24.11.202227.05.2017

], ammo antioksidantlarning kimyoviy birikmalar sifatida ta'rifi o'rganilayotgan ob'ektning himoya xususiyatlari haqida to'liq tasavvurni bermaydi: ular faqat ma'lum bir antioksidant miqdori bilan emas, balki ularning har birining faolligi bilan ham aniqlanadi. Antioksidant faollik yoki antioksidant faollik, AOA antioksidantning erkin radikal (kInH) bilan reaksiya tezligi konstantasidir. Xemiluminesans (CL) usuli namunadagi antioksidantlarni bog'laydigan radikallarning umumiy miqdorini (umumiy antioksidant sig'imi, TAU) va CL kinetikasini matematik modellashtirish usulidan foydalanganda, shuningdek, radikallarning hosil bo'lish tezligini va reaktsiyasini aniqlashga imkon beradi. antioksidantlar bilan, ya'ni AOA [, ,].

Jami antioksidant quvvatni aniqlash uchun xemiluminesans usulining eng keng tarqalgan modifikatsiyasi luminolni kimyoluminesans faollashtiruvchisi sifatida ishlatishga asoslangan [, , ,]. Namuna luminol, vodorod peroksid va o'z-o'zidan parchalanish (termoliz) natijasida radikallar hosil qilish qobiliyatiga ega birikma, masalan, 2,2'-azobis-(2-amidinopropan) dihidroxlorid (ABAP) qo'shilgan holda xemiluminometr kyuvetasiga joylashtiriladi. ): ABAP → 2R. Molekulyar kislorod ishtirokida R alkil radikali peroksil radikal ROO hosil qiladi: R + O 2 → ROO. Keyinchalik, peroksil radikali xemiluminesans prob luminolini (LH 2) oksidlaydi va luminol radikali (LH) hosil bo'ladi: ROO + LH 2 → ROOH + LH. LH dan oraliq moddalar (luminol gidroperoksid va luminol endoperoksid) hosil bo'lishi orqali elektron qo'zg'atilgan holatda luminol oksidlanishining yakuniy mahsuloti aminoftalik kislota molekulasi hosil bo'ladi va bu foton chiqaradi va natijada xemiluminesans kuzatiladi. . CL intensivligi foton ishlab chiqarish tezligiga mutanosibdir va u, o'z navbatida, tizimdagi LH ning statsionar kontsentratsiyasiga proportsionaldir. Radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish orqali antioksidantlar tasvirlangan transformatsiyalar zanjirini to'xtatadi va foton shakllanishiga to'sqinlik qiladi.

Termolizga moyil bo'lgan birikmalar xemiluminesans usuli yordamida namunaning antioksidant qobiliyatini tahlil qilishda radikallarning yagona mumkin bo'lgan manbai emas. Alternativlar - otquloq peroksidaza-vodorod peroksid [, ], gemin-vodorod peroksid, sitoxrom tizimlari. Bilan–kardiolipin–vodorod peroksid va boshqalar.Luminolni peroksidazalar bilan oksidlanishining reaksiya sxemasi Kormier va boshqalarning ishlarida ko‘rib chiqilgan. .

Ushbu tizimlar uchun CL kinetik egri reaktsiyaning ikki bosqichini aks ettiradi: CL intensivligini oshirish bosqichi va plato bosqichi yoki CL intensivligi doimiy yoki asta-sekin kamayib borayotgan lyuminesansning bosqichma-bosqich pasayishi. Ishda egri chiziqlarning ushbu xususiyatini hisobga olgan holda umumiy antioksidant quvvatni o'lchashning ikkita yondashuvi tasvirlangan. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) usuli CL ning yashirin davrini o'lchashga asoslangan. τ va Trolox yoki askorbin kislotasi kabi antioksidantlarni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin: ular radikallar bilan yuqori reaksiya tezligi konstantasi bilan tavsiflanadi va shu sababli kuchli antioksidantlar deb atash mumkin. Yashirin davrda ularning to'liq oksidlanishi sodir bo'ladi. TAR (Total Antioksidant Reaktivligi) usuli kimilyuminesansning söndürülme darajasini o'lchaydi. q xemiluminesans egri chizig'ining platosida yoki maksimalida: formula, bu erda I - antioksidantsiz kimilyuminesansning intensivligi va I 1 - antioksidant ishtirokidagi CL intensivligi. Ushbu usul, agar tizimda radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi past bo'lgan, asosan, zaif antioksidantlar mavjud bo'lsa, qo'llaniladi - luminol konstantasiga nisbatan ancha past.

Antioksidantlarning ta'siri nafaqat ko'rsatkichlar bilan tavsiflanadi τ Va q. Ishlardan ko'rinib turibdiki [,] antioksidantlarning gemin-H 2 O 2 - luminol tizimidagi siydik kislotasi yoki sitoxrom tizimidagi tokoferol, rutin va quercetin kabi ta'siri. Bilan-kardiolipin-H 2 O 2 - luminol, CL ning maksimal o'sish tezligining o'zgarishi bilan tavsiflanadi ( vmax). Kinetikani matematik modellashtirish natijalari shuni ko'rsatadiki, bu antioksidantlarning radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi konstantalarining qiymatlari luminol konstantasi qiymatiga yaqin, shuning uchun bunday antioksidantlarni o'rtacha kuchli antioksidantlar deb atash mumkin.

Agar o'rganilayotgan materialda, xususan o'simlik xom ashyosida faqat bitta turdagi antioksidantlar mavjud bo'lsa, unda ularning tarkibi yuqorida sanab o'tilgan uchta ko'rsatkichdan biri bilan tavsiflanishi mumkin ( τ , q yoki vmax). Ammo o'simlik materiallarida turli xil kuchli antioksidantlarning aralashmasi mavjud. Bu muammoni hal qilish uchun ba'zi mualliflar [ , , , ] formula bo'yicha hisoblangan ∆S ma'lum vaqt davomida xemiluminesansning yorug'lik yig'indisining o'zgarishidan foydalanganlar, bu erda ∆ S 0 va ∆ S S- ma'lum vaqt uchun CL yorug'lik summalari t mos ravishda nazorat va sinov namunalarida. Vaqt tizimdagi barcha antioksidantlarning oksidlanishi uchun, ya'ni sinov namunasining CL egri chizig'i nazorat namunasining CL egri chizig'i darajasiga yetishi uchun etarli bo'lishi kerak. Ikkinchisi tadqiqotchilar nafaqat yorug'likning yorug'lik yig'indisini qayd etishlari, balki CL kinetika egri chizig'ini etarlicha uzoq vaqt davomida qayd etishlari kerak, deb hisoblaydi, bu har doim ham bajarilmaydi.

Barcha o'lchangan ko'rsatkichlar qurilma va o'lchash sharoitlariga bog'liq bo'lganligi sababli, o'rganilayotgan tizimdagi moddaning antioksidant ta'siri odatda standart sifatida qabul qilingan antioksidantning ta'siri bilan taqqoslanadi, masalan Trolox [,].

Horseradish peroksidaza-vodorod periks tizimi ko'plab mualliflar tomonidan o'simlik materiallarining umumiy antioksidant qobiliyatini tahlil qilish uchun ishlatilgan. Ishlarda [ , ], namunalardagi antioksidantlar miqdorini baholash uchun CL ning yashirin davri (TRAP usuli) va ishlarda [ , , ] - CL rivojlanish egri chizig'i ostidagi maydon ishlatilgan. Biroq, sanab o'tilgan ishlar OAUni baholash uchun u yoki bu parametrni tanlash uchun aniq asos bermaydi.

Tadqiqotning maqsadi turli xil turdagi antioksidantlarning nisbati TOA ga qanday ta'sir qilishini aniqlash va o'simlik materiallarida TOA ni aniqroq aniqlash uchun kimyoluminesans usulini o'zgartirish edi. Buning uchun biz o'z oldimizga bir nechta vazifalarni qo'ydik. Birinchidan, qaysi turdagi antioksidantlar o'rganilayotgan ob'ektlarning OAUga asosiy hissa qo'shishini tushunish uchun o'rganilayotgan ob'ektlarning CL kinetikasini uch turdagi (kuchli, o'rta va kuchsiz) standart antioksidantlar kinetikasi bilan solishtiring. Ikkinchidan, ushbu ob'ektlar ta'sirida CL yorug'lik summasining pasayishini OAEga eng katta hissa qo'shadigan antioksidant ta'siri bilan solishtirganda o'lchash orqali o'rganilayotgan ob'ektlarning OAE ni hisoblang.

MATERIALLAR VA USULLAR

Tadqiqot ob'ektlari "Krasnogorskleksredstva" OAJ (Rossiya) tomonidan ishlab chiqarilgan do'lana, rovon va atirgulning sanoat namunalari, shuningdek, tabiiy o'sish sharoitida Moskva viloyatida mualliflar tomonidan to'plangan va 60-80 ° haroratda quritilgan malina mevalari edi. C ular bosilganda sharbat va deformatsiyani chiqarishni to'xtatmaguncha.

Kimiluminesans usuli yordamida antioksidant quvvatni tahlil qilish uchun reagentlar quyidagilar edi: KH 2 PO 4, 20 mM bufer eritmasi (pH 7,4); horseradish ildizlaridan peroksidaza (faoliyat 112 birlik / mg, M = 44,173,9), 1 mM suvli eritma; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik kislota hidrazid, M = 177,11), 1 mM suvli eritma; vodorod periks (H 2 O 2, M = 34.01), 1 mM suvli eritma; antioksidantlarning eritmalari (askorbin kislotasi, quercetin, tokoferol). Barcha reagentlar Sigma Aldrich (AQSh) tomonidan ishlab chiqariladi.

Do‘lana, rovon va atirgul mevalarining qaynatmalari va malina mevalaridan infuzion SSSR Davlat farmakopeyasining “Infuzionlar va qaynatmalar” umumiy farmakopeya maqolasida keltirilgan usullariga muvofiq tayyorlangan.

Umumiy antioksidant quvvatni aniqlash PowerGraph 3.3 dasturi yordamida Lum-100 xemiluminometrida (DISoft, Rossiya) xemiluminesansni qayd etish orqali amalga oshirildi. O'simlik materiallarida OAE ni aniqlash uchun 1 mM konsentratsiyada 40 mkl luminol, 0,1 mkM konsentratsiyada 40 mkl horseradish peroksidaza, 10 dan 50 mkl gacha qaynatma yoki infuzion (kontsentratsiyaga qarab) va fosfat buferi. namunaning umumiy hajmini 1 ml ga yetkazish uchun kerakli miqdor qurilmaning kyuvetasiga joylashtirildi. Kyuvet qurilmaga o'rnatildi va fon signalini kuzatgan holda CL qayd etildi. Fon signalini yozib olishdan 48 soniya o'tgach, kyuvetaga 1 mM konsentratsiyadagi 100 mkl H2O2 qo'shildi va CL yozuvi 10 daqiqa davomida davom ettirildi. Har bir o'simlik ob'ektining turli konsentratsiyasi bilan to'rtta namuna tayyorlandi. CL, shuningdek, askorbin kislotasi, quercetin va tokoferol eritmalari uchun har bir antioksidant uchun besh xil konsentratsiyada qayd etilgan. Keyinchalik, qaynatmalar va infuziyalar namunalarining OAU kversetinga qayta hisoblab chiqildi.

Luminol, horseradish peroksidaza va vodorod periks kontsentratsiyasi maqbul vaqt ichida (10 daqiqadan ko'p bo'lmagan) dorivor o'simlik materiallaridan suvli ekstraktlarning antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun tanlangan. Bu vaqt davomida antioksidantlar askorbat va flavonoid quercetin (o'simlik materiallarining asosiy antioksidantlari) uchun xemiluminesans egri chizig'i platoga etib, tizimdagi antioksidantlarning to'liq yo'q qilinishini ko'rsatadi. O'rganilgan namunalarning suyultirishlari va standart antioksidantlar eritmalarining konsentratsiyasi (raqamlar uchun afsonalarda ko'rsatilgan) barcha CL kinetik egri chiziqlari qurilmaning bir xil sezgirligida o'lchanadigan tarzda tanlangan.

Antioksidant quvvati maydonning o'zgarishidan hisoblab chiqilgan (∆ S) antioksidantni o'z ichiga olgan moddani qo'shganda xemiluminesansning kinetik egri ostida (yorug'lik yig'indisi). Buning uchun biz hisoblab chiqdik S 0 antioksidantsiz tizim uchun va undan maydonni olib tashladi S S, antioksidant qo'shilgan tizimni tavsiflovchi. Qiymat ∆ S xemiluminometrning sezgirligiga va o'lchash shartlariga bog'liq. Nisbat ∆ S/C V(Qaerda C- o'rganilayotgan biologik materialning kyuvetada konsentratsiyasi, g/l, va V- kyuvetka hajmi, l) o'rganilayotgan 1 g materialning, ya'ni o'simlik xom ashyosining antioksidant qobiliyatini ifodalaydi.

Antioksidant quvvati ∆ xuddi shunday tarzda hisoblab chiqilgan S A reaksiya aralashmasining bir xil hajmiga joylashtirilgan standart antioksidantning eritmasi, masalan, quercetin. Nisbat ∆ S A / C A V(Qaerda C A- kyuvetada antioksidantning vazn konsentratsiyasi, g/l) 1 g antioksidantning antioksidant qobiliyatini ifodalaydi.

Standart antioksidantlarning har biri uchun hisob-kitoblarning chiziqli munosabatda bo'lishini va olingan natijalarning takrorlanishini ta'minlash uchun bir nechta konsentratsiyali eritmalardan signal qayd etildi. Haqiqatan ham, chiziqli bog'liqlik olindi (∆ S A = k A C A) stexiometrik koeffitsient hisoblangan konsentratsiyadan signal k A. Fisher mezoniga ko'ra, standart antioksidantlar uchun olingan qiymatlar k A 0,975 ehtimollik bilan statistik ahamiyatga ega. Keyinchalik, to'rtta konsentratsiyadagi signal to'rtta o'simlik namunasining har biri uchun qayd etildi va barcha namunalar uchun signalning konsentratsiyaga chiziqli bog'liqligi olindi (∆ S = k·C), undan stoxiometrik koeffitsient hisoblangan k. 0,975 (Fisher testi) ehtimolligi bilan o'simlik namunalari uchun olingan k qiymatlari statistik ahamiyatga ega. Standart antioksidantning massasi (mg%) bo'yicha o'simlik materialining umumiy antioksidant qobiliyati formuladan foydalanib topildi.

Qiymatlar p da o'rtacha arifmetik ± standart og'ish (M ± d) sifatida taqdim etildi.

TADQIQOT NATIJALARI

Natriy askorbat ishtirokida xemiluminesans kinetikasini o'rganish (1-rasm. Natriy askorbatning xemiluminesans kinetikasiga ta'siri" data-note="Tizim komponentlarining kontsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidazasi, vodorod peroksid - 4nM. - 100 µM. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,05 µM; 3 - 0,10 µM; 4 - 0,15 µM; 5 - 0,2 µM; 6 - 0,25 µM natriy askorbat.">1-rasm) bu antioksidant ekanligini ko‘rsatdi. CL deyarli butunlay bostirilgan yashirin davr bilan tavsiflanadi.Uning davomiyligi tizimdagi antioksidant miqdoriga mutanosib.Shu bilan birga, CL egri chizig'ining qiyaligi ham, CL ning platodagi intensivligi ham o'zgarmaydi.Bu tushuntiriladi. askorbin kislota kuchli antioksidant bo'lib, tizimda hosil bo'lgan barcha radikallarni, shu jumladan luminol radikallarini ushlab turadi va CL barcha askorbat oksidlanmaguncha rivojlanmaydi.

Boshqa tadqiqotchilar ham kimyoviy tahlil natijalari va xemiluminesans usuli bilan aniqlangan TAU qiymati ko'pincha mos kelmasligini ko'rsatdi. Ishda peroksidaza-luminol-vodorod peroksid tizimida aniqlangan umumiy antioksidant quvvati triterpen birikmalarining tarkibi bilan bog'liq. Shu bilan birga, tadqiqot ob'ekti boshqa o'simlik bo'lgan o'sha mualliflarning ishlarida ular OAE ning har qanday moddalar guruhi, shu jumladan flavonoidlar tarkibi bilan bog'liqligini kuzatmaganlar.

Bunday kelishmovchiliklar kamida uchta omil bilan bog'liq. Birinchidan, antioksidantlarning faolligi muhim, ya'ni o'simlik namunasiga kiritilgan turli antioksidantlar uchun ularning radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi. Izmailovning fikriga ko'ra, mexidol, tokoferol va quercetin uchun mos keladigan reaksiyalarning tezlik konstantalari 0,04: 2: 60 korrelyatsiya qiladi. Ikkinchidan, kimyoviy reaktsiyaga kiradigan har bir antioksidant molekula turli xil miqdordagi radikallarni ushlab turishi mumkin. Ishga ko'ra, quercetin, siydik va askorbin kislotalar reaksiyaga kirishgan antioksidant molekula uchun mos ravishda 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 va 0,5 ± 0,2 radikallarni ushlab turishgan (gemin-H 2 O 2 tizimi ishlatilgan - luminol). Uchinchidan, tadqiqot natijalariga ishda bo'lgani kabi o'simlik namunalarining o'zida ham peroksidaza faolligi, shuningdek namunalarda kaltsiy borligi ta'sir qilishi mumkin, bu ishda ko'rsatilganidek, ko'paytirishga qodir. muayyan sharoitlarda horseradish peroksidaza faolligi. Bu odatda platoda nazorat egri chizig'iga qaraganda yuqori CL intensivligini keltirib chiqaradi, ammo biz buni kuzatmadik.

Birinchi omil yorug'lik yig'indisining o'zgarishi kabi parametrdan foydalanishni keskin cheklaydi, chunki xemiluminesansni o'lchash vaqti sinov namunasidagi barcha antioksidantlarni iste'mol qilish vaqtidan ko'proq bo'lishi kerak. Ushbu momentning paydo bo'lishini faqat kimilyuminesans kinetikasini o'lchash orqali baholash mumkin. Bundan tashqari, zaif antioksidantlarning TAU ga qo'shgan hissasi keskin kam baholanadi, chunki ularning to'liq oksidlanish vaqti qabul qilinadigan o'lchash davomiyligidan (10-20 minut) bir necha baravar ko'p.

Antioksidantning stoxiometrik koeffitsienti yanada muhimroqdir. Radikallar soni n tomonidan kesilgan ga teng, bu yerda ρ stexiometrik koeffitsient va ∆ m- o'lchash vaqtida antioksidant kontsentratsiyasining o'zgarishi, bizning holatlarimizda - sinov namunasidagi sinov moddasining dastlabki konsentratsiyasi.

Antioksidant yo'qligida va uning mavjudligida luminesansning yorug'lik yig'indisi farqi proportsionaldir. n. Tutib olingan radikallarning umumiy soni , bu yerda r i- ma'lum bir antioksidantning stexiometrik koeffitsienti va m i- o'lchash vaqtida uning konsentratsiyasi. To'xtatilgan radikallarning umumiy soni antioksidantlarning umumiy miqdoriga teng emas, chunki koeffitsientlar r i nafaqat birlikka teng emas, balki turli antioksidantlar uchun ham sezilarli darajada farqlanadi.

Kattalik n antioksidantni o'z ichiga olgan namuna va antioksidant bo'lmagan nazorat namunasi o'rtasidagi ma'lum vaqt davomida o'lchangan yorug'lik summalarining farqiga proportsionaldir: S = k n, Qayerda k- koeffitsient, bir xil o'lchash sharoitida doimiy.

Maqolada muhokama qilingan usul bizga umumiy antioksidant quvvatni aniqlash imkonini beradi, kimyoviy tahlil esa mahsulotdagi antioksidantlarning umumiy miqdorini aniqlashga imkon beradi. Shu sababli, kimyoluminesans usuli kimyoviy tahlillarga qaraganda ko'proq ma'lumotli ko'rinadi.

Horseradish peroksidaza, vodorod periks va luminoldan tashkil topgan tizimda kimilyuminesans kinetikasini qayd qilish orqali o'simlik xom ashyosining umumiy antioksidant qobiliyatini baholash uchun biz tanlagan shartlar (komponent konsentratsiyasi - mos ravishda 4 nM, 100 mM va 40 mM; 20 mMfosfat). bufer, pH 7,4), 10 daqiqada kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rta kuchli antioksidantlarning (kversetin) oksidlanishini ta'minladi. Ushbu o'lchov davomiyligi qulay va kerakli o'lchov sifatini ta'minlaydi.

Xemiluminesans kinetikasini tahlil qilish shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda (rovon mevalari, atirgul, do'lana va malina mevalari infuziyasi) asosiy antioksidantlar o'rtacha kuchli antioksidantlar, shu jumladan flavonoidlar va kuchsiz (tokoferol va boshqalar). Kimiluminesans yorug'lik yig'indisining pasayishiga asoslanib, o'rganilayotgan ob'ektlar uchun umumiy antioksidant quvvati hisoblab chiqilgan. Olingan TAU qiymatlarini kimyoviy tahlil natijalari bilan taqqoslash shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar turli nisbatlarda tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan samarali himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. Ta'riflangan texnika turli xil antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi. Shu bilan birga, tadqiqotning soddaligi va arzonligi bilan ajralib turadi. Kimiluminesans kinetikasini o'lchashning reaktsiyalarni matematik modellashtirish bilan kombinatsiyasi nafaqat TAU ni aniqlash jarayonini avtomatlashtiradi, balki antioksidantlarning individual guruhlarining indikatorga qo'shgan hissasini ham aniqlaydi.

Kalit so'zlar

erkin radikal/antioksidant/ antioksidant faollik / umumiy antioksidant qobiliyati / kimyoluminesans/ luminol / erkin radikal / antioksidant / antioksidant faollik / umumiy antioksidant quvvat / xemiluminesans / luminol

izoh kimyo fanlari bo'yicha ilmiy maqola, ilmiy ish muallifi - Georgiy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Dorivor o'simlik materiallari inson tanasi uchun antioksidantlar manbalaridan biridir. O'simlik ob'ektlarida antioksidantlar miqdorini aniqlash usullari orasida xemiluminesans tahlil usuli keng tarqalgan. Ushbu ishda u taxmin qilish uchun ishlatilgan umumiy antioksidant qobiliyati(OAE) rowan mevalari, atirgul kestirib, do'lana va malina mevalarining infuzioni qaynatmalari. Tajribada kinetika qayd etildi kimyoluminesans horseradish peroksidaz, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimda. Namunadagi tizim komponentlarining kontsentratsiyasi va hajmi kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rtacha antioksidantlar (quercetin) o'lchash vaqtida (10 minut) to'liq oksidlanishi uchun tanlangan. Yorug'lik yig'indisining o'zgarishiga asoslangan OAE ni hisoblash usuli taklif qilinadi va asoslanadi kimyoluminesans o'simlik namunalari mavjudligida. Kinetik tahlil kimyoluminesans o'rganilayotgan ob'ektlarda o'rta kuchli antioksidantlar, jumladan flavonoidlar va kuchsiz antioksidantlar (tokoferol va boshqalar) ustunligini ko'rsatdi. O'rganilayotgan ob'ektlar uchun hisoblangan OAE qiymatlarini va ularning kimyoviy tahlillari ma'lumotlarini taqqoslash shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar turi bo'yicha har xil nisbatlarda tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. . Ta'riflangan texnika har xil turdagi antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi.

Tegishli mavzular kimyo fanlari bo'yicha ilmiy ishlar, ilmiy ish mualliflari - Georgiy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

2016 yil / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.
2,2"-azo-bis (2-amidinopropan) yordamida faollashtirilgan xemiluminesans orqali antioksidantlarni aniqlash
2012 yil / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Sitokrom c tomonidan katalizlangan peroksidaza reaktsiyalarida dihidrokersetin va rutinning antioksidant ta'siri
2008 yil / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Fenton reaktsiyasi natijasida kelib chiqqan xemiluminesans orqali biologik substratlarning oksidlovchi va antioksidant qobiliyatini baholash.
2016 yil / Piskarev Igor Mixaylovich, I.P. Ivanova
Mikroperoksidaza-luminol tizimi yordamida sarum lipoproteinlaridagi lipogidroperoksidlar miqdorini aniqlash.
2011 yil / Teselkin Yuriy Olegovich, Babenkova Irina Vladimirovna
Antioksidant tadqiqot usullari
2004 yil / Xasanov V.V., Ryjova G.L., Maltseva E.V.
Tuva etnomedicisida ishlatiladigan o'simliklarning antioksidant faolligi
2012 yil / Chexani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitskiy O.B.
Turli biologik test tizimlarida Fosprenilning antioksidant xususiyatlarini o'rganish
2017 yil / A. V. Sanin, A. N. Narovlyanskiy, A. V. Pronin, T. N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova
Poliklorli bifenillarning turli dozalarining spontan va immunoglobulin bilan qo'zg'atilgan luminolga bog'liq bo'lgan to'liq qonning xemiluminesans holatiga ta'siri.
2016 yil / Gabdulxakova I.R., Qayumova A.F., Samoxodova O.V.
Spektrofotometriya va xemiluminesans usullaridan foydalangan holda muhim arterial gipertenziyasi bo'lgan bolalarda antioksidantlarni himoya qilishning lipid peroksidlanish tizimini baholash.
2014 yil / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Dorivor o'simlik materialida umumiy antioksidant quvvatni kimyoluminesans yordamida aniqlash

Dorivor o'simlik materiali inson tanasi uchun antioksidantlar manbalaridan biridir. Xemiluminesans tahlili o'simlik materiallaridagi antioksidantlar tarkibini aniqlashning keng tarqalgan usullaridan biridir. Bizning ishimizda tog 'kuli, atirgul va do'lana meva qaynatmalari, shuningdek, malinali meva infuzionining umumiy antioksidant qobiliyatini (TAC) aniqlash uchun xemiluminesans tahlilidan foydalanildi. Tajribalar xren peroksidaza, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimning kimilyuminesans kinetikasini aniqladi. Tizim tarkibiy qismlarining kontsentratsiyasi va hajmlari shunday tanlanganki, kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rtacha quvvatdagi antioksidantlar (kversetin) o'lchash paytida (10 daqiqa) to'liq oksidlanadi. O'simlik namunalari mavjud bo'lganda xemiluminesans yorug'lik yig'indisining o'zgarishiga asoslangan TACni hisoblash usuli taklif qilindi va asoslandi. Xemiluminesans kinetikasining tahlili shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda o'rtacha kuchli antioksidantlar, jumladan flavonoidlar va zaif antioksidantlar (tokoferol va boshqalar) ustunlik qiladi. O'rganilayotgan ob'ektlar uchun hisoblangan TAC qiymatlarini taqqoslash va ularning kimyoviy tahlil ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlarning turlari bo'yicha turli xil nisbatlarda antioksidantlar tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. . Ta'riflangan texnika har xil turdagi antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi.

Ilmiy ish matni "Dorivor o'simlik materiallarining umumiy antioksidant qobiliyatini aniqlashning xemiluminesans usuli" mavzusida

dorivor o'simlik materiallarida umumiy antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun kimyoluminesans usuli

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1M.V.Lomonosov nomidagi Moskva davlat universiteti fundamental tibbiyot fakulteti tibbiy biofizika kafedrasi

2 Farmakognoziya kafedrasi, Farmatsevtika fakulteti,

I.M.Sechenov nomidagi birinchi Moskva davlat tibbiyot universiteti, Moskva

Dorivor o'simlik materiallari inson tanasi uchun antioksidantlar manbalaridan biridir. O'simlik ob'ektlarida antioksidantlar miqdorini aniqlash usullari orasida xemiluminesans tahlil usuli keng tarqalgan. Bu ishda rovon, atirgul va do'lana mevalari qaynatmalari va malina mevalari infuziyasining umumiy antioksidant qobiliyatini (TAC) baholash uchun foydalanilgan. Tajribada xemiluminesans kinetikasi xren peroksidaza, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimda qayd etildi. Namunadagi tizim komponentlarining kontsentratsiyasi va hajmi kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rtacha antioksidantlar (quercetin) o'lchash vaqtida (10 minut) to'liq oksidlanishi uchun tanlangan. O'simlik namunalari mavjud bo'lganda kimilyuminesansning yorug'lik yig'indisining o'zgarishiga asoslangan OAE ni hisoblash usuli taklif qilingan va asoslangan. Xemiluminesans kinetikasining tahlili shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda o'rta kuchli antioksidantlar, jumladan flavonoidlar va zaif antioksidantlar (tokoferol va boshqalar) ustunlik qiladi. O'rganilayotgan ob'ektlar uchun hisoblangan OAE qiymatlarini va ularning kimyoviy tahlillari ma'lumotlarini taqqoslash shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar turi bo'yicha har xil nisbatlarda tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. . Ta'riflangan texnika har xil turdagi antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi.

Kalit so'zlar: erkin radikal, antioksidant, antioksidant faollik, umumiy antioksidant sig'im, xemiluminesans, luminol

Moliyalashtirish: ish Rossiya Ilmiy Jamg'armasi tomonidan qo'llab-quvvatlandi, grant No 14-15-00375.

Ex3 Xat yozish uchun: Georgiy Konstantinovich Vladimirov

119192, Moskva, Lomonosovskiy pr-t, 31, 5-bino; [elektron pochta himoyalangan]

Qabul qilingan maqola: 10.03.2016 Maqola nashrga qabul qilingan: 18.03.2016

dorivor o'simlik materialida umumiy antioksidant qobiliyatini kimyoluminesans yordamida aniqlash

1 Tibbiyot biofizikasi kafedrasi, Lomonosov nomidagi Moskva davlat universiteti, fundamental tibbiyot fakulteti, Moskva, Rossiya

2 Farmakognoziya kafedrasi, Farmatsevtika fakulteti,

Sechenov nomidagi Birinchi Moskva Davlat Tibbiyot Universiteti, Moskva, Rossiya

Kalit so'zlar: erkin radikal, antioksidant, antioksidant faollik, umumiy antioksidant sig'im, xemiluminesans, luminol

Moliyalashtirish: ushbu ish Rossiya Ilmiy Jamg'armasi tomonidan qo'llab-quvvatlandi, grant №. 14-15-00375.

Tashakkur: mualliflar Lomonosov nomidagi Moskva davlat universitetidan Andrey Alekseevga eksperimentni o'tkazishdagi yordami uchun minnatdorchilik bildiradilar. Xat yozish kerak: Georgiy Vladimirov

Lomonosovskiy prospekti, d. 31, k. 5, Moskva, Rossiya, 119192; ur [elektron pochta himoyalangan] Qabul qilingan: 03/10/2016 Qabul qilingan: 18/03/2016

Organizmda hosil bo'lgan erkin radikallar hujayra membranalarining tuzilishini buzadi, bu esa o'z navbatida turli patologik holatlarning rivojlanishiga olib keladi. Radikallarning halokatli oksidlovchi ta'siri organizmning antioksidant himoya tizimi tomonidan oldini oladi, bunda past molekulyar og'irlikdagi birikmalar - radikal tutqichlar (tuzoqlar) muhim rol o'ynaydi. Antioksidantlar manbalaridan biri bu dorivor o'simlik materiallari, shuningdek, ularning antioksidant salohiyatini o'rganish ularning profilaktik va terapevtik ta'sirini oshirishga yordam beradigan dori-darmonlardir.

Antioksidantlarni aniqlashning asosiy usullari ishlarda muhokama qilinadi, ammo antioksidantlarning kimyoviy birikmalar sifatida ta'rifi o'rganilayotgan ob'ektning himoya xususiyatlari haqida to'liq tasavvurni bermaydi: ular nafaqat ma'lum bir antioksidant miqdori, balki ularning har birining faoliyati bilan ham. Antioksidant faollik yoki antioksidant faollik, AOA antioksidantning erkin radikal (kInH) bilan reaksiya tezligi konstantasidir. Xemiluminesans (CL) usuli namunadagi antioksidantlarni bog'laydigan radikallarning umumiy miqdorini (umumiy antioksidant sig'imi, TCA) va CL kinetikasini matematik modellashtirish usulidan foydalanganda, shuningdek, hosil bo'lish tezligini va reaktsiyasini aniqlashga imkon beradi. antioksidantlar bilan radikallar, ya'ni AOA.

Jami antioksidant quvvatni aniqlash uchun kemiluminesans usulining eng keng tarqalgan modifikatsiyasi luminolni kimyoluminesans faollashtiruvchisi sifatida ishlatishga asoslangan. Luminol, vodorod peroksid va o'z-o'zidan parchalanish (termoliz) natijasida radikallar hosil qila oladigan birikma qo'shilgan namuna, masalan, 2,2"-azobis-(2-amidinopropan) dihidroxlorid (ABAP):

Molekulyar kislorod ishtirokida R^ alkil radikali peroksil radikal ROO^ hosil qiladi:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv LH dan oraliq moddalar (luminol gidroperoksid va luminol endoperoksid) hosil bo'lishi orqali luminol oksidlanishining yakuniy mahsuloti - aminoftalik kislota molekulasi foton chiqaradigan elektron qo'zg'atilgan holatda hosil bo'ladi. , va natijada xemiluminesans kuzatiladi. CL intensivligi foton ishlab chiqarish tezligiga mutanosibdir va u, o'z navbatida, tizimdagi LH ning statsionar kontsentratsiyasiga proportsionaldir. Radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish orqali antioksidantlar tasvirlangan transformatsiyalar zanjirini to'xtatadi va foton shakllanishiga to'sqinlik qiladi.

Termolizga moyil bo'lgan birikmalar xemiluminesans usuli yordamida namunaning antioksidant qobiliyatini tahlil qilishda radikallarning yagona mumkin bo'lgan manbai emas. Shu bilan bir qatorda xren peroksidaz-vodorod peroksid, gemin-vodorod peroksid, sitoxrom c-kardiolipin-vodorod peroksid va boshqalar. Luminolni peroksidazalar bilan oksidlanishining reaktsiya sxemasi Cormier va boshqalarning ishlarida muhokama qilinadi. .

Ushbu tizimlar uchun CL kinetik egri reaktsiyaning ikki bosqichini aks ettiradi: CL intensivligini oshirish bosqichi va plato bosqichi yoki luminesansning asta-sekin pasayishi.

CL intensivligi doimiy yoki asta-sekin kamayadi. Ishda egri chiziqlarning ushbu xususiyatini hisobga olgan holda umumiy antioksidant quvvatni o'lchashning ikkita yondashuvi tasvirlangan. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) usuli CL t ning yashirin davrini o'lchashga asoslangan va Trolox yoki askorbin kislotasi kabi antioksidantlarni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin: ular radikallar bilan yuqori reaksiya tezligi konstantasi bilan tavsiflanadi va shu sababli kuchli antioksidantlar deb ataladi. Yashirin davrda ularning to'liq oksidlanishi sodir bo'ladi. TAR (Total Antioksidant Reaktivlik) usuli platoda yoki xemiluminesans egri chizig'ining maksimal darajasida q xemiluminesansning so'nish darajasini o'lchash uchun ishlatiladi:

bu yerda I antioksidantsiz xemiluminesans intensivligi, 11 esa antioksidant ishtirokidagi CL intensivligi. Ushbu usul, agar tizimda radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi past bo'lgan, asosan, zaif antioksidantlar mavjud bo'lsa, qo'llaniladi - luminol konstantasiga nisbatan ancha past.

Antioksidantlarning ta'siri nafaqat t va c ko'rsatkichlari bilan tavsiflanadi. Ishlardan ko'rinib turibdiki, hemin-H2O2-luminol tizimidagi siydik kislotasi yoki tokoferol, rutin va kversetin kabi antioksidantlarning sitoxrom c-kardiolipin-H2O2-luminol tizimidagi ta'siri maksimal tezlikning o'zgarishi bilan tavsiflanadi. CL (utx) ning o'sishi. Kinetikani matematik modellashtirish natijalari shuni ko'rsatadiki, bu antioksidantlarning radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi konstantalarining qiymatlari luminol konstantasi qiymatiga yaqin, shuning uchun bunday antioksidantlarni o'rtacha kuchli antioksidantlar deb atash mumkin.

Agar o'rganilayotgan material, xususan, o'simlik xom ashyosi faqat bitta turdagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan bo'lsa, unda ularning tarkibi yuqorida sanab o'tilgan uchta ko'rsatkichdan biri bilan tavsiflanishi mumkin (t, c yoki V). Ammo o'simlik materiallarida turli xil kuchli antioksidantlarning aralashmasi mavjud. Ushbu muammoni hal qilish uchun ba'zi mualliflar formula bo'yicha hisoblangan DE ma'lum bir vaqt ichida kimilyuminesansning yorug'lik yig'indisining o'zgarishidan foydalanganlar.

DE = DE0 - DE,

bu erda DE0 va DE5 ma'lum vaqt uchun CL yorug'lik yig'indisidir? mos ravishda nazorat va sinov namunalarida. Vaqt tizimdagi barcha antioksidantlarning oksidlanishi uchun, ya'ni sinov namunasining CL egri chizig'i nazorat namunasining CL egri chizig'i darajasiga yetishi uchun etarli bo'lishi kerak. Ikkinchisi tadqiqotchilar nafaqat yorug'likning yorug'lik yig'indisini qayd etishlari, balki CL kinetika egri chizig'ini etarlicha uzoq vaqt davomida qayd etishlari kerak, deb hisoblaydi, bu har doim ham bajarilmaydi.

Barcha o'lchangan parametrlar qurilma va o'lchash shartlariga bog'liq bo'lganligi sababli, o'rganilayotgan tizimdagi moddaning antioksidant ta'siri odatda standart antioksidantning ta'siri bilan taqqoslanadi, masalan, Trolox.

Horseradish peroksidaza-vodorod periks tizimi ko'plab mualliflar tomonidan o'simlik materiallarining umumiy antioksidant qobiliyatini tahlil qilish uchun ishlatilgan. Namunalardagi antioksidantlar miqdorini baholash uchun CL ning yashirin davri (TRAP usuli) ishlatilgan va ishlarda CL rivojlanish egri chizig'i ostidagi maydon ishlatilgan. Biroq, sanab o'tilgan ishlar aniq asos bermaydi

OAUni baholash uchun u yoki bu parametrni tanlash.

MATERIALLAR VA USULLAR

Tadqiqot ob'ektlari "Krasnogorskleksredstva" OAJ (Rossiya) tomonidan ishlab chiqarilgan do'lana, rovon va atirgulning sanoat namunalari, shuningdek mualliflar tomonidan tabiiy o'sish sharoitida Moskva viloyatida to'plangan va 60-80 ° haroratda quritilgan malina mevalari edi. C ular bosilganda sharbat va deformatsiyani chiqarishni to'xtatmaguncha.

Kimiluminesans usuli yordamida antioksidant quvvatini tahlil qilish uchun reagentlar quyidagilar edi: KH2PO4, 20 mM bufer eritmasi (pH 7,4); horseradish ildizlaridan peroksidaza (faoliyat 112 birlik / mg, M = 44,173,9), 1 mM suvli eritma; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik kislota hidrazid, M = 177,11), 1 mM suvli eritma; vodorod periks (H2O2, M = 34,01), 1 mM suvli eritma; antioksidantlarning eritmalari (askorbin kislotasi, quercetin, tokoferol). Barcha reagentlar Sigma Aldrich (AQSh) tomonidan ishlab chiqariladi.

Umumiy antioksidant quvvatni aniqlash PowerGraph 3.3 dasturi yordamida Lum-100 xemiluminometrida (DISoft, Rossiya) xemiluminesansni qayd etish orqali amalga oshirildi. O'simlik materiallarida OAE ni aniqlash uchun 1 mM konsentratsiyada 40 mkl luminol, 0,1 mkM konsentratsiyada 40 mkl horseradish peroksidaza, 10 dan 50 mkl gacha qaynatma yoki infuzion (kontsentratsiyaga qarab) va fosfat buferi. namunaning umumiy hajmini 1 ml ga yetkazish uchun kerakli miqdor qurilmaning kyuvetasiga joylashtirildi. Kyuvet qurilmaga o'rnatildi va fon signalini kuzatgan holda CL qayd etildi. Fon signalini yozib olishdan 48 soniya o'tgach, kyuvetaga 1 mM konsentratsiyadagi 100 mkl H2O2 qo'shildi va CL yozuvi 10 daqiqa davomida davom ettirildi. Har bir o'simlik ob'ektining turli konsentratsiyasi bilan to'rtta namuna tayyorlandi. CL, shuningdek, antioksidantlarning har biri uchun besh xil konsentratsiyada askorbin kislotasi, quercetin va tokoferol eritmalari uchun qayd etilgan. Keyinchalik, qaynatmalar va infuziyalar namunalarining OAU kversetinga qayta hisoblab chiqildi.

platoga yetdi, bu tizimdagi antioksidantlarning to'liq yo'q qilinishini ko'rsatadi. O'rganilgan namunalarning suyultirishlari va standart antioksidantlar eritmalarining konsentratsiyasi (rasmlar sarlavhalarida ko'rsatilgan) barcha CL kinetik egri chiziqlari qurilmaning bir xil sezgirligida o'lchanadigan tarzda tanlangan.

Antioksidant quvvati antioksidantni o'z ichiga olgan moddani qo'shganda xemiluminesansning kinetik egri chizig'i ostidagi maydonning (AS) o'zgarishidan (yorug'lik summasi) hisoblab chiqilgan. Buning uchun biz antioksidantsiz tizim uchun S0 ni hisoblab chiqdik va undan antioksidant qo'shilgan tizimni tavsiflovchi SS maydonini ayirdik. AS qiymati xemiluminometrning sezgirligiga va o'lchash shartlariga bog'liq. AS/C ■ V nisbati (bu erda C - kyuvetada o'rganilayotgan biologik materialning konsentratsiyasi, g/l va V - kyuvetaning hajmi, l) o'rganilayotgan materialning 1 g antioksidant qobiliyatini ifodalaydi, ya'ni o'simlik xom ashyosi.

Xuddi shunday, biz reaksiya aralashmasining bir xil hajmiga joylashtirilgan standart antioksidant, masalan, quercetin eritmasining antioksidant sig'imi ASa ni hisoblab chiqdik. AS/CÄ ■ V nisbati (bu erda CA - kyuvetada antioksidantning og'irlik konsentratsiyasi, g/l) 1 g antioksidantning antioksidant qobiliyatini ifodalaydi.

Standart antioksidantlarning har biri uchun hisob-kitoblarning chiziqli munosabatda bo'lishini va olingan natijalarning takrorlanishini ta'minlash uchun bir nechta konsentratsiyali eritmalardan signal qayd etildi. Haqiqatan ham, konsentratsiyaga signalning chiziqli bog'liqligi (ASa = kA ■ CA) olindi, undan kA stoxiometrik koeffitsienti hisoblab chiqilgan. Fisher mezoniga ko'ra, standart antioksidantlar uchun olingan kA qiymatlari 0,975 ehtimollik bilan statistik ahamiyatga ega. Keyinchalik, to'rtta konsentratsiyadan olingan signal to'rtta o'simlik namunasining har biri uchun qayd etilgan va barcha namunalar uchun signalning konsentratsiyaga chiziqli bog'liqligi olingan (AS = k ■ C), undan k stoxiometrik koeffitsient hisoblangan. 0,975 (Fisher testi) ehtimolligi bilan o'simlik namunalari uchun olingan k qiymatlari statistik ahamiyatga ega. Standart antioksidantning massasi (mg%) bo'yicha o'simlik materialining umumiy antioksidant qobiliyati formuladan foydalanib topildi.

OAE = k ■ 105. k

Qiymatlar p da o'rtacha arifmetik ± standart og'ish (M ± 5) sifatida taqdim etildi.<0,05.

TADQIQOT NATIJALARI

Natriy askorbat (1-rasm) ishtirokida xemiluminesans kinetikasini o'rganish shuni ko'rsatdiki, bu antioksidant CL deyarli to'liq bostirilganda yashirin davr bilan tavsiflanadi. Uning davomiyligi tizimdagi antioksidant miqdori bilan mutanosibdir. Bunday holda, CL egri chizig'ining qiyaligi ham, platodagi CL intensivligi ham o'zgarmaydi. Bu askorbin kislotaning kuchli antioksidant bo'lib, tizimda hosil bo'lgan barcha radikallarni, shu jumladan luminol radikallarini ushlab turadiganligi va CL barcha askorbat oksidlanmaguncha rivojlanmasligi bilan izohlanadi.

Tokoferolning ta'siri (2-rasm) platoda CL intensivligining pasayishi bilan namoyon bo'ldi, bu zaif antioksidantlar uchun xosdir, garchi tokoferol eng ko'p biri hisoblanadi.

kuchli antioksidantlar. Ehtimol, bu nomuvofiqlik bizning tajribamizda erkin radikallar suvli eritmada bo'lganligi bilan bog'liq bo'lsa, tokoferolning ta'siri odatda qutbsiz muhitda o'rganiladi. Radikallarning manbai kardiolipin bilan sitoxrom c kompleksi bo'lgan va bu kompleks ichida luminol bilan reaksiya sodir bo'lgan tadqiqotda tokoferol o'rtacha kuchli antioksidant xususiyatlariga ega edi.

Kversetinning turli kontsentratsiyalarining bizning tizimimizga ta'sirini o'rganib chiqdik (3-rasm) va uning va natriy askorbat va tokoferolning kinetik egri chizig'ini taqqoslab, shuni ta'kidlash mumkinki, quercetinning asosiy ta'siri qiyaligining o'zgarishida namoyon bo'ladi. egri chiziqlar, ya'ni o'rta kuchli antioksidantlar uchun xos bo'lgan CL ning rivojlanish tezligi.

Barcha o'rganilgan damlamalar uchun CL egri chiziqlari (4-rasm) oxirida CL intensivligining bir oz pasayishi bilan, ya'ni etib kelganida, quercetin uchun egri chiziqlarga o'xshaydi.

Vaqt, min

Guruch. 1. Natriy askorbatining xemiluminesans kinetikasiga ta'siri

Tizim komponentlarining kontsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidaza - 4 nM, vodorod periks - 100 mkM. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,05 mkM; 3 - 0,10 mkM; 4 - 0,15 mkM; 5 - 0,2 mkM; 6 - 0,25 mkM natriy askorbat.

plato. Ishda ko'rsatilganidek, bu xatti-harakat o'rta kuchli antioksidantlar uchun xosdir, bizning holatlarimizda polifenollar - flavonoidlar va taninlar kiradi. Malinali mevalarning infuzioni uchun (4-rasm, D), bu holatda tokoferol kabi zaif antioksidantlar uchun xos bo'lgan plato darajasida kemiluminesansning sezilarli pasayishi kuzatiladi. Quercetin va tokoferol nuqtai nazaridan, malina infuzioni 4,7 ± 0,9 mkmol / g quercetin va 11,9 ± 0,8 mkmol / g tokoferolni o'z ichiga oladi.

O'simlik materiallaridan o'rganilgan to'rtta suvli ekstraktning turli kontsentratsiyasi uchun olingan xemiluminesans egri chiziqlarini solishtirganda, o'rta va kuchsiz antioksidantlarning namunalarning umumiy antioksidant qobiliyatiga qo'shgan hissasi quyidagi ketma-ketlikda kamayganligi ko'rsatilgan: malina mevasi infuzioni (4-rasm). , D), gul dumbasi qaynatmasi (4-rasm, B), rovon mevalari qaynatmasi (4-rasm, A), do'lana mevalari (4-rasm, B). Kyuvetada o'rganilayotgan moddaning C kontsentratsiyasiga asoslangan AS qiymatlari va quercetin bo'yicha umumiy antioksidant quvvati qiymatlari jadvalda keltirilgan.

NATIJALARNING MUHOKAMASI

Tajribalar davomida olingan ma'lumotlar va ular asosida hisoblangan o'rganilayotgan ob'ektlarning OAE qiymatlari kimyoviy tahlil usullari yordamida aniqlangan ulardagi asosiy antioksidantlarning tarkibi bilan taqqoslandi. Turli ob'ektlardagi antioksidantlarning umumiy miqdori va TAU o'rtasidagi ijobiy bog'liqlik shubhasiz bo'lishiga qaramay, bu ko'rsatkichlar o'rtasida hali ham sezilarli farqlar mavjud. Misol uchun, agar flavonoidlar, taninlar va askorbin kislotasi tarkibining yig'indisini oladigan bo'lsak, u do'lana mevalaridan (jadval) tashqari, barcha o'rganilgan ob'ektlar uchun hisoblangan TAU dan kattaroq bo'ladi.

Boshqa tadqiqotchilar ham kimyoviy tahlil natijalari va xemiluminesans usuli bilan aniqlangan TAU qiymati ko'pincha mos kelmasligini ko'rsatdi. Ishlayotganda, umumiy antioksidant quvvati aniqlanadi

46 Vaqt, min

Men" "h chi----.

Guruch. 2. Tokoferolning xemiluminesans kinetikasiga ta'siri

Tizim komponentlarining kontsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidaza - 4 nM, vodorod periks - 100 mkM. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,01 mkM; 3 - 0,025 mkM; 4 - 0,06 mkM; 5 - 0,1 mkM; 6 - 0,2 mkM tokoferol.

46 Vaqt, min

Guruch. 3. Kversetinning xemiluminesans kinetikasiga ta'siri Tizim komponentlarining kontsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidaza - 4 nM, vodorod peroksid - 100 mkM. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,02 mkM; 3 - 0,03 mkM; 4 - 0,04 mkM; 5 - 0,05 mkM; 6 - 0,06 mkM quercetin.

Vaqt, min

46 Vaqt, min

120 I 100 80\60 40 20

46 Vaqt, min

Guruch. 4. Rovon mevalari (A), do'lana (B), atirgul (C) va malina mevalari (D) infuziyasining kimilyuminesans kinetikasiga ta'siri Tizim tarkibiy qismlarining konsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidaza - 4 nM, vodorod periks - 100 mkM . (A) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l rovon mevalari qaynatmasi. (B) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l do'lana mevalaridan qaynatma. (B) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l atirgul qaynatmasi. (D) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g/l malina mevalarining infuzioni.

peroksidaz-luminol-vodorod peroksid tizimida triterpen birikmalarining tarkibi bilan bog'liq. Shu bilan birga, tadqiqot ob'ekti boshqa o'simlik bo'lgan o'sha mualliflarning ishlarida ular OAE ning har qanday moddalar guruhi, shu jumladan flavonoidlar tarkibi bilan bog'liqligini kuzatmaganlar.

Bunday kelishmovchiliklar kamida uchta omil bilan bog'liq. Birinchidan, antioksidantlarning faolligi muhim, ya'ni o'simlik namunasiga kiritilgan turli antioksidantlar uchun ularning radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi. Izmailovning fikriga ko'ra, mexidol, tokoferol va quercetin uchun mos keladigan reaksiyalarning tezlik konstantalari 0,04: 2: 60 korrelyatsiya qiladi. Ikkinchidan, kimyoviy reaktsiyaga kiradigan har bir antioksidant molekula turli xil miqdordagi radikallarni ushlab turishi mumkin. Ishga ko'ra, quercetin, siydik va askorbin kislotalar har bir reaksiyaga kirishgan antioksidant molekula uchun mos ravishda 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 va 0,5 ± 0,2 radikallarni ushlab turishgan (gemin-H2O2-luminol tizimi ishlatilgan). Uchinchidan, tadqiqot natijalariga ishda bo'lgani kabi o'simlik namunalarining o'zida ham peroksidaza faolligi, shuningdek namunalarda kaltsiy borligi ta'sir qilishi mumkin, bu ishda ko'rsatilganidek, ko'paytirishga qodir. muayyan sharoitlarda horseradish peroksidaza faolligi. Bu odatda ko'proq narsaga olib keladi

platoda nazorat egri chizig'iga qaraganda yuqori CL intensivligi, ammo biz buni kuzatmadik.

Birinchi omil yorug'lik yig'indisining o'zgarishi kabi parametrdan foydalanishni keskin cheklaydi, chunki xemiluminesansni o'lchash vaqti sinov namunasidagi barcha antioksidantlarni iste'mol qilish vaqtidan ko'proq bo'lishi kerak. Ushbu momentning paydo bo'lishini faqat kimilyuminesans kinetikasini o'lchash orqali baholash mumkin. Bundan tashqari, zaif antioksidantlarning OAUga qo'shgan hissasi keskin kam baholanadi, chunki ularning to'liq oksidlanish vaqti qabul qilinadigan o'lchash davomiyligidan (10-20 minut) bir necha baravar ko'p.

Antioksidantning stoxiometrik koeffitsienti yanada muhimroqdir. U tomonidan tutilgan n radikallar soni teng

Bu erda p - stexiometrik koeffitsient, Am - o'lchash vaqtida antioksidant konsentratsiyasining o'zgarishi, bizning holatlarimizda, sinov namunasidagi sinov moddasining dastlabki konsentratsiyasi.

Antioksidant yo'qligida va uning mavjudligida lyuminesansning yorug'lik yig'indisi farqi n ga proportsionaldir.Ushlab olingan radikallarning umumiy soni n = Y.p ga teng. m,

bu erda ma'lum bir antioksidantning stexiometrik koeffitsienti va m - o'lchash vaqtida uning konsentratsiyasi

Tadqiqot ob'ekti Flavonoidlar, mg%* Taninlar, mg%* Askorbin kislotasi, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. birliklar TAU, mg% kuersetin

Rowan mevali qaynatma 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Atirgul qaynatmasi 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Do‘lana mevasi qaynatmasi 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Quritilgan malina mevalari infuzioni 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Eslatma: * - adabiyot ma'lumotlari, . AS - namuna uchun yorug'lik summasining o'zgarishi, rel. birliklar, C - kyuvetada namuna konsentratsiyasi, g/l. Hisoblangan qiymatlar p da ishonchli<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

Reniya. Tushunarli radikallarning umumiy soni, albatta, antioksidantlarning umumiy miqdoriga teng emas, chunki pt koeffitsientlari nafaqat birlikka teng, balki turli antioksidantlar uchun ham sezilarli darajada farqlanadi.

n qiymati antioksidant bo'lgan namuna va antioksidantsiz nazorat namunasi o'rtasidagi ma'lum vaqt davomida o'lchangan yorug'lik summalari farqiga proportsionaldir:

Bu erda k - bir xil o'lchash sharoitida doimiy bo'lgan koeffitsient.

Horseradish peroksidaza, vodorod periks va luminoldan tashkil topgan tizimda xemiluminesans kinetikasini qayd etish orqali o'simlik xom ashyosining umumiy antioksidant qobiliyatini baholash shartlarini tanladik (komponent konsentratsiyasi - mos ravishda 4 nM, 100 mM va 40 µM; 20 mMfosfat). bufer, pH 7,4),

10 daqiqada kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rta kuchli antioksidantlar (quercetin) oksidlanishini ta'minladi. Ushbu o'lchov davomiyligi qulay va kerakli o'lchov sifatini ta'minlaydi.

Adabiyot

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Erkin radikallar tartibga solish va patologik jarayonlarning ishtirokchilari sifatida. In: Grigoriev A.I., Vladimirov Yu.A., muharrirlar. Asosiy fanlar - tibbiyot. Biofizika. asal. texnologiya. M.: MAX press; 2015. 1-jild. bet. 38-71.

3. Xasanov V.V., Ryjova G.L., Maltseva E.V. Antioksidantlarni o'rganish usullari. Kimyo. rast. xomashyo. 2004; (3): 63-75.

4. Vasilev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Butovska D. I., Trofimov A. V. Kalkonlarning antioksidant faolligi. Reaktivlikni xemiluminesans yordamida aniqlash va reagentlar va oraliq mahsulotlarning energiyalari va tuzilmalarini kvant-kimyoviy hisoblash. Kinetika va kataliz. 2010; 51 (4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasilyev RF, Veprintsev TL. Peroksi-

radikal vositachi xemiluminesans: mexanik xilma-xillik va antioksidant tahlil uchun asoslar. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Antiradikal imkoniyatlarni H2O2-gemin bilan qo'zg'atilgan luminol xemiluminesans bilan baholash. J Agric Food Chem. 2003 yil 3 dekabr; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V. Erkin radikallar va hujayrali kimiluminesans. Uspekhi biol. kimyo. 2009; 49: 341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kinetik kimiluminesans erkin radikallar reaktsiyalarini o'rganish usuli sifatida. Biofizika. 2011; 56 (6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Xemiluminesans kinetikasini o'lchash orqali antioksidant faollikni aniqlash. Fotobiologiya va fotomeditsina. 2011; 7 (2): 70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termoliz natijasida hosil bo'lgan luminol luminesans. Bepul.

Radic Res Commun. 1992 yil; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD faolligini baholash uchun luminol lyuminestsensiyasini o'chirishdan foydalanish to'g'risida. Bepul Radic Biol Med. 1994 yil iyun; 16 (6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Xanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol bilan kuchaytirilgan xemiluminesans o'lchovlaridan umumiy antioksidant potentsial (TRAP) va umumiy antioksidant reaktivligini baholash. Bepul Radic Biol Med. 1995 yil fevral; 18 (2): 153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. To'xtatilgan oqim texnikasi bilan luminolning lyuminestsent peroksidlanish mexanizmini o'rganish. J Biol Chem. 1968 yil 25 sentyabr; 243 (18): 4706-14.

21. Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. 2,2"-azo-bis (2-amidinopropan) yordamida faollashtirilgan xemiluminesans orqali antioksidantlarni aniqlash. Vestn. MGU. Ser. 2. Chem 2012;53(3): 187-93.

24. SSSR Davlat farmakopeyasi SSSR Sog'liqni saqlash vazirligi XI nashr. jild. 2 «Tahlilning umumiy usullari. Dorivor o‘simlik xomashyosi”. M.: Tibbiyot; 1987. bet. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. Kuşburnu ekstraktsiyasi preparatlarini o'rganish. Dorixona. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Do'lana mevalarini saqlash va suvli ekstraktsiyaning turli usullaridan foydalangan holda o'rganish. Dorixona. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Mevalarning biologik faol moddalari va oddiy malinaning suvli ekstraktlari. Dorixona. 2014 yil; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Do'lana mevalarining biologik faol moddalarini o'rganish - gomeopatik matritsali damlamalarni tayyorlash uchun xom ashyo. Shanba kuni. ilmiy tr. XXIV Moskva materiallari asosida. xalqaro gomeopatist. konf. “Zamonaviy tibbiyotda gomeopatik usulni ishlab chiqish”; 2014 yil 24-25 yanvar; Moskva. M.; 2014. p. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Dorivor o'simlik xom ashyosidagi biologik faol moddalar tarkibini turli xil saqlash usullarini o'rganish. Shanba kuni. XX Ross materiallariga asoslangan tezislar. milliy kong. "Inson va tibbiyot"; 2013 yil 15-19 aprel; Moskva. M.: EKOOnis; 2013. p. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M. A., Neyman P. L. Horseradish ildizlari va ildizlaridan olingan ekstraktlarda peroksidaza faolligini va uning turli ta'sirlarga barqarorligini o'rganish. Vestn. Moskva davlat universiteti. Ser. 2. Kimyo. 2006; 47 (5): 350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Svobodnye radikaly kak uchastniki regulyatornykh i patologicheskikh protsessov. In: Grigor'ev AI, Vladimirov YuA, muharrirlar. Fundamentalnye nauki - medicitsine. Biofizicheskie meditsinskie texnologiyalari. Moskva: MAKS matbuoti; 2015.v. 1. p. 38-71. rus.

2. Chanda S, Dave R. Antioksidant faollikni baholash uchun in vitro modellari va antioksidant xususiyatlarga ega bo'lgan ba'zi dorivor o'simliklar: Umumiy ko'rinish. Afr J Microbiol Res. 2009 yil dekabr; 3 (13): 981-96.

3. Xasanov VV, Ryjova G.L., Mal"tseva EV. Metodik issledovaniya antioksidant. Ximija Rastitel"nogo Sir"ja. 2004; (3): 63-75. Rus.

4. Vasil"ev RF, K""ncheva VD, Fedorova GF, B""tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" xalkonov. Xemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti i kvantovo-ximicheskii raschet energii i stroeniya reagentov va intermediatov. Kinetika va kataliz. 2010; 51 (4): 533-41. rus.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA va boshqalar. Curcumin bilan bog'liq bo'lgan birikmalarning antioksidant potentsiali xemiluminesans kinetikasi, zanjirni buzish samaradorligi, tozalash faolligi (ORAC) va DFT hisob-kitoblari bilan o'rganiladi. Beilstein J Org Chem. 2015 yil 11 avgust; 11: 1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasilyev RF, Veprintsev TL.Peroksi-radikal vositachilik xemiluminesans: mexanik xilma-xillik va antioksidant tahlil uchun asoslar. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasilyev RF. Sabzavot lipidlarining antioksidant xossalari uchun oson xemiluminesans tahlili: asoslar va tasviriy misollar. Tahlilchi. 2009 yil, 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-gemin tomonidan qo'zg'atilgan luminol bilan antiradikal imkoniyatlarni baholash

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Svobodnye radikaly i kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49: 341-88. rus.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya kak metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. Biofizika. 2011; 56 (6): 1081-90. rus.

11. Izmailov DYu, Demin E.M., Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiologiya va fotomeditsina. 2011; 7 (2): 70-6. rus.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termoliz natijasida hosil bo'lgan luminol luminesans. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD faolligini baholash uchun luminol lyuminestsensiyasini o'chirishdan foydalanish to'g'risida. Bepul Radic Biol Med. 1994 yil iyun; 16 (6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Methemoglobin yoki oksihemoglobin o'rtasidagi vodorod periks bilan reaktsiyasi bilan bog'liq ko'rinadigan chemiluminesans. Photochem Photobiol. 1994 yil noyabr; 60 (5): 405-11.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV va boshqalar. HRP-H2O2-luminol tizimi tomonidan liposomal flavonollarning antioksidant faolligini in vitro baholash. J Mikrokapsula. 2011; 28 (4): 258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Mexanizmni tekshirish

to'xtatilgan oqim texnikasi bilan luminolning lyuminestsent peroksidlanishi. J Biol Chem. 1968 yil 25 sentyabr; 243 (18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Fitokimyoviy xususiyatlar, erkin radikallarni tozalash faoliyati va beshta dorivor o'simlik ekstraktining neyroproteksiyasi. Evidga asoslangan komplement Alternativ Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 yil 10-avgust.

19. Chang CL, Lin CS. Terminalia chebula Retzius ekstraktlarining fitokimyoviy tarkibi, antioksidant faolligi va neyroprotektiv ta'siri. Evidga asoslangan komplement Alternativ Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011 yil 5-iyul.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Xemiluminesans usuli bilan turli flavonoidlarning antioksidant faolligini baholash. AAPS PharmSci. 2003; 5 (2): 111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol"zovaniem 2,2"-azo-bis(2-amidinopropana). Moskva universiteti kimyo byulleteni. 2012; 53 (3): 187-93. rus.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. O'simlik ekstraktlarining antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun optimallashtirilgan xemiluminesans tahlilini qo'llash. Luminesans. 2012 yil noyabr-dekabr; 27 (6): 505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Xemilyuminesans inhibisyon tahlili orqali biologik namunalarda aniqlangan umumiy parametr sifatida umumiy past molekulyar og'irlikdagi antioksidantlar. Nat Protoc. 2010 yil sentyabr; 5 (10): 1627-34.

24. SSSR vazirlik zdravooxraneniya. Gosudarsvennaya farmokopeya SSSR. 11-nashr. Iss. 2. «Obshchie metodikasi tahlili».

Lekarstvennoe rastitel "noe sir"e. Moskva: Medltsina; 1987. 147-8-betlar. Rus.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. Dorixona. 2012; (2): 14-6. rus.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii va vodnykh izvlechenii. Farmatsiya. 2010; (5): 16-8. rus.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsiya. 2014 yil; (1): 8-10. rus.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr"ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. "Razvitie gomeopaticheskogo methoda v sovremennoi meditine" 14-Moskva xalqaro gomeopatik konferentsiya materiallari. 146-bet. 7. Rus.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicalheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr"e razlichnykh sposobov konservatsii. "Chelovek i lekarstvo" 20-Rossiya Milliy Kongressi materiallari; 2013 yil 1519 aprel; Moskva. Moskva: EkOOnis; 2013. p. 184-90. rus.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neyman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktakh iz kornevishcha i kornei khrena i ee stabil"nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moskva universiteti kimyo byulleteni. 2006; 47 (5): 350-2. Rus.

1 Bolshakova L.S. 1Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi "Oryol davlat iqtisodiyot va savdo instituti"

2 Federal davlat byudjet muassasasi "Orlovskiy" Kimyoviylashtirish va qishloq xo'jaligi radiologiyasi markazi

3 Federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi "Davlat universiteti - o'quv, ilmiy-ishlab chiqarish majmuasi"

Oziq moddalarning antioksidant faolligini baholash uchun xemiluminesansdan foydalanish imkoniyati o'rganildi. Taklif etilayotgan usul ishqoriy muhitda luminolning xemilyuminessensiyasiga asoslangan bo'lib, uning intensivligi kimiluminesans namunadagi peroksidlar miqdoriga bog'liq. Kimyoluminesans dozalash pompasi, yorug'lik o'tkazmaydigan kamera, shisha vakuumli fotoko'paytirgich va kompyuter tizimini o'z ichiga olgan ishlab chiqilgan qurilma yordamida qayd etildi. Xemiluminesansni kuchaytirish uchun luminolga kaliy temir sulfid eritmasi qo'shildi. Xemiluminesans intensivligidagi o'zgarishlar tahlil qilingan namunani luminol eritmasiga kiritish vaqtida qayd etilgan. Tahlil qilingan namuna sifatida quruq past haroratli distillash orqali olingan karahindiba ekstrakti ishlatilgan. Uning tarkibida yuqori antioksidant faolligi bilan mashhur fenolik birikmalar mavjud. Xemiluminesans usuli yordamida turli oziq-ovqat birikmalarining antioksidant xususiyatlarini aniqlash mumkinligi aniqlandi.

Bibliografik havola

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. OZIQ-OVQAT MADDALARINI ANTIOKSIDANT XUSUSIYATLARINI BAHOLASH UCHUN XEMILYUMİNESSENSIYADAN FOYDALANISH // Ratsional ovqatlanish, oziq-ovqat qo‘shimchalari va biostimulyatorlar. – 2014. – No 6. – B. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (kirish sanasi: 17.12.2019). "Tabiiy fanlar akademiyasi" nashriyoti tomonidan chop etilgan jurnallarni e'tiboringizga havola etamiz.

diplom ishi

1.4 Antioksidantlarni tadqiq qilish usullari

antioksidant faollik tasniflanadi: namoyon bo'lgan AOA ni qayd qilish usullari bo'yicha (volümetrik, fotometrik, kimiluminesans, lyuminestsent, elektrokimyoviy); oksidlanish manbasining turi bo'yicha; oksidlanadigan birikma turi bo'yicha; oksidlangan birikmani o'lchash usuli bilan.

Biroq, antioksidant faollikni aniqlashning eng mashhur usullari:

1 TEAC (trolox ekvivalenti antioksidant quvvati): usul quyidagi reaksiyaga asoslangan:

Metmioglobin + H 2 O 2 > Ferrilglobin + ABTS > ABTS * + AO.

Trolox ekvivalentlari usuli (TEAC) antioksidantlarning 2,2-azinobis radikal kationlarini (ABTS) kamaytirish qobiliyatiga asoslanadi va shu bilan spektrning uzun to'lqinli mintaqasida (600 nm) so'rilishini inhibe qiladi. Usulning muhim kamchiligi - bu radikal hosil qilish uchun ikki bosqichli reaktsiya. Bu tahlil qilish vaqtini uzaytiradi va tahlil uchun standartlashtirilgan reagentlar to'plamidan foydalanilganiga qaramay, natijalarning tarqalishini oshirishi mumkin.

2 FRAP (temir kamaytiruvchi antioksidant quvvat): usul quyidagi reaktsiyaga asoslangan:

Fe (III) - Tripiriditriazin + AO> Fe (II) - Tripiridiltriazin.

Temirni kamaytiruvchi/antioksidant qobiliyati (FRAP). Bu erda qo'llaniladigan reaksiya Fe (III) - tripiridiltriazinni Fe (II) - tripiridiltriazinga qaytarishdir. Biroq, bu usul ba'zi antioksidantlarni, masalan, glutationni aniqlashni aniqlay olmaydi. Bu usul past molekulyar og'irlikdagi antioksidantlarni bevosita aniqlash imkonini beradi. Past pHda Fe (III)-tripiridiltriazin kompleksining Fe (II) kompleksiga qisqarishi kuchli ko'k rangning paydo bo'lishi bilan birga keladi. O'lchovlar antioksidantlarning reaktsiya aralashmasida hosil bo'lgan reaktsiya turlarining oksidlovchi ta'sirini bostirish qobiliyatiga asoslanadi. Ushbu usul sodda, tez va arzon narxlarda amalga oshiriladi.

3 ORAC (kislorod radikalini yutish qobiliyati): usul quyidagi reaktsiyaga asoslangan:

Fe(II)+H 2 O 2 >Fe(III) + OH*+AO>OH* + Luminol.

Kislorod radikalini yutish qobiliyatini aniqlash (ORAC). Bu usulda substratning (fikoeritrin yoki flüoresein) ROS bilan o'zaro ta'siri natijasida paydo bo'ladigan floresansi qayd etiladi. Agar sinov namunasida antioksidantlar mavjud bo'lsa, u holda nazorat namunasi bilan solishtirganda floresansning pasayishi kuzatiladi. Ushbu usul dastlab 1992 yilda qarish bo'yicha Milliy institutda doktor Guohua Kao tomonidan ishlab chiqilgan. 1996 yilda doktor Kao USDA qarish tadqiqot markazida qo'shma guruhda doktor Ronald Prayer bilan hamkorlik qildi, bu erda yarim avtomatlashtirilgan usul edi. yaratilgan.

4 TRAP (jami radikal tuzoqqa qarshi antioksidant parametr): usul quyidagi reaksiyaga asoslangan:

AAPH+AO>AAPH* + PL (FE).

Bu usul antioksidantlarning peroksil radikali 2,2-azobis (2-amidinopropan) dihidroxlorid (AAPH) bilan o'zaro ta'sir qilish qobiliyatidan foydalanadi. TRAP modifikatsiyalari analitik signalni yozish usullaridan iborat. Ko'pincha, tahlilning yakuniy bosqichida peroksi radikali AAPH lyuminestsent (luminol), floresan (diklorofloressein diasetat, DCFH-DA) yoki boshqa optik faol substrat bilan o'zaro ta'sir qiladi.

Suvda eruvchan E vitamini hosilasi Trolox (6-gidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksi kislotasi) TEAC, ORAC va TRAP usullari uchun standart sifatida ishlatiladi.

So'nggi paytlarda antioksidant faollikni baholash uchun elektrokimyoviy usullardan foydalanishga qiziqish ortdi. Bu usullar yuqori sezuvchanlik va tezkor tahlilga ega.

Ba'zi oziq-ovqat mahsulotlarining antioksidant faolligini baholash antioksidant moddalarning enol (-OH) va sulfgidril (-SH) guruhlari tufayli oksidlanish-qaytarilish reaktsiyalarida ishtirok etish xususiyatidan foydalanishga asoslangan potensiometriya usuli bilan amalga oshiriladi.

Eritmalarning antioksidant xususiyatlarini aniqlash antioksidantlarning mediator tizimi bilan kimyoviy o'zaro ta'siriga asoslanadi, bu esa uning oksidlanish-qaytarilish potentsialining o'zgarishiga olib keladi. Elektrokimyoviy hujayra - oksidlanish-qaytarilish potentsialini o'lchashdan oldin K-Na-fosfat bufer eritmasi, Fe (III) / Fe (II) vositachi tizimi va murakkab elektrodni o'z ichiga olgan idish. Antioksidant faolligi g-ekv/l da baholanadi.

Antioksidant faollikni aniqlashning amperometrik usuli ma'lum bir potentsial ostida bo'lgan ishchi elektrod yuzasida tekshirilayotgan moddaning oksidlanishi paytida yuzaga keladigan elektr tokini o'lchashga asoslangan. Amperometrik usulning sezgirligi ishchi elektrodning tabiati va unga qo'llaniladigan potentsial bilan belgilanadi. Polifenollar va flavonoidlarning amperometrik detektorini aniqlash chegarasi nano-pikogramma darajasida; bunday past konsentratsiyalarda turli xil antioksidantlar birgalikda mavjud bo'lganda, xususan, sinergiya fenomenining namoyon bo'lishida o'zaro ta'sir qilish ehtimoli kamroq bo'ladi. . Usulning kamchiliklari uning o'ziga xosligini o'z ichiga oladi: bu sharoitda kislorodning elektroreduksiya potentsiallari hududida oksidlangan yoki kamaygan antioksidantlarni tahlil qilib bo'lmaydi. Usulning afzalliklari uning tezligi, prostata va sezgirlikni o'z ichiga oladi.

Elektr hosil bo'lgan oksidlovchilardan foydalangan holda galvanostatik kulometriya usuli - bu usul yog'da eriydigan antioksidantlarni tahlil qilish uchun qo'llaniladi.

Askorbin kislotani aniqlashning turli usullari ishlab chiqilgan:

eritmaga oddiy botirish yo'li bilan nikel (II) geksasiyanoferrat plyonkasi bilan o'zgartirilgan alyuminiy elektrod yordamida amperometrik usul;

indikator kukuni sifatida Wawele reaktivi va mis (II) bilan modifikatsiyalangan kremniy kislotasi kserogel yordamida askorbin kislotani qattiq fazali spektrofotometrik va vizual sinovdan aniqlash usuli;

askorbin kislotani xemiluminesans bilan aniqlash sulfat kislota muhitida rodamin B ning seriy (IV) bilan kimilyuminesans reaktsiyasidan foydalangan holda oqimli in'ektsiya usuli bilan amalga oshirilishi mumkin.

suvli va suvli-organik muhitda anodik voltammetriya yordamida 10 -8 -10 -3 g/sm 3 oralig'ida askorbin kislotani aniqlash.

Eng keng tarqalgani FRAP usulidir, chunki u tez va juda sezgir. So'nggi bir necha o'n yilliklarda FRAP usuli yordamida antioksidant faollikni aniqlashning ko'plab turlari ishlab chiqildi (1-jadval).

1-jadval FRAP usulini ishlab chiqish va uni turli ob'ektlarning antioksidant faolligini aniqlash uchun qo'llash

	Tahlil ob'ektlari	Eslatmalar
	Qon plazmasi	t=4min. Reaksiya stoxiometriyasi va qo'shilish qobiliyati o'rganildi.
	Choy, vino	Polifenollar tufayli AOA ni aniqlash
		Turli xil choy navlarining AOA qiymatlari solishtirildi
Pulido, Bravo, Saura-Kaliksto	Model yechimlari	t=30min. Suvsiz erituvchining ta'siri aniqlandi
	O'simliklar
	Qon, to'qima	PIA usuli. Chet moddalarning ta'siri sinovdan o'tkazildi.
Firuzi, Lakanna, Petruchchi e.a.	Model yechimlari	Turli AO larni aniqlashning sezgirligi ularning tuzilishi va oksidlanish-qaytarilish potentsialiga bog'liq holda o'rganildi.
Katalinich, Milos,	Har xil vinolar
Temerdashev, Tsyupko va boshqalar.	Model aralashmalari
Loginova, Konovalova	Dorilar Dorilar	Sinov usuli
Temerdashev, Tsyupko va boshqalar.	Quruq qizil sharob	AOA ning vino sifatining boshqa ko'rsatkichlari bilan bog'liqligi
1-jadvalning davomi
	Model aralashmalari	Turli AO larni aniqlashning sezgirligi o'rganildi
Vershinin, Vlasova, Tsyupko	Model aralashmalari	Oksidlovchi moddaning etishmasligi mavjud bo'lganda signal qo'shimcha emasligi aniqlandi
Anisimovich, Deineka va boshqalar.	Model yechimlari	AOAni baholash uchun kinetik parametrlar taklif qilingan.

Izohlar: An'anaviy tarzda tayinlangan: FIA-oqimli in'ektsiya tahlili, TPTZ-tripiridiltriazin, DIP-2,2,-dipiridil, PHEN-o-fenantrolin, DPA-piridindikarboksilik kislota, FZ-ferrozin, AA-askorbin kislotasi, CT-katexol, t - ta'sir qilish vaqti, min.

Suvli eritmalardagi oqsillar va polielektrolitlarning o'zaro ta'siri

Protein-polielektrolit komplekslarini tavsiflash uchun turli xil analitik usullar qo'llaniladi. Instrumental usullar strukturaviy va optik xususiyatlar haqida ma'lumot beradi, shuningdek, PEC ulanishining dinamikasi va tabiatini aniqlaydi ...

d-metall birikmalarining bipolyar membranada suv molekulasining dissotsilanish tezligiga ta'siri.

Yangi BPMlarni sintez qilish jarayonida, sintez qilingan membranalarning elektrokimyoviy xususiyatlarini yaxshilashni ta'minlaydigan sintez sharoitlarini keyingi tanlash uchun olingan namunalarning xususiyatlarini o'rganishga katta e'tibor qaratish lozim...

Dizayner preparatlari va sintetik kannabinoidlar

O'simlik aralashmalarida sintetik kannabinoidlarni aniqlash turli xil fizik-kimyoviy usullar bilan amalga oshirilishi mumkin, masalan, xromatografiya-massa spektrometriyasi, gaz xromatografiyasi, yupqa qatlamli xromatografiya va yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi...

Dorivor o'simlik materiallarida flavonoidlarni aniqlash usulini ishlab chiqish

Xinolinonlarning sintezi va farmakologik xossalari-2

Tadqiqot ob'ekti: Xinolinon-2. Tadqiqot usuli: "Marvin JS" kompyuter dasturidan foydalanib, moddaning tuzilishi yaratildi. Keyin u keyingi tadqiqotlar uchun "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php" saytiga yuborildi...

Epoksi polimer bug'lanish mahsulotlarini o'rganish uchun termal spektral usul

Qisqichbaqasimonlar qobig'idan yuqori darajada tozalangan xitozan olish texnologiyasi

Xitozanning molekulyar og'irligini aniqlash Xitosanning molekulyar og'irligi standart usul yordamida viskometrik tarzda aniqlandi. 0,05 va 0,5 g/dl konsentratsiyali eritmalar polimer kukuni namunasini asetat tamponida (0...) eritib tayyorlandi.

Tabiat bog'i hududining fiziografik xususiyatlari

1 Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi "Oryol davlat iqtisodiyot va savdo instituti"

2 Federal davlat byudjet muassasasi "Orlovskiy" Kimyoviylashtirish va qishloq xo'jaligi radiologiyasi markazi

3 Federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi "Davlat universiteti - o'quv, ilmiy-ishlab chiqarish majmuasi"

kimyoluminesans

antioksidant faollik

peroksidlar

ozuqa moddalari

1. Vasilev R.F. Kimyoviy porlash // Kimyo va kimyogarlar, 01.21.10. – URL: http://chemistry-chemists.com. (kirish sanasi: 22.08.13).

2. Vladimirov Yu.A. Erkin radikallar va antioksidantlar // Vestn. RAMS. – 1998. – No 7. – B. 43–51.

3. Kondrashova E.A. Xemiluminesans ferment immunoassayning eng sezgir usuli sifatida va uni qo'llash // Klinik laboratoriya diagnostikasi. – 1999. – No 9. – B. 32.

4. Lyubimov, G.Yu. Xemiluminesans tahlili // Immunologiya. – 1991. – No 1. – B. 40–49.

5. Mayanskiy A.N., Nevmyatullin A.L., Chebotar I.V. Fagotsitoz tizimidagi reaktiv xemiluminesans // Mikrobiologiya. – 1987. – No 1. – B. 109–115.

6. Sherstnev M.P. Hujayra xemiluminesansini yaratish uchun kaltsiyga bog'liq va kaltsiyga bog'liq bo'lmagan yo'llar // Kimiluminesans savollari. – 1991. – No 2. – B. 1–4.

Bugungi kunda kimyoluminesans kimyo, fizika va biologiya o'rtasidagi chegarada joylashgan fanning katta sohasini ifodalaydi. Xemiluminesans bilan kimyoviy energiyani elektromagnit tebranishlar energiyasiga to'g'ridan-to'g'ri aylantirish sodir bo'ladi, ya'ni. dunyoga Xemiluminesans yordamida siz reaksiya qanday borishini, uning mexanizmi nimadan iboratligini, texnologik jarayonlarni samarali va samarali amalga oshirish uchun nima zarurligini bilib olishingiz mumkin. Agar kimyoviy mahsulot ishlab chiqarishning texnologik jarayoni kimyoluminesans bilan birga bo'lsa, unda uning intensivligi jarayon tezligining o'lchovi bo'lib xizmat qilishi mumkin: reaksiya qanchalik tez bo'lsa, porlash shunchalik yorqinroq bo'ladi. Xemiluminesans reaktsiyasi jarayonida energiyaga boy mahsulotlar olinadi, keyin ular yorug'lik chiqarish orqali energiya chiqaradi, ya'ni kimyoviy energiya elektromagnit nurlanish energiyasiga aylanadi.

Tadqiqotning maqsadi ozuqa moddalarining antioksidant faolligini baholash uchun xemiluminesansdan foydalanish imkoniyatini o'rganishdir.

Tadqiqot natijalari va muhokama

Oziq moddalarning antioksidant faolligini baholash muammosi juda dolzarbdir. Muayyan mahsulotning foydaliligini ko'rsatish uchun "antioksidant faollik" atamasidan foydalanish ko'pincha kimyoviy yoki biokimyoviy dalillarsiz amalga oshiriladi. Qoida tariqasida, har qanday moddaning antioksidant faolligi peroksid qiymatini kamaytirish samaradorligini anglatadi. Peroksid qiymati tushunchasining o'zi ham uning kimyoviy mohiyatini to'liq ochib bermaydi, chunki u ma'lum bir oziq-ovqat mahsulotining metabolizm bosqichlarining kinetikasi va termodinamikasiga to'liq mos kelmaydi. Bundan tashqari, bu qiymat yog'lar shaklida lipidlarni tavsiflash uchun ishlatiladi. Shu bilan birga, organizmdagi oksidlanish va peroksidlarning hosil bo'lishi jarayonlari nafaqat yog'larni, balki boshqa oziq-ovqatlarni iste'mol qilganda ham sodir bo'ladi. Boshqacha qilib aytadigan bo'lsak, ma'lum bir mahsulotdagi peroksid tarkibini qandaydir tarozida "tortishgan" deb aytish mumkin, bu erda "mos og'irlik" peroksidlar bilan oksidlangan yodid ionining kislotali muhitdagi kontsentratsiyasi birligidir. natijasida molekulyar yod hosil bo'ladi:

I- - e → I; (1)

I + I → I20. (2)

Molekulyar yod natriy tiosulfat bo'lgan eritma bilan titrlanganda uning kontsentratsiyasi aniqlanadi va shuning uchun oksidlovchi yodid ionlarining miqdori aniqlanadi, ya'ni. peroksid birikmalari, bu aslida peroksid soni deb ataladi. Ushbu turdagi "tortishish" yordamida peroksid sonini aniqlash rasmda ko'rsatilgan reaktsiyaga asoslanadi. 1.

Guruch. 1. Natriy tiosulfat yordamida peroksid qiymatini aniqlash

Shunday qilib, peroksidlarning kontsentratsiyasi tenglamadan aniqlanadi

S(I2) = s(C[-O-O-]), (3)

bu erda s - molekulyar yod konsentratsiyasi va peroksid konsentratsiyasi o'rtasidagi korrelyatsiya koeffitsienti.

Mahsulotlardagi peroksidlarni aniqlash uchun biz taklif qilayotgan usul ishqoriy muhitda luminolning (C[lm]) xemilyuminessensiyasiga asoslanadi, uning intensivligi (Ichl) suv tarkibidagi peroksidlarning (C[-O-O-]) kontsentratsiyasiga bog'liq. kimyoluminesans namunasi:

IHL = chhl ō, (4)

bu yerda phl - xemiluminesansning kvant rentabelligi; ō - peroksidlar ishtirokidagi reaksiya tezligi:

khlC[-O-O-] C[lm] = ō, (5)

Bu erda khl - reaksiya tezligi doimiysi yoki da:

C[lm] khl chhl = K, (6)

IHL = K C[ -O-O- ]. (7).

Peroksidlar miqdori (-O-O-) yorug'lik yig'indisi (S) bilan aniqlanadi:

S ning qiymati xemiluminesans reaktsiyasida peroksidni to'liq iste'mol qilish darajasiga bog'liq.

Doimiy K ni aniqlash uchun yorug'lik yig'indisi S ning peroksid kontsentratsiyasiga bog'liqligi uchun kalibrlash egri chizig'i tuziladi, bu titrlash orqali aniqlanadi:

S = f (C[-O-O-]). (9)

Vodorod periks H2O2 peroksid sifatida ishlatiladi.

Keyin (3) va (9) tenglamadan olingan ma'lumotlar solishtiriladi. s va K ni taqqoslash asosida ushbu usullar bilan peroksidlarni aniqlashda yotgan reaksiya mexanizmlarining kelishilganligi haqida xulosa chiqariladi. Peroksid kontsentratsiyasining ushbu oralig'ida p va K ning haqiqatda bir-biriga mos kelishi va shuning uchun ular peroksid sonini aniqlash uchun ishlatilishi mumkinligi aniqlandi.

Xemiluminesans luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik kislota gidrazid, H2L) bo'lgan ishqoriy muhitda kuzatildi. U shisha vakuumli fotomultiplikatorni o'z ichiga olgan xemilyuminessent moslama yordamida yozib olingan. Fotoko‘paytirgich fotoko‘paytirgich signalini kuchaytiruvchi blokga (9) ulangan yuqori voltli rektifikator (7) orqali quvvatlanadi, u kompyuter monitorining displeyida (5) qayd etiladi.

Guruch. 2. Tahlil qilinayotgan mahsulotning ximiluminesansini ro'yxatga olish: 1 - dozalash pompasi; 2 - yorug'lik o'tkazmaydigan kamera; 3 - oyna; 4 - kyuvet; 5 - kompyuter tizimi; 6 - fotoko'paytirgich; 7 - yuqori voltli rektifikator; 8 - xemiluminesans nurlanishning spektral hududini aniqlash imkonini beruvchi qurilma; 9 - fotomultiplikator signalini kuchaytiruvchi blok

Tahlil qilingan namunani luminolning xemiluminesans eritmasi bo'lgan kyuvetaga (4) kiritish uchun dozalash pompasi (1) kerak. Ushbu dispenser kimyoluminesans eritmasi bilan AOK qilingan namuna uchun mikser vazifasini bajaradi. Reaksiya tezligini va xemiluminesans intensivligini oshirish uchun luminolga kaliy temir sulfid eritmasi qo'shildi. Aralashtirish eritma suyuqlik orqali havo pompalanishi natijasida olingan havo pufakchalari orqali amalga oshiriladi. Yorug'lik o'tkazmaydigan kamerada (2) joylashgan oyna (3) yorug'lik o'tkazmaydigan kameraga o'rnatilgan fotoko'paytirgichning (6) fotokatodiga tushgan xemilyuminessent nurlanishni yaxshiroq yorug'lik bilan to'plash uchun xizmat qiladi. Dispenser tajribalar paytida yorug'lik o'tkazmaydigan kamerani (2) ochmasdan kyuvetaga kerakli suyuqlik komponentlarini kiritish imkonini beradi. Bunda bu suyuqliklar kyuvetaga (4) shisha yoki plastmassa naychalar orqali kiradi. Kompyuter tizimi yorug'lik intensivligining I ning t vaqtiga bog'liqligini, ya'ni kimiluminesans kinetikasini qayd etish imkonini beradi:

EHM tizimi I = f(t) funksiyadagi yuksalish va pasayish konstantalarini aks ettiradi, ular xemiluminesansni yuzaga keltiruvchi reaksiyalarning tezlik konstantalari, ya’ni ularning kinetikasi bilan bog‘liq. Xemilyuminessent kameraga qurilma (8) kiritilgan bo'lib, u kimyoviy nurlanishning spektral mintaqasini, ya'ni bog'liqligini aniqlashga imkon beradi:

I = f1(l). (o'n bir)

Ushbu blok disk shaklidagi kasseta bo'lib, uning ichiga chegara filtrlari o'rnatiladi. Filtrlarni almashtirish filtrlar tekisligining markazlarini va fotoko'paytirgichning fotokatodining tekisligini bog'laydigan gorizontal o'qga nisbatan diskli kassetani aylantirish orqali amalga oshiriladi.

O'lchov jarayoni quyidagicha amalga oshiriladi:

1. Fotoko'paytirgichning uning ta'minot kuchlanishining o'zgarishiga va uning katodiga tushadigan etalon yorug'lik manbai intensivligining o'zgarishiga reaktsiyasi o'rnatiladi.

2. Kyuvetaga luminolning ishqoriy muhitdagi eritmasi solinadi.

3. Dispenser tahlil qilingan namuna bilan to'ldiriladi.

4. Xemiluminesans intensivligining t vaqtga bog'liqligi qayd etiladi. Xemiluminesansni kuzatish t1 vaqtga qadar olib boriladi, bunda I1 ning t vaqtidan oʻzgarishi minimal boʻladi: I1 = f1(t).

5. Tahlil qilingan eritmaning bir qismi dispenser yordamida beriladi.

6. Tahlil qilinayotgan namunaning xemiluminesansligi kuzatiladi, uning kinetikasi I = f(t).

Shaklda. 3-rasmda tahlil qilinadigan eritma kiritilgandan so'ng (I = f(t)) grafik bilan bog'langan (I1 = f1(t)) funktsiyalarning bog'liqligi grafigi ko'rsatilgan.

Shakldan ko'rinib turibdiki. 3, luminol chemiluminescence intensivligi o'zgaradi: keskin ko'tarilish tahlil qilingan namunani qo'shgandan so'ng luminesansning keskin pasayishi bilan kuzatiladi.

Luminolning oksidlanishida xemiluminesansning ortishi peroksidlar hosil bo'lishi bilan bog'liq bo'lganligi sababli, tahlil qilinayotgan namuna kiritilgandan keyin xemiluminesans intensivligining pasayishi ularning miqdori kamayganligini ko'rsatadi. Shunday qilib, tahlil qilingan namunaga kiritilgan birikmalarda antioksidant faollik mavjudligi haqida gapirish mumkin.

Shuni ta'kidlash kerakki, tahlil qilingan namuna quruq past haroratli distillash orqali olingan karahindiba ekstrakti bo'lib, uning tarkibida yuqori antioksidant faolligi bilan mashhur fenolik birikmalar mavjud.

Guruch. 3. Tahlil qilinadigan eritma kiritilgandan so'ng (I = f(t)) grafik bilan birlashtirilgan funktsiyaga bog'liqlik grafigi (I1 = f1(t))

Bundan tashqari, tajriba shuni ko'rsatdiki, xemiluminesans yordamida ultra suyultirilgan tizimlarda peroksidlar miqdorini aniqlash mumkin, bu mahsulotlarning oksidlanish boshlanishini baholash uchun muhim ahamiyatga ega, masalan, saqlash paytida.

Shunday qilib, tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ishqoriy muhitda luminolning xemiluminesansiyasiga asoslangan mahsulotlardagi peroksidlarni aniqlash usuli oziq-ovqat moddalarining antioksidant faolligini baholashga imkon beradi va turli xil oziq-ovqat birikmalarining antioksidant xususiyatlarini aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. .

Taqrizchilar:

Litvinova E.V., texnika fanlari doktori, texnologiya, tashkil etish va oziq-ovqat gigienasi kafedrasi professori, "OrelGIET" federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi, Orel;

Kovaleva O.A., biologiya fanlari doktori, institut direktori, federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi "Oryol davlat agrar universiteti", Orel.

Asar muharrir tomonidan 2013 yil 8 noyabrda olingan.

Bibliografik havola

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. OZIQ-OVQAT MADDALARINI ANTIOKSIDANT XUSUSIYATLARINI BAHOLASH UCHUN XEMILYUMİNESSENSIYANI FOYDALANISH // Fundamental tadqiqotlar. – 2013. – 10-11-son. – B. 2436-2439;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32810 (kirish sanasi: 17.12.2019). "Tabiiy fanlar akademiyasi" nashriyoti tomonidan chop etilgan jurnallarni e'tiboringizga havola etamiz.

izoh kimyo fanlari bo'yicha ilmiy maqola, ilmiy ish muallifi - Georgiy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Tegishli mavzular kimyo fanlari bo'yicha ilmiy ishlar, ilmiy ish mualliflari - Georgiy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Dorivor o'simlik materialida umumiy antioksidant quvvatni kimyoluminesans yordamida aniqlash

Ilmiy ish matni "Dorivor o'simlik materiallarining umumiy antioksidant qobiliyatini aniqlashning xemiluminesans usuli" mavzusida

Bibliografik havola

1.4 Antioksidantlarni tadqiq qilish usullari

Bibliografik havola

Hujayra organellalarining vazifalari

Ijtimoiy fanlardan insho yozish algoritmi

Chernobil shohidlarining xotiralarida Chernobil dahshatli voqealari