus on kaheetapiline reaktsioon radikaali tekitamiseks. See pikendab analüüsiaega ja võib suurendada tulemuste hajumist hoolimata asjaolust, et analüüsiks kasutatakse standardiseeritud reaktiivide komplekti.

2 FRAP (rauda redutseeriv antioksüdant): meetod põhineb järgmisel reaktsioonil:

Fe(III)-tripüriditriasiin+AO>Fe(II)-tripüridüültriasiin.

Rauda redutseeriv/antioksüdantne võime (FRAP). Siin kasutatav reaktsioon on Fe(III)-tripüridüültriasiini redutseerimine Fe(II)-tripüridüültriasiiniks. Selle meetodi abil ei saa aga määrata teatud antioksüdantide, näiteks glutatiooni määramist. See meetod võimaldab madala molekulmassiga antioksüdante otse määrata. Madala pH korral kaasneb Fe(III)-tripüridüültriasiini kompleksi redutseerimisega Fe(II) kompleksiks intensiivne sinine värvus. Mõõtmised põhinevad antioksüdantide võimel pärssida reaktsioonisegus tekkivate reaktsiooniliikide oksüdatiivset toimet. Seda meetodit on lihtne, kiire ja odav rakendada.

3 ORAC (hapnikuradikaali neeldumisvõime): meetod põhineb järgmisel reaktsioonil:

Fe(II)+H 2 O 2 >Fe(III) + OH*+AO>OH* + Luminol.

Hapnikuradikaali neeldumisvõime (ORAC) määramine. Selle meetodi puhul registreeritakse substraadi (fükoerütriini või fluorestseiini) fluorestsents, mis tekib selle interaktsiooni tulemusena ROS-iga. Kui uuritav proov sisaldab antioksüdante, täheldatakse fluorestsentsi vähenemist võrreldes kontrollprooviga. Selle meetodi töötas algselt välja dr Guohua Kao riiklikus vananemisinstituudis 1992. aastal. 1996. aastal tegi dr Kao koostööd dr Ronald Pryeriga USDA vananemisuuringute keskuse ühisrühmas, kus poolautomaatset meetodit kasutati. loodud.

4 TRAP (täielik radikaalide püüdmise antioksüdantide parameeter): meetod põhineb järgmisel reaktsioonil:

AAPH+AO>AAPH* + PL (FE).

See meetod kasutab ära antioksüdantide võimet suhelda peroksüülradikaaliga 2,2-asobis(2-amidinopropaan)divesinikkloriid (AAPH). TRAP-i modifikatsioonid hõlmavad analüütilise signaali salvestamise meetodeid. Kõige sagedamini interakteerub peroksüradikaal AAPH analüüsi viimases etapis luminestseeruva (luminool), fluorestseeruva (diklorofluorestseiindiatsetaat, DCFH-DA) või muu optiliselt aktiivse substraadiga.

Vees lahustuvat E-vitamiini derivaati Trolox (6-hüdroksü-2,5,7,8-tetrametüülkromaan-2-karboksühape) kasutatakse TEAC-, ORAC- ja TRAP-meetodite standardina.

Viimasel ajal on suurenenud huvi elektrokeemiliste meetodite kasutamise vastu, et hinnata antioksüdantset aktiivsust. Nendel meetoditel on kõrge tundlikkus ja kiire analüüs.

Mõnede toiduainete antioksüdantse aktiivsuse hindamine toimub potentsiomeetria meetodil, mis põhineb antioksüdantsete ainete omadusel osaleda enool- (-OH) ja sulfhüdrüül- (-SH) rühmade toimel redoksreaktsioonides.

Lahuste antioksüdantsete omaduste määramine põhineb antioksüdantide keemilisel interaktsioonil vahendajasüsteemiga, mis viib selle redokspotentsiaali muutumiseni. Elektrokeemiline element on anum, mis sisaldab enne redokspotentsiaali mõõtmist K-Na-fosfaadi puhverlahust, Fe(III)/Fe(II) vahendajasüsteemi ja kompleksset elektroodi. Antioksüdantset aktiivsust hinnatakse g-ekv/l.

Antioksüdandi aktiivsuse määramise amperomeetriline meetod põhineb uuritava aine oksüdeerumisel tekkiva elektrivoolu mõõtmisel tööelektroodi pinnal, mis on teatud potentsiaali all. Amperomeetrilise meetodi tundlikkuse määrab nii tööelektroodi olemus kui ka sellele rakendatav potentsiaal. Polüfenoolide ja flavonoidide amperomeetrilise detektori avastamispiir on nanopikogrammi tasemel, nii madalate kontsentratsioonide korral on erinevate antioksüdantide koos esinemise korral väiksem tõenäosus nende vastastikuseks mõjuks, eelkõige sünergia nähtuse avaldumiseks. . Meetodi puudused hõlmavad selle spetsiifilisust: nendes tingimustes ei saa analüüsida antioksüdante, mis ise on hapniku epiirkonnas oksüdeerunud või redutseeritud. Meetodi eelised hõlmavad selle kiirust, eesnäärme ja tundlikkust.

Galvanostaatiline kulomeetria meetod, milles kasutatakse elektriliselt genereeritud oksüdante – meetod on rakendatav rasvlahustuvate antioksüdantide analüüsimisel.

Askorbiinhappe määramiseks on välja töötatud erinevaid meetodeid:

amperomeetriline meetod, kasutades nikkel(II)heksatsüanoferraadi kilega modifitseeritud alumiiniumelektroodi lihtsa sukeldamisega lahusesse;

meetod askorbiinhappe tahke faasi spektrofotomeetriliseks ja visuaalseks testmääramiseks, kasutades Wawele reagendiga modifitseeritud ränihappekserogeeli ja indikaatorpulbrina vaske (II);

askorbiinhappe kemoluminestsentsmääramise võib läbi viia voolu-injektsioonimeetodil, kasutades rodamiini B kemoluminestsentsreaktsiooni tseeriumiga (IV) väävelhappekeskkonnas.

askorbiinhappe määramine vahemikus 10 -8 -10 -3 g/cm 3 anoodvoltameetria abil vesi- ja vesi-orgaanilises keskkonnas.

Kõige tavalisem on FRAP-meetod, kuna see on kiire ja väga tundlik. Viimastel aastakümnetel on välja töötatud suur hulk erinevaid meetodeid antioksüdantse aktiivsuse määramiseks FRAP-meetodi abil (tabel 1).

Tabel 1 FRAP meetodi väljatöötamine ja selle rakendamine erinevate objektide antioksüdantse aktiivsuse määramiseks

				Analüüsi objektid	Märkmed
				Vereplasma	t = 4 min. Uuriti reaktsiooni stöhhiomeetriat ja aditiivsust.
				Tee, vein	Polüfenoolidest tingitud AOA määramine
					Võrreldi erinevate teesortide AOA väärtusi
Pulido, Bravo, Saura-Calixto				Mudellahendused	t = 30 min. Ilmnes mittevesilahuselise lahusti mõju
				Taimed
				Veri, kude	PIA meetod. Võõrainete mõju on testitud.
Firuzi, Lacanna, Petrucci e.a.				Mudellahendused	Uuriti erinevate AO-de määramise tundlikkust nende struktuuri ja redokspotentsiaali funktsioonina.
Katalinic, Milos,				Erinevad veinid
Temerdašev, Tsyupko ja teised.				Mudelsegud
Loginova, Konovalova				Ravimid Ravimid	Testimis viis
Temerdašev, Tsyupko ja teised.				Kuivad punased veinid	AOA korrelatsioon teiste veinikvaliteedi näitajatega
Tabeli 1 jätk
				Mudelsegud	Uuriti erinevate AO-de määramise tundlikkust
Veršinin, Vlasova, Tsjupko				Mudelsegud	Selgus, et signaal ei olnud aditiivne, kui puudus oksüdeeriv aine
Anisimovitš, Deineka ja teised.				Mudellahendused	AOA hindamiseks on välja pakutud kineetilised parameetrid.

Märkused: Tavapäraselt tähistatud: FIA-voolu süstimise analüüs, TPTZ-tripüridüültriasiin, DIP-2,2,-dipüridüül, PHEN-o-fenantroliin, DPA-püridiindikarboksüülhape, FZ-ferrosiin, AA-askorbiinhape, CT-katehhool, t - säriaeg, min.

Valkude ja polüelektrolüütide koostoime vesilahustes

Valgu-polüelektrolüüdi komplekside iseloomustamiseks kasutatakse erinevaid analüütilisi meetodeid. Instrumentaalsed meetodid annavad teavet struktuursete ja optiliste omaduste kohta ning määravad ka PEC-i sidumise dünaamika ja olemuse...

D-metalliühendite mõju veemolekuli dissotsiatsioonikiirusele bipolaarses membraanis

Uute BPM-ide sünteesimisel tuleks palju tähelepanu pöörata saadud proovide omaduste uurimisele, et valida sünteesitingimused, mis tagavad sünteesitud membraanide elektrokeemiliste omaduste paranemise...

Disainravimid ja sünteetilised kannabinoidid

Sünteetiliste kannabinoidide tuvastamist taimesegudes saab läbi viia erinevate füüsikalis-keemiliste meetoditega, nagu kromatograafia-massispektromeetria, gaasikromatograafia, õhukese kihi kromatograafia ja kõrgsurvevedelikkromatograafia...

Flavonoidide määramise meetodi väljatöötamine ravimtaimsetes materjalides

Kinolinoonide-2 süntees ja farmakoloogilised omadused

Uurimisobjekt: kinolinoon-2. Uurimismeetod: Arvutiprogrammi "Marvin JS" abil loodi aine struktuur. Seejärel saadeti ta edasiseks uurimiseks saidile "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php".

Soojusspektri meetod epoksüpolümeeri aurustumisproduktide uurimiseks

Tehnoloogia kõrgelt puhastatud kitosaani tootmiseks koorikloomade kestadest

Kitosaani molekulmassi määramine Kitosaani molekulmass määrati standardmeetodit kasutades viskoomeetriliselt. Lahused kontsentratsiooniga 0,05 ja 0,5 g/dl valmistati polümeeripulbri proovi lahustamisega atsetaatpuhvris (0...

Looduspargi territooriumi füsiograafilised omadused

1 Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Föderaalne riigieelarveline kõrgharidusasutus "Oryoli osariigi majandus- ja kaubandusinstituut"

2 Föderaalne riigieelarveline asutus "Kemikaliseerimise ja põllumajandusliku radioloogia keskus "Orlovsky"

3 Föderaalne riigieelarveline kõrgharidusasutus "Riigiülikool – haridus-, teadus- ja tootmiskompleks"

Uuriti kemoluminestsentsi kasutamise võimalust toitainete antioksüdantse aktiivsuse hindamiseks. Kavandatav meetod põhineb luminooli kemoluminestsentsil leeliselises keskkonnas, mille intensiivsus sõltub peroksiidide hulgast kemoluminestsentsproovis. Kemiluminestsentsi registreerimiseks kasutati välja töötatud seadet, mis sisaldas doseerimispumpa, valguskindlat kambrit, klaasist vaakumfotokordistit ja arvutisüsteemi. Kemoluminestsentsi suurendamiseks lisati luminoolile kaaliumraudsulfiidi lahust. Muutused kemoluminestsentsi intensiivsuses registreeriti analüüsitud proovi luminoolilahusesse viimise hetkel. Analüüsitud proovina kasutati madalal temperatuuril kuivdestilleerimisel saadud võililleekstrakti. See sisaldab fenoolseid ühendeid, mis on tuntud oma kõrge antioksüdantse toime poolest. On kindlaks tehtud, et kemoluminestsentsmeetodit saab kasutada erinevate toiduühendite antioksüdantsete omaduste määramiseks.

kemoluminestsents

antioksüdantne aktiivsus

peroksiidid

toitaineid

1. Vassiljev R.F. Keemiline sära // Keemia ja keemikud, 01.21.10. - URL: http://chemistry-chemists.com. (juurdepääsu kuupäev: 22.08.13).

2. Vladimirov Yu.A. Vabad radikaalid ja antioksüdandid // Vestn. RAMID. – 1998. – nr 7. – Lk 43–51.

3. Kondrašova E.A. Kemiluminestsents kui ensüümi immuunanalüüsi kõige tundlikum meetod ja selle rakendamine // Kliiniline laboridiagnostika. – 1999. – nr 9. – Lk 32.

4. Ljubimov, G. Yu. Kemiluminestsentsanalüüs // Immunoloogia. – 1991. – nr 1. – Lk 40–49.

5. Mayansky A.N., Nevmyatullin A.L., Chebotar I.V. Reaktiivne kemoluminestsents fagotsütoosisüsteemis // Mikrobioloogia. – 1987. – nr 1. – Lk 109–115.

6. Sherstnev M.P. Kaltsiumist sõltuvad ja kaltsiumist sõltumatud rajad rakkude kemoluminestsentsi tekitamiseks // Kemiluminestsentsi küsimused. – 1991. – nr 2. – Lk 1–4.

Tänapäeval esindab kemoluminestsents suurt teaduse valdkonda, mis asub keemia, füüsika ja bioloogia vahelisel kokkupuutel. Kemiluminestsentsiga toimub keemilise energia otsene muundamine elektromagnetiliste vibratsioonide energiaks, s.t. maailma sisse Kemoluminestsentsi abil saate teada, kuidas reaktsioon kulgeb, milline on selle mehhanism, mis on vajalik tehnoloogiliste protsesside tõhusaks ja tõhusaks elluviimiseks. Kui keemiatoote valmistamise tehnoloogilise protsessiga kaasneb kemoluminestsents, võib selle intensiivsus olla protsessi kiiruse mõõdik: mida kiirem reaktsioon, seda heledam on sära. Kemoluminestsentsreaktsiooni käigus saadakse energiarikkaid tooteid, mis seejärel valgust kiirgades energiat vabastavad, s.t keemiline energia muundatakse elektromagnetkiirguse energiaks.

Uuringu eesmärk on uurida kemoluminestsentsi kasutamise võimalust toitainete antioksüdantse aktiivsuse hindamiseks.

Uurimistulemused ja arutelu

Väga aktuaalne on toitainete antioksüdantse aktiivsuse hindamise probleem. Mõistet "antioksüdantne aktiivsus" kasutatakse konkreetse toote kasulikkuse näitamiseks sageli ilma keemilise või biokeemilise argumentatsioonita. Reeglina tähendab mis tahes aine antioksüdantne toime peroksiidisisalduse vähendamise efektiivsust. Peroksiidi väärtuse mõiste ei paljasta ka täielikult selle keemilist olemust, kuna see ei vasta täielikult konkreetse toiduaine metabolismi etappide kineetikale ja termodünaamikale. Lisaks kasutatakse seda väärtust rasvade kujul olevate lipiidide iseloomustamiseks. Oksüdatsiooniprotsessid ja peroksiidide moodustumine organismis ei toimu aga mitte ainult rasvade, vaid ka muude toiduainete tarbimisel. Teisisõnu võib öelda, et konkreetse toote peroksiidisisaldus on "kaalutud" teatud skaalal, kus "võrdluskaal" on peroksiidide poolt oksüdeeritud jodiidiooni kontsentratsiooniühik happelises keskkonnas. mille tulemusena moodustub molekulaarne jood:

I- - e → I; (1)

I + I → I20. (2)

Molekulaarse joodi tiitrimisel naatriumtiosulfaati sisaldava lahusega määratakse selle kontsentratsioon ja seetõttu määratakse oksüdeerivate jodiidiioonide kogus, s.o. peroksiidühendid, mida tegelikult nimetatakse peroksiidinumbriks. Peroksiidiarvu määramine seda tüüpi "kaalumise" abil põhineb joonisel fig. 1.

Riis. 1. Peroksiidisisalduse määramine naatriumtiosulfaadi abil

Seega määratakse võrrandist peroksiidide kontsentratsioon

С(I2) = ϒ(C[-O-O-]), (3)

kus ϒ on molekulaarse joodi kontsentratsiooni ja peroksiidide kontsentratsiooni vaheline korrelatsioonikoefitsient.

Meie poolt pakutav meetod peroksiidide määramiseks toodetes põhineb luminooli (C[lm]) kemoluminestsentsil aluselises keskkonnas, mille intensiivsus (Ichl) sõltub peroksiidide (C[-O-O-]) kontsentratsioonist kemoluminestsentsproov:

IHL = Ϧхл ω, (4)

kus Ϧhl on kemoluminestsentsi kvantsaagis; ω - peroksiidide reaktsioonikiirus:

khlC[-O-O-] C[lm] = ω, (5)

kus khl on reaktsioonikiiruse konstant või:

C[lm] khl Ϧkhl = K, (6)

IHL = K C[ -O-O-]. (7).

Peroksiidide kogus (-O-O-) määratakse valguse summaga (S):

S väärtus sõltub peroksiidi täieliku tarbimise astmest kemoluminestsentsreaktsioonis.

Konstandi K määramiseks koostatakse kalibreerimiskõver valguse summa S sõltuvuse peroksiidi kontsentratsioonist, mis määratakse tiitrimisega:

S = f(C[-O-O-]). (9)

Peroksiididena kasutatakse vesinikperoksiidi H2O2.

Seejärel võrreldakse võrranditest (3) ja (9) saadud andmeid. ϒ ja K võrdluse põhjal tehakse järeldus nende meetoditega peroksiidide määramise aluseks olevate reaktsioonimehhanismide kokkulangevuse kohta. Selgus, et selles peroksiidi kontsentratsioonivahemikus ϒ ja K on tegelikult omavahel kooskõlas ja seetõttu saab neid kasutada peroksiidiarvu määramiseks.

Kemiluminestsentsi täheldati leeliselises keskkonnas, mis sisaldas luminooli (5-amino-1,2,3,4-tetrahüdro-1,4-ftalasiindioon, 3-aminoftaalhappe hüdrasiid, H2L). See salvestati kemoluminestsentsseadega, sealhulgas klaasist vaakumfotokordistiga. Fotokordisti toiteallikaks on kõrgepinge alaldi (7), mis on ühendatud plokiga (9), mis võimendab fotokordisti signaali, mis salvestatakse arvutimonitori ekraanile (5).

Riis. 2. Analüüsitava toote kemoluminestsentsi registreerimine: 1 - doseerimispump; 2 - valguskindel kamber; 3 - peegel; 4 - küvett; 5 - arvutisüsteem; 6 - fotokordisti; 7 - kõrgepinge alaldi; 8 - seade, mis võimaldab määrata kemoluminestsentskiirguse spektripiirkonda; 9 - plokk, mis võimendab fotokordisti signaali

Doseerimispump (1) on vajalik analüüsitud proovi sisestamiseks küvetti (4), mis sisaldab luminooli kemoluminestsentslahust. See jaotur toimib kemoluminestsentslahusega süstitava proovi mikserina. Reaktsiooni kiiruse ja kemoluminestsentsi intensiivsuse suurendamiseks lisati luminoolile kaaliumraudsulfiidi lahust. Segamine toimub õhumullide abil, mis saadakse õhu pumpamisel läbi lahuse vedeliku. Valguskindlas kambris (2) asuv peegel (3) aitab paremini koguda valguskindlasse kambrisse paigaldatud fotokordisti (6) fotokatoodile langevat kemoluminestsentskiirgust. Dosaator võimaldab sisestada küvetti vajalikke vedelaid komponente ilma valgustihedat kambrit (2) katsete ajal avamata. Sel juhul sisenevad need vedelikud küvetti (4) läbi klaas- või plasttorude. Arvutisüsteem võimaldab registreerida helendusintensiivsuse I sõltuvust ajast t, see tähendab kemoluminestsentsi kineetikat:

Arvutisüsteem kajastab funktsioonis I = f(t) tõusu- ja languskonstandid, mis on seotud kemoluminestsentsi põhjustavate reaktsioonide kiiruskonstantidega, see tähendab nende kineetikaga. Kemoluminestsentskambris on seade (8), mis võimaldab määrata kemoluminestsentskiirguse spektripiirkonda, st sõltuvust:

I = f1(λ). (üksteist)

See plokk on kettakujuline kassett, millesse on paigaldatud piirfiltrid. Filtrite vahetamine toimub kettakasseti pööramisega horisontaaltelje suhtes, mis ühendab filtrite tasapinna keskpunkte ja fotokordisti fotokatoodi tasapinda.

Mõõtmisprotsess viiakse läbi järgmiselt:

1. Kinnitatakse fotokordisti reaktsioon toitepinge muutustele ja selle katoodile langeva etalonvalgusallika intensiivsuse muutustele.

2. Küvett täidetakse luminooli lahusega leeliselises keskkonnas.

3. Dosaator täidetakse analüüsitud prooviga.

4. Registreeritakse kemoluminestsentsi intensiivsuse sõltuvus ajast t. Kemoluminestsentsi vaatlusi teostatakse kuni ajani t1, mil I1 muutus ajahetkest t on minimaalne: I1 = f1(t).

5. Osa analüüsitud lahusest tarnitakse dosaatori abil.

6. Vaadeldakse analüüsitud proovi kemiluminestsentsi, mille kineetika on I = f(t).

Joonisel fig. Joonisel 3 on kujutatud graafikuga (I = f(t)) seotud funktsioonide sõltuvuse graafik (I1 = f1(t)) pärast analüüsitud lahenduse tutvustamist.

Nagu näha jooniselt fig. 3, muutub luminooli kemoluminestsentsi intensiivsus: järsule tõusule järgneb pärast analüüsitud proovi lisamist luminestsentsi järsk langus.

Kuna kemoluminestsentsi suurenemine luminooli oksüdatsiooni ajal on seotud peroksiidide moodustumisega, näitab kemoluminestsentsi intensiivsuse vähenemine pärast analüüsitava proovi sisseviimist nende koguse vähenemist. Sellest tulenevalt saame rääkida antioksüdantse toime olemasolust analüüsitud proovis sisalduvates ühendites.

Tuleb märkida, et analüüsitud prooviks oli kuiv-madaltemperatuuril destilleerimisel saadud võililleekstrakt, mis sisaldab kõrge antioksüdantse toime poolest tuntud fenoolseid ühendeid.

Riis. 3. Funktsioonisõltuvuse graafik (I1 = f1(t)), mis on ühendatud graafikuga (I = f(t)), pärast analüüsitud lahenduse tutvustamist

Lisaks tehti katsega kindlaks, et kemoluminestsentsi abil on võimalik määrata peroksiidide kogust ultralahjendatud süsteemides, mis on oluline toodete oksüdeerumise alguse hindamiseks näiteks ladustamise ajal.

Seega on uuringud näidanud, et toodetes peroksiidide määramise meetod, mis põhineb luminooli kemoluminestsentsil aluselises keskkonnas, võimaldab hinnata toiduainete antioksüdantset aktiivsust ning seda saab kasutada erinevate toiduühendite antioksüdantsete omaduste tuvastamiseks. .

Arvustajad:

Litvinova E.V., tehnikateaduste doktor, tehnoloogia, korralduse ja toiduhügieeni osakonna professor, föderaalne riigieelarveline kutsekõrgharidusasutus "OrelGIET", Orel;

Kovaleva O.A., bioloogiateaduste doktor, föderaalse riigieelarvelise kõrgharidusasutuse "Oryol State Agraria University" instituudi direktor, Orel.

Töö jõudis toimetusse 8.11.2013.

Bibliograafiline link

Panichkin A.V., Bolšakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. KEEMILUMINETSTSENTSI KASUTAMINE TOIDUAINETE ANTIOKSÜDANDILISTE OMADUSTE HINDAMISEKS // Fundamental Research. – 2013. – nr 10-11. – Lk 2436-2439;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32810 (juurdepääsu kuupäev: 17.12.2019). Toome teie tähelepanu kirjastuse "Loodusteaduste Akadeemia" poolt välja antud ajakirjad