] bununla birlikte, antioksidanların kimyasal bileşikler olarak tanımı, incelenen nesnenin koruyucu özelliklerinin tam bir resmini vermez: bunlar yalnızca belirli bir antioksidanın miktarına göre değil, aynı zamanda her birinin aktivitesine göre de belirlenir. Antioksidan aktivite veya antioksidan aktivite, AOA, bir antioksidanın serbest radikalle (kInH) reaksiyonunun hız sabitidir. Kemilüminesans (CL) yöntemi, bir numunedeki antioksidanları bağlayan toplam radikal miktarını (toplam antioksidan kapasitesi, TAU) ve CL kinetiğinin matematiksel modelleme yöntemini kullanırken ayrıca radikallerin oluşum ve reaksiyon hızını belirlemenizi sağlar. antioksidanlar, yani AOA [, ,].

Toplam antioksidan kapasiteyi belirlemek için kemilüminesans yönteminin en yaygın modifikasyonu, kemilüminesans aktivatörü olarak luminolün kullanımına dayanmaktadır [, , ,]. Bir numune, lüminol, hidrojen peroksit ve kendiliğinden ayrışma (termoliz) sonucunda radikal oluşturabilen bir bileşiğin, örneğin 2,2'-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorürün (ABAP) eklenmesiyle bir kemilüminometre küvetine yerleştirilir. ): ABAP → 2R. Moleküler oksijen varlığında alkil radikali R, peroksil radikali ROO'yu oluşturur: R + O2 → ROO. Daha sonra peroksil radikali, kemilüminesans prob luminolü (LH2) oksitler ve luminol radikali (LH) oluşur: ROO + LH2 → ROOH + LH. LH'den, ara maddelerin (luminol hidroperoksit ve luminol endoperoksit) oluşumu yoluyla, luminol oksidasyonunun son ürünü olan aminoftalik asidin bir molekülü, elektronik olarak uyarılmış bir durumda oluşur, bir foton yayar ve bunun sonucunda kemilüminesans gözlenir. . CL yoğunluğu foton üretim hızıyla orantılıdır ve sistemdeki sabit LH konsantrasyonuyla da orantılıdır. Antioksidanlar radikallerle etkileşime girerek açıklanan dönüşüm zincirini kesintiye uğratır ve foton oluşumunu engeller.

Kemilüminesans yöntemi kullanılarak bir numunenin antioksidan kapasitesi analiz edilirken, termolize duyarlı bileşikler olası tek radikal kaynağı değildir. Alternatifler yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit [, ], hemin-hidrojen peroksit, sitokrom sistemleridir. İle–kardiolipin–hidrojen peroksit, vb. Luminolün peroksidazlar tarafından oksidasyonuna yönelik reaksiyon şeması Cormier ve ark.'nın çalışmasında dikkate alınmıştır. .

Bu sistemler için CL kinetik eğrileri reaksiyonun iki aşamasını yansıtır: CL yoğunluğunun arttığı aşama ve CL yoğunluğunun sabit olduğu veya yavaş yavaş azaldığı bir plato aşaması veya lüminesansta kademeli düşüş aşaması. Çalışma, eğrilerin bu özelliğini dikkate alan toplam antioksidan kapasiteyi ölçmeye yönelik iki yaklaşımı açıklamaktadır. TRAP (Toplam Reaktif Antioksidan Potansiyeli) yöntemi CL'nin latent periyodunun ölçülmesine dayanmaktadır. τ ve Trolox veya askorbik asit gibi antioksidanları belirlemek için kullanılabilir: radikallerle yüksek reaksiyon hızı sabiti ile karakterize edilirler ve bu nedenle güçlü antioksidanlar olarak adlandırılabilirler. Gizli dönemde bunların tamamen oksidasyonu meydana gelir. TAR (Toplam Antioksidan Reaktivite) yöntemi, kemilüminesansın söndürülmesinin derecesini ölçer Q kemilüminesans eğrisinin platosunda veya maksimumunda: formül, burada I bir antioksidan olmadan kemilüminesansın yoğunluğudur ve I1 bir antioksidan varlığında CL'nin yoğunluğudur. Bu yöntem, sistemin ağırlıklı olarak radikallerle etkileşim hızı sabitleri düşük olan zayıf antioksidanlar içermesi durumunda kullanılır - luminol sabitiyle karşılaştırıldığında çok daha düşüktür.

Antioksidanların etkisi sadece göstergelerle karakterize edilmez τ Ve Q. Çalışmalardan görülebileceği gibi [,] hemin-H 2 O 2 –luminol sisteminde ürik asit veya sitokrom sisteminde tokoferol, rutin ve quercetin gibi antioksidanların etkisi İle–kardiolipin–H 2 O 2 –luminol, CL'deki maksimum artış oranındaki bir değişiklik ile karakterize edilir ( vmaks). Kinetik matematiksel modellemenin sonuçlarının gösterdiği gibi, bu antioksidanların radikallerle etkileşiminin hız sabitlerinin değerleri luminol sabitinin değerine yakındır, bu nedenle bu tür antioksidanlara orta kuvvette antioksidanlar denilebilir.

Eğer incelenen materyal, özellikle bitkisel hammaddeler, yalnızca bir tür antioksidan içeriyorsa, bunların içeriği yukarıda sıralanan üç göstergeden biriyle karakterize edilebilir ( τ , Q veya vmaks). Ancak bitki materyalleri farklı güçlerde antioksidanların bir karışımını içerir. Bu sorunu çözmek için, bazı yazarlar [ , , , ] belirli bir ∆S süresi boyunca kemilüminesansın ışık toplamındaki değişimi kullandılar ve formülle hesaplandılar; burada ∆ S 0 ve ∆ SS- Belirli bir süre için CL ışık toplamları T sırasıyla kontrol ve test numunelerinde. Sistemdeki tüm antioksidanların oksidasyonu için yani test numunesinin CL eğrisinin kontrol numunesinin CL eğrisi seviyesine ulaşması için sürenin yeterli olması gerekir. İkincisi, araştırmacıların yalnızca parıltının ışık toplamını kaydetmeleri değil, aynı zamanda CL kinetik eğrisini de yeterince uzun bir süre boyunca kaydetmeleri gerektiğini varsayar ki bu her zaman yapılmaz.

Ölçülen tüm göstergeler cihaza ve ölçüm koşullarına bağlı olduğundan, incelenen sistemdeki maddenin antioksidan etkisi genellikle standart olarak alınan bir antioksidanın, örneğin Trolox'un etkisiyle karşılaştırılır.

Yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit sistemi birçok yazar tarafından bitki materyallerinin toplam antioksidan kapasitesini analiz etmek için kullanılmıştır. Çalışmalarda [ , ], örneklerdeki antioksidan miktarını tahmin etmek için CL'nin gizli periyodu (TRAP yöntemi) ve çalışmalarda [ , , ] CL gelişim eğrisinin altındaki alan kullanıldı. Bununla birlikte, listelenen çalışmalar OAU'yu değerlendirmek için bir veya başka bir parametrenin seçimine ilişkin net bir gerekçe sunmamaktadır.

Çalışmanın amacı, farklı türdeki antioksidanların oranının TOA'yı nasıl etkilediğini belirlemek ve kemilüminesans yöntemini bitki materyallerindeki TOA'yı daha doğru bir şekilde belirleyebilecek şekilde değiştirmekti. Bunu yapmak için kendimize birkaç görev belirledik. İlk olarak, çalışılan nesnelerin OAU'suna hangi tür antioksidanların ana katkıyı yaptığını anlamak için, çalışılan nesnelerin CL kinetiğini üç tipteki (güçlü, orta ve zayıf) standart antioksidanların kinetiği ile karşılaştırın. İkinci olarak, OAE'ye en büyük katkıyı sağlayan antioksidanın etkisiyle karşılaştırmalı olarak bu nesnelerin etkisi altında CL ışık toplamındaki azalmayı ölçerek, incelenen nesnelerin OAE'sini hesaplayın.

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Araştırmanın nesneleri, JSC Krasnogorskleksredstva (Rusya) tarafından üretilen alıç, üvez ve kuşburnunun endüstriyel örneklerinin yanı sıra yazarlar tarafından Moskova bölgesinde doğal büyüme koşulları altında toplanan ve 60-80 ° sıcaklıkta kurutulan ahududu meyveleriydi. C, basıldığında meyve suyu bırakmayı ve deformasyonu durdurana kadar.

Kemilüminesan yöntemi kullanarak antioksidan kapasiteyi analiz etmeye yönelik reaktifler şunlardı: KH2P04, 20 mM tampon çözeltisi (pH 7,4); yaban turpu köklerinden peroksidaz (aktivite 112 birim/mg, M = 44,173,9), 1 mM sulu çözelti; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazinedion, 3-aminoftalik asit hidrazit, M = 177.11), 1 mM sulu çözelti; hidrojen peroksit (H202, M = 34.01), 1 mM sulu çözelti; antioksidanların çözeltileri (askorbik asit, kersetin, tokoferol). Tüm reaktifler Sigma Aldrich (ABD) tarafından üretilmektedir.

Alıç, üvez ve kuşburnu meyvelerinin kaynatma maddeleri ve ahududu meyvelerinin infüzyonu, genel farmakope makalesi “İnfüzyonlar ve kaynatma” da belirtilen SSCB Devlet Farmakopesi yöntemlerine göre hazırlandı.

Toplam antioksidan kapasitesinin belirlenmesi, PowerGraph 3.3 yazılımı kullanılarak bir Lum-100 kemilüminometre (DISoft, Rusya) üzerine kemilüminesansın kaydedilmesiyle gerçekleştirildi. Bitki materyallerinde OAE'yi belirlemek için, 1 mM konsantrasyonda 40 ul luminol, 0,1 μM konsantrasyonda 40 ul yaban turpu peroksidazı, 10 ila 50 ul kaynatma veya infüzyon (konsantrasyona bağlı olarak) ve fosfat tamponu. Toplam numune hacmini 1 ml’ye getirecek kadar gerekli miktar cihazın küvetine yerleştirildi. Küvet cihaza yerleştirildi ve arka plan sinyali gözlemlenerek CL kaydedildi. Arka plan sinyalinin 48 saniye kaydedilmesinden sonra küvete 1 mM konsantrasyonda 100 ul H2O2 eklendi ve CL kaydına 10 dakika devam edildi. Her bitki nesnesinin farklı konsantrasyonları ile dört örnek hazırlandı. CL ayrıca her bir antioksidan için beş farklı konsantrasyonda askorbik asit, kersetin ve tokoferol çözeltileri için de kaydedildi. Daha sonra kaynatma ve infüzyon numunelerinin OAU'su kersetin olarak yeniden hesaplandı.

Luminol, yaban turpu peroksidazı ve hidrojen peroksit konsantrasyonları, tıbbi bitki materyallerinden elde edilen sulu ekstraktların antioksidan kapasitesini kabul edilebilir bir sürede (10 dakikadan fazla olmamak üzere) belirleyecek şekilde seçilmiştir. Bu süre zarfında, antioksidanlar askorbat ve flavonoid kersetin (bitki materyallerinin ana antioksidanları) için kemilüminesans eğrileri, sistemdeki antioksidanların tamamen yok edildiğini gösteren bir platoya ulaştı. Çalışılan numunelerin seyreltileri ve standart antioksidan çözeltilerinin konsantrasyonları (şekillerin açıklamalarında belirtilmiştir), tüm CL kinetik eğrileri cihazın aynı hassasiyetinde ölçülecek şekilde seçilmiştir.

Antioksidan kapasitesi alandaki değişiklikten hesaplandı (∆ S) bir antioksidan içeren bir madde eklenirken kemilüminesansın kinetik eğrisi (ışık toplamı) altında. Bu amaçla hesapladık S 0 antioksidan içermeyen bir sistem için ve alanı bundan çıkararak SS antioksidanın eklendiği sistemi karakterize eder. Değer ∆ S kemilüminometrenin hassasiyetine ve ölçüm koşullarına bağlıdır. Oran ∆ S/C V(Nerede C- küvette incelenmekte olan biyolojik materyalin konsantrasyonu, g/l ve V- küvet hacmi, l) çalışılan malzemenin 1 g'ının, yani bitkisel hammaddelerin antioksidan kapasitesini ifade eder.

Antioksidan kapasite ∆ benzer şekilde hesaplandı SA Reaksiyon karışımının aynı hacmine yerleştirilen standart bir antioksidanın (örneğin quercetin) bir çözeltisi. Oran ∆ S A /C A V(Nerede CA- küvetteki antioksidanın ağırlık konsantrasyonu, g/l) 1 g antioksidanın antioksidan kapasitesini ifade eder.

Standart antioksidanların her biri için, hesaplamaların doğrusal bir ilişki içinde olmasını ve elde edilen sonuçların tekrarlanabilir olmasını sağlamak amacıyla çeşitli konsantrasyonlardaki çözeltilerden gelen sinyaller kaydedildi. Aslında doğrusal bir bağımlılık elde edildi (∆ SA = k A C A) stokiyometrik katsayının hesaplandığı konsantrasyondan gelen sinyal k bir. Fisher kriterine göre standart antioksidanlar için elde edilen değerler k bir istatistiksel olarak 0,975 olasılıkla anlamlıdır. Daha sonra, dört bitki numunesinin her biri için dört konsantrasyondan gelen sinyal kaydedildi ve tüm numuneler için sinyalin konsantrasyona doğrusal bir bağımlılığı elde edildi (∆ S = k·C), stokiyometrik katsayının hesaplandığı k. Bitki örnekleri için elde edilen k değerleri 0,975 olasılıkla (Fisher testi) istatistiksel olarak anlamlıdır. Standart antioksidanın kütlesi (%mg) cinsinden bitki materyalinin toplam antioksidan kapasitesi aşağıdaki formül kullanılarak bulunmuştur.

Değerler p'de aritmetik ortalama ± standart sapma (M ± δ) olarak sunuldu.

ARAŞTIRMA SONUÇLARI

Sodyum askorbat varlığında kemilüminesans kinetiğinin incelenmesi (Şekil 1. Sodyum askorbatın kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi" data-note="Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 µM, yaban turpu peroksidazı - 4 nM, hidrojen peroksit) - 100 µM. Eğriler: 1 - kontrol numunesi; 2 - 0,05 µM; 3 - 0,10 µM; 4 - 0,15 µM; 5 - 0,2 µM; 6 - 0,25 µM sodyum askorbat.">Şekil 1) bu antioksidan için şunu göstermiştir: CL'nin neredeyse tamamen baskılandığı latent dönem ile karakterize edilir.Süresi sistemdeki antioksidan miktarı ile orantılıdır.Aynı zamanda ne CL eğrilerinin eğimi ne de CL'nin plato üzerindeki yoğunluğu değişmez.Bu durum açıklanmaktadır. askorbik asidin, luminol radikalleri de dahil olmak üzere sistemde oluşan tüm radikalleri yakalayan güçlü bir antioksidan olması ve tüm askorbat oksitlenene kadar CL'nin gelişmemesi gerçeğiyle.

Diğer araştırmacılar da kimyasal analiz sonuçlarının ve kemilüminesans yöntemiyle belirlenen TAU değerinin çoğu zaman örtüşmediğini göstermiştir. Çalışmada peroksidaz-luminol-hidrojen peroksit sisteminde belirlenen toplam antioksidan kapasitenin triterpen bileşiklerinin içeriği ile ilişkili olduğu görüldü. Ancak aynı yazarların, çalışmanın nesnesinin başka bir bitki olduğu çalışmalarında, OAE ile flavonoidler de dahil olmak üzere herhangi bir madde grubunun içeriği arasında bir korelasyon gözlemlemediler.

Bu tür tutarsızlıklar en az üç faktörle ilişkilidir. İlk olarak, antioksidanların aktivitesi önemlidir, yani bitki örneğinde bulunan farklı antioksidanlar için farklı olan radikallerle etkileşimlerinin hızı. Izmailov'a göre, meksidol, tokoferol ve kuersetin için karşılık gelen reaksiyonların hız sabitleri 0,04: 2: 60 ile ilişkilidir. İkinci olarak, bir kimyasal reaksiyona giren her antioksidan molekül, farklı sayıda radikali yakalayabilir. Çalışmaya göre, kersetin, ürik ve askorbik asitler reaksiyona giren antioksidan molekül başına sırasıyla 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 ve 0,5 ± 0,2 radikali yakaladı (hemin-H 2 O 2 sistemi kullanıldı -luminol). Üçüncüsü, çalışmanın sonuçları, çalışmada olduğu gibi bitki örneklerindeki peroksidaz aktivitesinin varlığından ve ayrıca çalışmada gösterildiği gibi örneklerde kalsiyumun varlığından etkilenebilir; bu, çalışmada gösterildiği gibi, peroksidaz aktivitesini artırma kapasitesine sahiptir. yaban turpu peroksidazının belirli koşullar altında aktivitesi. Bu genellikle platoda kontrol eğrilerine göre daha yüksek bir CL yoğunluğuna neden olur, ancak bunu gözlemlemedik.

İlk faktör, ışık toplamındaki bir değişiklik olarak böyle bir parametrenin kullanımını keskin bir şekilde sınırlar, çünkü kemilüminesansın ölçülmesi için gereken süre, test numunesindeki tüm antioksidanların tüketilmesi için gereken süreden daha uzun olmalıdır. Bu anın oluşumu yalnızca kemilüminesansın kinetiği ölçülerek değerlendirilebilir. Ek olarak, zayıf antioksidanların TAU'ya katkısı keskin bir şekilde hafife alınmaktadır, çünkü bunların tam oksidasyon süresi kabul edilebilir ölçüm süresinden (10-20 dakika) çok daha uzundur.

Antioksidanın stokiyometrik katsayısı daha da önemlidir. Radikal sayısı N tarafından durdurulan eşittir , burada ρ stokiyometrik katsayıdır ve ∆ M- ölçüm sırasında antioksidan konsantrasyonundaki değişiklik; bizim durumumuzda - test numunesindeki test maddesinin başlangıç ​​konsantrasyonu.

Bir antioksidanın yokluğunda ve varlığında lüminesansın ışık toplamındaki fark orantılıdır N. Yakalanan radikallerin toplam sayısı ρ ben belirli bir antioksidanın stokiyometrik katsayısıdır ve ben ben- ölçüm sırasındaki konsantrasyonu. Yakalanan radikallerin toplam sayısı, antioksidanların toplam miktarına eşit değildir, çünkü katsayılar ρ ben sadece birliğe eşit olmamakla kalmaz, aynı zamanda farklı antioksidanlar için önemli ölçüde farklılık gösterir.

Büyüklük N antioksidan içeren bir numune ile antioksidan içermeyen bir kontrol numunesi arasında belirli bir süre boyunca ölçülen ışık toplamlarındaki farkla orantılıdır: S = kn, Nerede k- aynı ölçüm koşulları altında sabit olan katsayı.

Makalede ele alınan yöntem toplam antioksidan kapasitesini belirlememizi sağlarken, kimyasal analiz ise üründeki toplam antioksidan içeriğini belirlememizi sağlar. Bu nedenle kemilüminesans yöntemi kimyasal analizlere göre daha bilgilendirici görünmektedir.

Yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden (bileşen konsantrasyonları - sırasıyla 4 nM, 100 µM ve 40 µM; 20 mM fosfat) oluşan bir sistemde kemilüminesansın kinetiğini kaydederek bitkisel hammaddelerin toplam antioksidan kapasitesini değerlendirmek için seçtiğimiz koşullar. tampon, pH 7.4), güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve orta kuvvette antioksidanların (kuersetin) 10 dakika içinde oksidasyonunu sağlamıştır. Bu ölçüm süresi uygundur ve gerekli ölçüm kalitesini sağlar.

Kemilüminesans kinetiğinin analizi, incelenen nesnelerde (üvez meyveleri, kuşburnu, alıç ve ahududu meyvelerinin infüzyonu) ana antioksidanların, flavonoidler dahil orta kuvvette antioksidanlar ve zayıf kuvvette (tokoferol vb.) olduğunu gösterdi. Kemilüminesans ışık toplamındaki azalmaya bağlı olarak çalışılan nesnelerin toplam antioksidan kapasitesi hesaplandı. Elde edilen TAU değerlerinin kimyasal analiz sonuçlarıyla karşılaştırılması, aynı miktarda farklı oranlarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerinden etkili bir şekilde koruma yetenekleri açısından farklılık gösterebileceğini gösterdi. Açıklanan teknik, çeşitli antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut vericidir. Aynı zamanda basitlik ve düşük araştırma maliyeti ile de karakterize edilir. Kemilüminesans kinetiğinin ölçülmesinin reaksiyonların matematiksel modellemesi ile kombinasyonu, yalnızca TAU'yu belirleme sürecini otomatikleştirmekle kalmayacak, aynı zamanda bireysel antioksidan gruplarının göstergeye katkısını da belirleyecektir.

Anahtar Kelimeler

serbest radikal/antioksidan/ antioksidan aktivite / toplam antioksidan kapasite / kemilüminesans/ luminol / serbest radikal / antioksidan / antioksidan aktivite / toplam antioksidan kapasitesi / kemilüminesans / luminol

dipnot kimya bilimleri üzerine bilimsel makale, bilimsel çalışmanın yazarı - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Tıbbi bitki materyalleri insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Bitki nesnelerindeki antioksidan içeriğini belirleme yöntemleri arasında kemilüminesans analizi yöntemi yaygındır. Bu çalışmada tahmin etmek için kullanılmıştır. toplam antioksidan kapasite(OAE) üvez meyveleri, kuşburnu ve alıç kaynatma ve ahududu meyvelerinin infüzyonu. Deneyde kinetikler kaydedildi kemilüminesans yaban turpu peroksidazı, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemde. Numunedeki sistem bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacmi, güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve orta derecede antioksidanların (kersetin) ölçüm süresi boyunca (10 dakika) tamamen oksitleneceği şekilde seçildi. Işık toplamındaki değişikliklere dayalı olarak OAE'yi hesaplamak için bir yöntem önerilmiş ve gerekçelendirilmiştir kemilüminesans bitki örneklerinin varlığında. Kinetik analiz kemilüminesans incelenen nesnelerde flavonoidler dahil orta kuvvette antioksidanların ve zayıf antioksidanların (tokoferol vb.) baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan OAE değerlerinin ve bunların kimyasal analiz verilerinin karşılaştırılması, türlerine göre farklı oranlarda aynı miktarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerinden koruma yetenekleri açısından farklılık gösterebileceğini göstermiştir. . Açıklanan teknik, çeşitli türlerde antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut vericidir.

İlgili konular kimya bilimlerinde bilimsel çalışmalar, bilimsel çalışmanın yazarı - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

• 2016 / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.

• 2,2"-azo-bis(2-amidinopropan) kullanılarak aktive edilmiş kemilüminesans yoluyla antioksidanların belirlenmesi

  2012 / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

• Sitokrom c tarafından katalize edilen peroksidaz reaksiyonlarında dihidroquercetin ve rutinin antioksidan etkisi

  2008 / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

• Fenton reaksiyonunun neden olduğu kemilüminesans ile biyolojik substratların oksidatif ve antioksidan kapasitesinin değerlendirilmesi

  2016 / Piskarev Igor Mihayloviç, I.P. Ivanova

• Mikroperoksidaz-luminol sistemi kullanılarak serum lipoproteinlerindeki lipohidroperoksit içeriğinin belirlenmesi

  2011 / Teselkin Yuri Olegovich, Babenkova Irina Vladimirovna

• Antioksidan Araştırma Yöntemleri

  2004 / Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V.

• Tuva etno-tıpında kullanılan bitkilerin antioksidan aktivitesi

  2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitsky O.B.

• Fosprenil'in antioksidan özelliklerinin çeşitli biyolojik test sistemlerinde incelenmesi

  2017 / A. V. Sanin, A. N. Narovlyansky, A. V. Pronin, T. N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova

• Çeşitli dozlarda poliklorlu bifenillerin tam kanın spontan ve immünoglobulin kaynaklı luminole bağlı kemilüminesans durumu üzerindeki etkisi

  2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samokhodova O.V.

• Esansiyel arteriyel hipertansiyonu olan çocuklarda antioksidan korumanın lipid peroksidasyon sisteminin spektrofotometri ve kemilüminesans yöntemleri kullanılarak değerlendirilmesi

  2014 / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Tıbbi bitki materyalinde toplam antioksidan kapasitenin kemilüminesans tayini

Tıbbi bitki materyali insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Kemilüminesans analizi, bitki materyallerindeki antioksidan içeriğini belirlemenin yaygın yöntemlerinden biridir. Çalışmamızda üvez, gül ve alıç meyve kaynatmalarının yanı sıra ahududu meyvesi infüzyonunun toplam antioksidan kapasitesini (TAC) belirlemek için kemilüminesans analizi kullanıldı. Deneyler, yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemin kemilüminesansının kinetiğini belirledi. Sistemin bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacimleri, güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve ortalama kuvvetteki antioksidanların (kuersetin) ölçüm sırasında (10 dakika) tamamen oksitleneceği şekilde seçilmiştir. Bitki örneklerinin varlığında kemilüminesans ışık toplamındaki değişikliklere dayanan TAC hesaplaması için bir yöntem önerilmiş ve kanıtlanmıştır. Kemilüminesans kinetiğinin analizi, flavonoidler ve zayıf antioksidanlar (tokoferol ve diğerleri) dahil olmak üzere, incelenen nesnelerde ortalama kuvvetteki antioksidanların baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan TAC değerleri ile kimyasal analiz verilerinin karşılaştırılması, aynı miktarda antioksidan içeren ve farklı oranlarda antioksidan içeren ürünlerin türlerine göre vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerine karşı koruma özelliklerinin farklılık gösterebileceğini gösterdi. . Açıklanan teknik, farklı türde antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut verici bir tekniktir.

Bilimsel çalışmanın metni “Tıbbi bitki materyallerinde toplam antioksidan kapasitenin belirlenmesi için kemilüminesans yöntemi” konulu

Tıbbi bitki materyallerinde toplam antioksidan kapasitenin belirlenmesi için kemilüminesans yöntemi

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1Temel Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyofizik Bölümü, M.V. Lomonosov Moskova Devlet Üniversitesi, Moskova

2 Eczacılık Fakültesi Farmakognozi Anabilim Dalı,

I.M. Sechenov'un adını taşıyan ilk Moskova Devlet Tıp Üniversitesi, Moskova

Tıbbi bitki materyalleri insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Bitki nesnelerindeki antioksidan içeriğini belirleme yöntemleri arasında kemilüminesans analizi yöntemi yaygındır. Bu çalışmada üvez, kuşburnu ve alıç meyvelerinin kaynatmalarının ve ahududu meyvelerinin infüzyonunun toplam antioksidan kapasitesini (TAC) değerlendirmek için kullanılmıştır. Deneyde, yaban turpu peroksidazı, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemde kemilüminesansın kinetiği kaydedildi. Numunedeki sistem bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacmi, güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve orta derecede antioksidanların (kersetin) ölçüm süresi boyunca (10 dakika) tamamen oksitleneceği şekilde seçildi. Bitki örneklerinin varlığında kemilüminesansın ışık toplamındaki değişikliklere dayalı olarak OAE'yi hesaplamak için bir yöntem önerilmiş ve gerekçelendirilmiştir. Kemilüminesans kinetiğinin analizi, flavonoidler de dahil olmak üzere orta kuvvette antioksidanların ve zayıf antioksidanların (tokoferol vb.) incelenen nesnelerde baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan OAE değerlerinin ve bunların kimyasal analiz verilerinin karşılaştırılması, türlerine göre farklı oranlarda aynı miktarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerinden koruma yetenekleri açısından farklılık gösterebileceğini göstermiştir. . Açıklanan teknik, çeşitli türlerde antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut vericidir.

Anahtar kelimeler: serbest radikal, antioksidan, antioksidan aktivite, toplam antioksidan kapasite, kemilüminesans, luminol

Finansman: Çalışma, 14-15-00375 numaralı hibe ile Rusya Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir.

Ör3 Yazışma için: Georgy Konstantinovich Vladimirov

119192, Moskova, Lomonosovsky pr-t, 31, bina 5; [e-posta korumalı]

Makalenin alındığı tarih: 03/10/2016 Makalenin yayına kabul edildiği tarih: 18/03/2016

Tıbbi bitki materyalinde toplam antioksidan kapasitenin kemilüminesans tayini

1 Temel Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyofizik Anabilim Dalı, Lomonosov Moskova Devlet Üniversitesi, Moskova, Rusya

2 Eczacılık Fakültesi Farmakognozi Anabilim Dalı,

Birinci Sechenov Moskova Devlet Tıp Üniversitesi, Moskova, Rusya

Tıbbi bitki materyali insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Kemilüminesans analizi, bitki materyallerindeki antioksidan içeriğini belirlemenin yaygın yöntemlerinden biridir. Çalışmamızda üvez, gül ve alıç meyve kaynatmalarının yanı sıra ahududu meyvesi infüzyonunun toplam antioksidan kapasitesini (TAC) belirlemek için kemilüminesans analizi kullanıldı. Deneyler, yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemin kemilüminesansının kinetiğini belirledi. Sistemin bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacimleri, güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve ortalama kuvvetteki antioksidanların (kuersetin) ölçüm sırasında (10 dakika) tamamen oksitleneceği şekilde seçilmiştir. Bitki örneklerinin varlığında kemilüminesans ışık toplamındaki değişikliklere dayanan TAC hesaplaması için bir yöntem önerilmiş ve kanıtlanmıştır. Kemilüminesans kinetiğinin analizi, flavonoidler ve zayıf antioksidanlar (tokoferol ve diğerleri) dahil olmak üzere, incelenen nesnelerde ortalama kuvvetteki antioksidanların baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan TAC değerleri ile kimyasal analiz verilerinin karşılaştırılması, aynı miktarda antioksidan içeren ve farklı oranlarda antioksidan içeren ürünlerin türlerine göre vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerine karşı koruma özelliklerinin farklılık gösterebileceğini gösterdi. . Açıklanan teknik, farklı türde antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut verici bir tekniktir.

Anahtar Kelimeler: serbest radikal, antioksidan, antioksidan aktivite, toplam antioksidan kapasite, kemilüminesans, luminol

Finansman: Bu çalışma Rusya Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir, hibe no. 14-15-00375.

Teşekkür: Yazarlar, deneyin yürütülmesindeki yardımlarından dolayı Lomonosov Moskova Devlet Üniversitesi'nden Andrey Alekseev'e teşekkür ederler. Yazışma ele alınmalıdır: Georgiy Vladimirov

Lomonosovskiy prospekt, d. 31, k. 5, Moskova, Rusya, 119192; senin [e-posta korumalı] Geliş Tarihi: 03/10/2016 Kabul Tarihi: 18/03/2016

Vücutta oluşan serbest radikaller hücre zarlarının yapısını bozar ve bu da çeşitli patolojik durumların gelişmesine yol açar. Radikallerin yıkıcı oksidatif etkileri, düşük molekül ağırlıklı bileşiklerin (radikal önleyicilerin (tuzaklar)) önemli bir rol oynadığı vücudun antioksidan savunma sistemi tarafından önlenir. Antioksidanların kaynaklarından biri, şifalı bitki materyallerinin yanı sıra bunlara dayalı ilaçlardır; antioksidan potansiyelinin araştırılması, bunların önleyici ve tedavi edici etkilerini artırmaya yardımcı olur.

Antioksidanları belirlemenin ana yöntemleri çalışmalarda tartışılmaktadır, ancak antioksidanların kimyasal bileşikler olarak tanımlanması, incelenen nesnenin koruyucu özelliklerinin tam bir resmini vermez: bunlar yalnızca belirli bir antioksidanın miktarıyla değil, ama aynı zamanda her birinin aktivitesiyle de. Antioksidan aktivite veya antioksidan aktivite, AOA, bir antioksidanın serbest radikalle (kInH) reaksiyonunun hız sabitidir. Kemilüminesans (CL) yöntemi, bir numunedeki antioksidanları bağlayan toplam radikal miktarını (toplam antioksidan kapasitesi, TCA) ve CL kinetiğinin matematiksel modelleme yöntemini kullanırken ayrıca antioksidanların oluşum ve reaksiyon hızını belirlemeyi mümkün kılar. antioksidanlar içeren radikaller, yani AOA.

Toplam antioksidan kapasiteyi belirlemek için kemilüminesans yönteminin en yaygın modifikasyonu, kemilüminesans aktivatörü olarak luminolün kullanımına dayanmaktadır. Luminol, hidrojen peroksit ve kendiliğinden ayrışmanın (termoliz) bir sonucu olarak radikal oluşturabilen bir bileşiğin, örneğin 2,2"-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorürün (ABAP) ilave edildiği bir numune:

Moleküler oksijen varlığında alkil radikali R^, peroksil radikali ROO^'yu oluşturur:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv LH'den, ara maddelerin (luminol hidroperoksit ve luminol endoperoksit) oluşumu yoluyla, luminol oksidasyonunun son ürünü olan aminoftalik asidin bir molekülü, bir foton yayan, elektronik olarak uyarılmış bir durumda oluşur. ve bunun sonucunda kemilüminesans gözlenir. CL yoğunluğu foton üretim hızıyla orantılıdır ve sistemdeki sabit LH konsantrasyonuyla da orantılıdır. Antioksidanlar radikallerle etkileşime girerek açıklanan dönüşüm zincirini kesintiye uğratır ve foton oluşumunu engeller.

Kemilüminesans yöntemi kullanılarak bir numunenin antioksidan kapasitesi analiz edilirken, termolize duyarlı bileşikler olası tek radikal kaynağı değildir. Alternatifler yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit, hemin-hidrojen peroksit, sitokrom c-kardiolipin-hidrojen peroksit vb.'dir. Luminol'ün peroksidazlar tarafından oksidasyonuna yönelik reaksiyon şeması Cormier ve ark.'nın çalışmasında tartışılmıştır. .

Bu sistemler için CL kinetik eğrileri reaksiyonun iki aşamasını yansıtır: CL yoğunluğunun artması aşaması ve bir plato aşaması veya lüminesansta kademeli düşüş aşaması.

CL yoğunluğu ya sabittir ya da yavaş yavaş azalır. Çalışma, eğrilerin bu özelliğini dikkate alan toplam antioksidan kapasiteyi ölçmeye yönelik iki yaklaşımı açıklamaktadır. TRAP (Toplam Reaktif Antioksidan Potansiyeli) yöntemi CL t'nin latent periyodunun ölçülmesine dayanır ve Trolox veya askorbik asit gibi antioksidanları belirlemek için kullanılabilir: radikallerle yüksek reaksiyon hızı sabiti ile karakterize edilirler ve bu nedenle güçlü antioksidanlar denir. Gizli dönemde bunların tamamen oksidasyonu meydana gelir. TAR (Toplam Antioksidan Reaktivite) yöntemi, kemilüminesans eğrisinin platosunda veya maksimumunda kemilüminesans söndürme q derecesini ölçer:

burada I bir antioksidan olmadan kemilüminesans yoğunluğudur ve 11 bir antioksidan varlığında CL yoğunluğudur. Bu yöntem, sistemin ağırlıklı olarak radikallerle etkileşim hızı sabitleri düşük olan zayıf antioksidanlar içermesi durumunda kullanılır - luminol sabitiyle karşılaştırıldığında çok daha düşüktür.

Antioksidanların etkisi sadece t ve c göstergeleri ile karakterize edilmez. Çalışmalardan görülebileceği gibi hemin-H2O2-luminol sisteminde ürik asit veya sitokrom c-kardiyolipin-H2O2-luminol sisteminde tokoferol, rutin ve quercetin gibi antioksidanların etkisi maksimum orandaki değişiklik ile karakterize edilmektedir. CL'deki (utx) artış. Kinetik matematiksel modellemenin sonuçlarının gösterdiği gibi, bu antioksidanların radikallerle etkileşiminin hız sabitlerinin değerleri luminol sabitinin değerine yakındır, bu nedenle bu tür antioksidanlara orta kuvvette antioksidanlar denilebilir.

Eğer incelenen materyal, özellikle de bitkisel hammaddeler yalnızca bir tür antioksidan içeriyorsa, bu durumda bunların içeriği yukarıda sıralanan üç göstergeden biriyle (t, c veya V) karakterize edilebilir. Ancak bitki materyalleri farklı güçlerde antioksidanların bir karışımını içerir. Bu sorunu çözmek için bazı yazarlar, formülle hesaplanan, belirli bir DE süresi boyunca kemilüminesansın ışık toplamındaki değişimi kullandılar.

DE = DE0 - DE,

DE0 ve DE5 belirli bir süre için CL ışık toplamları nerede? sırasıyla kontrol ve test numunelerinde. Sistemdeki tüm antioksidanların oksidasyonu için yani test numunesinin CL eğrisinin kontrol numunesinin CL eğrisi seviyesine ulaşması için sürenin yeterli olması gerekir. İkincisi, araştırmacıların yalnızca parıltının ışık toplamını kaydetmeleri değil, aynı zamanda CL kinetik eğrisini de yeterince uzun bir süre boyunca kaydetmeleri gerektiğini varsayar ki bu her zaman yapılmaz.

Ölçülen tüm parametreler cihaza ve ölçüm koşullarına bağlı olduğundan, incelenen sistemdeki maddenin antioksidan etkisi genellikle standart bir antioksidanın, örneğin Trolox'un etkisiyle karşılaştırılır.

Yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit sistemi birçok yazar tarafından bitki materyallerinin toplam antioksidan kapasitesini analiz etmek için kullanılmıştır. Çalışmalarda örneklerdeki antioksidan miktarını tahmin etmek için CL'nin latent periyodu (TRAP yöntemi) kullanılmış ve CL gelişim eğrisi altında kalan alan kullanılmıştır. Ancak listelenen çalışmalar net bir gerekçe sunmuyor

OAU'yu değerlendirmek için bir veya başka bir parametrenin seçimi.

Çalışmanın amacı, farklı türdeki antioksidanların oranının TOA'yı nasıl etkilediğini belirlemek ve kemilüminesans yöntemini bitki materyallerindeki TOA'yı daha doğru bir şekilde belirleyebilecek şekilde değiştirmekti. Bunu yapmak için kendimize birkaç görev belirledik. İlk olarak, çalışılan nesnelerin OAU'suna hangi tür antioksidanların ana katkıyı yaptığını anlamak için, çalışılan nesnelerin CL kinetiğini üç tipteki (güçlü, orta ve zayıf) standart antioksidanların kinetiği ile karşılaştırın. İkinci olarak, OAE'ye en büyük katkıyı sağlayan antioksidanın etkisiyle karşılaştırmalı olarak bu nesnelerin etkisi altında CL ışık toplamındaki azalmayı ölçerek, incelenen nesnelerin OAE'sini hesaplayın.

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Araştırmanın nesneleri, JSC Krasnogorskleksredstva (Rusya) tarafından üretilen alıç, üvez ve kuşburnunun endüstriyel örneklerinin yanı sıra yazarlar tarafından Moskova bölgesinde doğal büyüme koşulları altında toplanan ve 60-80 ° sıcaklıkta kurutulan ahududu meyveleriydi. C, basıldığında meyve suyu bırakmayı ve deformasyonu durdurana kadar.

Kemilüminesan yöntemi kullanarak antioksidan kapasiteyi analiz etmek için kullanılan reaktifler şunlardı: KH2P04, 20 mM tampon çözeltisi (pH 7,4); yaban turpu köklerinden peroksidaz (aktivite 112 birim/mg, M = 44,173,9), 1 mM sulu çözelti; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazinedion, 3-aminoftalik asit hidrazit, M = 177.11), 1 mM sulu çözelti; hidrojen peroksit (H2O2, M = 34.01), 1 mM sulu çözelti; antioksidanların çözeltileri (askorbik asit, kersetin, tokoferol). Tüm reaktifler Sigma Aldrich (ABD) tarafından üretilmektedir.

Alıç, üvez ve kuşburnu meyvelerinin kaynatma maddeleri ve ahududu meyvelerinin infüzyonu, genel farmakope makalesi “İnfüzyonlar ve kaynatma” da belirtilen SSCB Devlet Farmakopesi yöntemlerine göre hazırlandı.

Toplam antioksidan kapasitesinin belirlenmesi, PowerGraph 3.3 yazılımı kullanılarak bir Lum-100 kemilüminometre (DISoft, Rusya) üzerine kemilüminesansın kaydedilmesiyle gerçekleştirildi. Bitki materyallerinde OAE'yi belirlemek için, 1 mM konsantrasyonda 40 ul luminol, 0,1 μM konsantrasyonda 40 ul yaban turpu peroksidazı, 10 ila 50 ul kaynatma veya infüzyon (konsantrasyona bağlı olarak) ve fosfat tamponu. Toplam numune hacmini 1 ml’ye getirecek kadar gerekli miktar cihazın küvetine yerleştirildi. Küvet cihaza yerleştirildi ve arka plan sinyali gözlemlenerek CL kaydedildi. Arka plan sinyalinin 48 saniye kaydedilmesinden sonra küvete 1 mM konsantrasyonda 100 ul H2O2 eklendi ve CL kaydına 10 dakika devam edildi. Her bitki nesnesinin farklı konsantrasyonları ile dört örnek hazırlandı. CL ayrıca antioksidanların her biri için beş farklı konsantrasyonda askorbik asit, kersetin ve tokoferol çözeltileri için de kaydedildi. Daha sonra kaynatma ve infüzyon numunelerinin OAU'su kersetin olarak yeniden hesaplandı.

Luminol, yaban turpu peroksidazı ve hidrojen peroksit konsantrasyonları, tıbbi bitki materyallerinden elde edilen sulu ekstraktların antioksidan kapasitesini kabul edilebilir bir sürede (10 dakikadan fazla olmamak üzere) belirleyecek şekilde seçilmiştir. Bu süre zarfında, antioksidanlar askorbat ve flavonoid kersetin (bitki materyallerinin ana antioksidanları) için kemilüminesans eğrileri ortaya çıkar.

sistemdeki antioksidanların tamamen yok edildiğini gösteren bir platoya ulaştı. Çalışılan örneklerin seyreltileri ve standart antioksidan çözeltilerinin konsantrasyonları (şekillerin başlıklarında belirtilmiştir), tüm CL kinetik eğrileri cihazın aynı hassasiyetinde ölçülecek şekilde seçilmiştir.

Antioksidan kapasitesi, bir antioksidan içeren bir maddenin eklenmesi üzerine kemilüminesansın kinetik eğrisi (ışık toplamı) altındaki alandaki (AS) değişiklikten hesaplandı. Bunu yapmak için antioksidan içermeyen bir sistem için S0'ı hesapladık ve bundan antioksidanın eklendiği sistemi karakterize eden SS alanını çıkardık. AS değeri kemilüminometrenin hassasiyetine ve ölçüm koşullarına bağlıdır. AS/C ■ V oranı (burada C, küvette çalışılan biyolojik materyalin konsantrasyonu, g/l ve V, küvetin hacmi, l) çalışılan materyalin 1 g'ının antioksidan kapasitesini ifade eder, yani bitki hammaddeleri.

Benzer şekilde, reaksiyon karışımının aynı hacmine yerleştirilen standart bir antioksidan örneğin kuersetin çözeltisinin antioksidan kapasitesi ASa'yı hesapladık. AS/CÄ ■ V oranı (burada CA, küvetteki antioksidanın ağırlık konsantrasyonudur, g/l) 1 g antioksidanın antioksidan kapasitesini ifade eder.

Standart antioksidanların her biri için, hesaplamaların doğrusal bir ilişki içinde olmasını ve elde edilen sonuçların tekrarlanabilir olmasını sağlamak amacıyla çeşitli konsantrasyonlardaki çözeltilerden gelen sinyaller kaydedildi. Aslında, sinyalin konsantrasyona doğrusal bir bağımlılığı (ASa = kA ■ CA) elde edildi ve buradan stokiyometrik katsayı kA hesaplandı. Fisher kriterine göre standart antioksidanlar için elde edilen kA değerleri 0,975 olasılıkla istatistiksel olarak anlamlıdır. Daha sonra, dört bitki numunesinin her biri için dört konsantrasyondan gelen sinyal kaydedildi ve tüm numuneler için sinyalin konsantrasyona doğrusal bir bağımlılığı elde edildi (AS = k ■ C), bundan stokiyometrik katsayı k hesaplandı. Bitki örnekleri için elde edilen k değerleri 0,975 olasılıkla (Fisher testi) istatistiksel olarak anlamlıdır. Standart antioksidanın kütlesi (%mg) cinsinden bitki materyalinin toplam antioksidan kapasitesi aşağıdaki formül kullanılarak bulunmuştur.

OAE = k ■ 105. k

Değerler p'de aritmetik ortalama ± standart sapma (M ± 5) olarak sunuldu.<0,05.

ARAŞTIRMA SONUÇLARI

Sodyum askorbat varlığında kemilüminesansın kinetiği üzerine yapılan bir çalışma (Şekil 1), bu antioksidanın CL'nin neredeyse tamamen baskılandığı gizli bir dönemle karakterize edildiğini gösterdi. Süresi sistemdeki antioksidan miktarı ile orantılıdır. Bu durumda ne CL eğrilerinin eğimi ne de platodaki CL yoğunluğu değişmez. Bu, askorbik asidin, luminol radikalleri de dahil olmak üzere sistemde oluşan tüm radikalleri yakalayan güçlü bir antioksidan olması ve tüm askorbat oksitlenene kadar CL'nin gelişmemesiyle açıklanmaktadır.

Tokoferolün etkisi (Şekil 2), zayıf antioksidanlar için tipik olan platodaki CL yoğunluğunun azalmasıyla ortaya çıktı, ancak tokoferol en antioksidanlardan biri olarak kabul ediliyor.

güçlü antioksidanlar. Belki de bu tutarsızlık, deneyimizde serbest radikallerin sulu bir çözelti içinde olması, tokoferolün etkisinin ise genellikle polar olmayan ortamda çalışılmasından kaynaklanmaktadır. Radikallerin kaynağının sitokrom c ile kardiyolipin kompleksi olduğu ve luminol ile reaksiyonun bu kompleks içerisinde gerçekleştiği bir çalışmada tokoferolün orta kuvvette bir antioksidan özelliği gösterdiği görülmüştür.

Çeşitli quercetin konsantrasyonlarının sistemimiz üzerindeki etkisini inceledikten (Şekil 3) ve bunun için kinetik eğrileri sodyum askorbat ve tokoferol ile karşılaştırdıktan sonra, quercetin'in ana etkisinin eğimindeki bir değişiklikle ortaya çıktığı not edilebilir. eğriler, yani orta kuvvette antioksidanlar için tipik olan CL'nin gelişme hızı.

İncelenen tüm kaynatmaların CL eğrileri (Şekil 4), sonunda CL yoğunluğunda hafif bir azalma ile kersetin eğrilerine benzemektedir;

Zaman, dk

Pirinç. 1. Sodyum askorbatın kemilüminesans kinetiğine etkisi

Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 µM, yaban turpu peroksidazı - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 µM. Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,05 uM; 3 - 0,10 uM; 4 - 0,15 uM; 5 - 0,2 uM; 6 - 0,25 uM sodyum askorbat.

plato. Çalışmada gösterildiği gibi, bu davranış, bizim durumumuzda polifenoller - flavonoidler ve tanenler içeren orta kuvvetteki antioksidanlar için tipiktir. Ahududu meyvelerinin infüzyonu için (Şekil 4, D), bu durumda tokoferol gibi zayıf antioksidanlar için tipik olan plato seviyesinde kemilüminesansta gözle görülür bir azalma vardır. Kuersetin ve tokoferol bakımından ahududu infüzyonu 4,7 ± 0,9 µmol/g kersetin ve 11,9 ± 0,8 µmol/g tokoferol içerir.

Bitki materyallerinden incelenen dört sulu ekstraktın farklı konsantrasyonları için elde edilen kemilüminesans eğrileri karşılaştırıldığında, orta ve zayıf antioksidanların numunelerin toplam antioksidan kapasitesine katkısının aşağıdaki seride azaldığı gösterilmiştir: ahududu meyvesi infüzyonu (Şekil 4). , D), kuşburnu kaynatma (Şekil 4, B), üvez meyvelerinin kaynatma (Şekil 4, A), alıç meyvelerinin kaynatma (Şekil 4, B). İncelenen maddenin küvetteki C konsantrasyonuna dayalı AS değerleri ve quercetin cinsinden toplam antioksidan kapasite değerleri tabloda gösterilmektedir.

SONUÇLARIN TARTIŞILMASI

Deneyler sırasında elde edilen veriler ve incelenen nesnelerin temel alınarak hesaplanan OAE değerleri, kimyasal analiz yöntemleri kullanılarak belirlenen ana antioksidanların içeriği ile karşılaştırıldı. Farklı nesnelerdeki toplam antioksidan miktarı ile TAU arasındaki pozitif korelasyon yadsınamaz olmasına rağmen, bu göstergeler arasında hala gözle görülür farklılıklar vardır. Örneğin, flavonoidlerin, tanenlerin ve askorbik asit içeriğinin toplamını alırsak, alıç meyvelerinin kaynatılması (tablo) hariç, incelenen tüm nesneler için hesaplanan TAU'dan daha büyük olduğu ortaya çıkar.

Diğer araştırmacılar da kimyasal analiz sonuçlarının ve kemilüminesans yöntemiyle belirlenen TAU değerinin çoğu zaman örtüşmediğini göstermiştir. Operasyon sırasında belirlenen toplam antioksidan kapasitesi

46 Süre, dk

Ben" "h chi----.

Pirinç. 2. Tokoferolün kemilüminesans kinetiğine etkisi

Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 µM, yaban turpu peroksidazı - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 µM. Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,01 uM; 3 - 0,025 uM; 4 - 0,06 uM; 5 - 0,1 uM; 6 - 0,2 uM tokoferol.

46 Süre, dk

Pirinç. 3. Kuersetinin kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 µM, yaban turpu peroksidazı - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 µM. Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,02 uM; 3 - 0,03 uM; 4 - 0,04 uM; 5 - 0,05 uM; 6 - 0,06 uM kuersetin.

Zaman, dk

46 Süre, dk

46 Süre, dk

120 I 100 80\60 40 20

46 Süre, dk

Pirinç. 4. Üvez meyveleri (A), alıç (B), kuşburnu (C) ve ahududu meyvelerinin (D) infüzyonunun kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 µM, yaban turpu peroksidaz - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 uM. (A) Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l üvez meyvelerinin kaynatılması. (B) Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l alıç meyvelerinin kaynatılması. (B) Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l kuşburnu kaynatma. (D) Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g/l ahududu meyvesi infüzyonu.

peroksidaz-luminol-hidrojen peroksit sisteminde triterpen bileşiklerinin içeriği ile ilişkilidir. Ancak aynı yazarların, çalışmanın nesnesinin başka bir bitki olduğu çalışmalarında, OAE ile flavonoidler de dahil olmak üzere herhangi bir madde grubunun içeriği arasında bir korelasyon gözlemlemediler.

Bu tür tutarsızlıklar en az üç faktörle ilişkilidir. İlk olarak, antioksidanların aktivitesi önemlidir, yani bitki örneğinde bulunan farklı antioksidanlar için farklı olan radikallerle etkileşimlerinin hızı. Izmailov'a göre, meksidol, tokoferol ve kuersetin için karşılık gelen reaksiyonların hız sabitleri 0,04: 2: 60 ile ilişkilidir. İkinci olarak, bir kimyasal reaksiyona giren her antioksidan molekül, farklı sayıda radikali yakalayabilir. Çalışmaya göre kersetin, ürik ve askorbik asitler reaksiyona giren antioksidan molekül başına sırasıyla 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 ve 0,5 ± 0,2 radikali yakaladı (hemin-H2O2-luminol sistemi kullanıldı). Üçüncüsü, çalışmanın sonuçları, çalışmada olduğu gibi bitki örneklerindeki peroksidaz aktivitesinin varlığından ve ayrıca çalışmada gösterildiği gibi örneklerde kalsiyumun varlığından etkilenebilir; bu, çalışmada gösterildiği gibi, peroksidaz aktivitesini artırma kapasitesine sahiptir. yaban turpu peroksidazının belirli koşullar altında aktivitesi. Bu genellikle daha fazlasına yol açar

platoda kontrol eğrilerine göre daha yüksek CL yoğunluğu, ancak bunu gözlemlemedik.

İlk faktör, ışık toplamındaki bir değişiklik olarak böyle bir parametrenin kullanımını keskin bir şekilde sınırlar, çünkü kemilüminesansın ölçülmesi için gereken süre, test numunesindeki tüm antioksidanların tüketilmesi için gereken süreden daha uzun olmalıdır. Bu anın oluşumu yalnızca kemilüminesansın kinetiği ölçülerek değerlendirilebilir. Ek olarak, zayıf antioksidanların OAU'ya katkısı keskin bir şekilde hafife alınmaktadır, çünkü bunların tam oksidasyon süresi kabul edilebilir ölçüm süresinden (10-20 dakika) çok daha uzundur.

Antioksidanın stokiyometrik katsayısı daha da önemlidir. Onun tarafından yakalanan n radikallerinin sayısı eşittir

burada p stokiyometrik katsayıdır ve Am, ölçüm süresi boyunca antioksidan konsantrasyonundaki değişikliktir; bizim durumumuzda, test numunesindeki test maddesinin başlangıç ​​konsantrasyonu.

Antioksidan yokluğunda ve varlığında lüminesansın ışık toplamındaki fark n ile orantılıdır. Yakalanan radikallerin toplam sayısı n = Y.p'ye eşittir. M,

belirli bir antioksidanın stokiyometrik katsayısı nerede ve m, ölçüm sırasındaki konsantrasyonudur

Çalışmanın amacı Flavonoidler, mg%* Tanenler, mg%* Askorbik asit, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. birimler TAU, mg% kuersetin

Üvez meyvesi kaynatma 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Kuşburnu kaynatma 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Alıç meyvesi kaynatma 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Kurutulmuş ahududu meyvelerinin infüzyonu 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Not: * - literatür verileri, . AS - numune için ışık toplamındaki değişiklik, rel. birimler, C - küvetteki numune konsantrasyonu, g/l. Hesaplanan değerler p'de güvenilirdir<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

Rhenia. Yakalanan radikallerin toplam sayısı kesinlikle antioksidanların toplam miktarına eşit değildir, çünkü pt katsayıları sadece birliğe eşit değildir, aynı zamanda farklı antioksidanlar için önemli ölçüde farklılık gösterir.

N'nin değeri, antioksidan içeren bir numune ile antioksidan içermeyen bir kontrol numunesi arasında belirli bir süre boyunca ölçülen ışık toplamlarındaki farkla orantılıdır:

burada k, aynı ölçüm koşulları altında sabit olan bir katsayıdır.

Makalede ele alınan yöntem toplam antioksidan kapasitesini belirlememizi sağlarken, kimyasal analiz ise üründeki toplam antioksidan içeriğini belirlememizi sağlar. Bu nedenle kemilüminesans yöntemi kimyasal analizlere göre daha bilgilendirici görünmektedir.

Yaban turpu peroksidazı, hidrojen peroksit ve luminolden (bileşen konsantrasyonları sırasıyla - 4 nM, 100 µM ve 40 µM; 20 mM fosfat) oluşan bir sistemde kemilüminesansın kinetiğini kaydederek bitki hammaddelerinin toplam antioksidan kapasitesini değerlendirme koşullarını seçtik. tampon, pH 7,4),

güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve orta kuvvette antioksidanların (kuersetin) 10 dakikada oksidasyonunu sağlamıştır. Bu ölçüm süresi uygundur ve gerekli ölçüm kalitesini sağlar.

Kemilüminesans kinetiğinin analizi, incelenen nesnelerde (üvez meyveleri, kuşburnu, alıç ve ahududu meyvelerinin infüzyonu) ana antioksidanların, flavonoidler dahil orta kuvvette antioksidanlar ve zayıf kuvvette (tokoferol vb.) olduğunu gösterdi. Kemilüminesans ışık toplamındaki azalmaya bağlı olarak çalışılan nesnelerin toplam antioksidan kapasitesi hesaplandı. Elde edilen TAU değerlerinin kimyasal analiz sonuçlarıyla karşılaştırılması, aynı miktarda farklı oranlarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerinden etkili bir şekilde koruma yetenekleri açısından farklılık gösterebileceğini gösterdi. Açıklanan teknik, çeşitli antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut vericidir. Aynı zamanda basitlik ve düşük araştırma maliyeti ile de karakterize edilir. Kemilüminesans kinetiğinin ölçülmesinin reaksiyonların matematiksel modellemesi ile kombinasyonu, yalnızca TAU'yu belirleme sürecini otomatikleştirmekle kalmayacak, aynı zamanda bireysel antioksidan gruplarının göstergeye katkısını da belirleyecektir.

Edebiyat

1. Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. Düzenleyici ve patolojik süreçlere katılımcı olarak serbest radikaller. İçinde: Grigoriev A.I., Vladimirov Yu.A., editörler. Temel bilimler - tıp. Biyofiz. Bal. teknoloji. M.: MAX Basın; 2015. cilt 1. s. 38-71.

3. Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V. Antioksidanları inceleme yöntemleri. Kimya rast. İşlenmemiş içerikler. 2004; (3): 63-75.

4. Vasiliev R.F., Kancheva V.D., Fedorova G.F., Butovska D.I., Trofimov A.V. Kalkonların antioksidan aktivitesi. Reaktivitenin kemilüminesans tespiti ve reaktiflerin ve ara maddelerin enerjilerinin ve yapılarının kuantum kimyasal hesaplaması. Kinetik ve kataliz. 2010; 51(4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil'ev RF, Veprintsev TL. Peroksi-

Radikal aracılı kemilüminesans: antioksidan tahlil için mekanik çeşitlilik ve temeller. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-hemin kaynaklı luminol kemilüminesans ile antiradikal kapasitenin değerlendirilmesi. J Tarımsal Gıda Kimyası 2003 3 Aralık; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu.A., Proskurnina E.V. Serbest radikaller ve hücresel kemilüminesans. Uspekhi biyol. kimya 2009; 49: 341-88.

10. Vladimirov Yu.A., Proskurnina E.V., Izmailov D. Yu.Serbest radikallerin reaksiyonlarını incelemek için bir yöntem olarak kinetik kemilüminesans. Biyofizik. 2011; 56(6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu.A. Kemilüminesans kinetiğini ölçerek antioksidan aktivitenin belirlenmesi. Fotobiyoloji ve fototıp. 2011; 7(2): 70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2.2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termolizi ile indüklenen Luminol lüminesansı. Ücretsiz

Radic Res İletişimi. 1992; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD aktivitesini değerlendirmek için luminol lüminesansının söndürülmesinin kullanılması üzerine. Serbest Radik Biol Med. 1994 Haziran; 16(6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Luminolle güçlendirilmiş kemilüminesans ölçümlerinden toplam antioksidan potansiyelinin (TRAP) ve toplam antioksidan reaktivitesinin değerlendirilmesi. Serbest Radik Biol Med. 1995 Şubat; 18(2): 153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Durdurulmuş akış teknikleri ile luminolün ışıldayan peroksidasyonu mekanizmasının araştırılması. J Biol Kimya. 1968 25 Eylül; 243 (18): 4706-14.

21. Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. 2,2"-azo-bis(2-amidinopropan) kullanılarak aktive edilmiş kemilüminesans yoluyla antioksidanların belirlenmesi. Vestn. MGU. Ser. 2. Chem 2012;53(3): 187-93.

24. SSCB Sağlık Bakanlığı SSCB Devlet Farmakopesi XI ed. Cilt 2 “Genel analiz yöntemleri. Tıbbi bitki hammaddeleri." M.: Tıp; 1987. s. 147-8.

25. Sergunova E.V., Sorokina A.A., Kornyushina M.A. Kuşburnu ekstraksiyon preparatlarının incelenmesi. Eczane. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E.V., Sorokina A.A., Avrach A.S. Alıç meyvelerinin çeşitli koruma ve sulu ekstraksiyon yöntemleri kullanılarak incelenmesi. Eczane. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A.S., Sergunova E.V., Kuksova Ya.V. Meyvelerin biyolojik olarak aktif maddeleri ve ahududu sulu özleri. Eczane. 2014; (1): 8-10.

28. Avrach A.S., Samylina I.A., Sergunova E.V. Alıç meyvelerinin biyolojik olarak aktif maddelerinin incelenmesi - homeopatik matris tentürlerinin hazırlanması için hammaddeler. Oturdu. ilmi tr. XXIV Moskova'dan gelen malzemelere dayanmaktadır. uluslararası homeopatik. konf. “Modern tıpta homeopatik yöntemin gelişimi”; 24-25 Ocak 2014; Moskova. M.; 2014.s. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Çeşitli koruma yöntemlerinin tıbbi bitki hammaddelerindeki biyolojik olarak aktif maddelerin bileşiminin incelenmesi. Oturdu. XX Ross'un materyallerine dayanan tezler. ulusal kong. "İnsan ve Tıp"; 15-19 Nisan 2013; Moskova. M.: EKOOnis; 2013.s. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M.A., Neiman P.L. Yaban turpu rizomlarından ve köklerinden elde edilen ekstraktlarda peroksidaz aktivitesinin ve bunun çeşitli etkilere karşı stabilitesinin incelenmesi. Vestn. Moskova Devlet Üniversitesi. Ser. 2. Kimya. 2006; 47(5): 350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Svobodnye radikaly kak uchastniki regulyatornykh ve patolojik protsessov. İçinde: Grigor"ev AI, Vladimirov YuA, editörler. Fundamental"nye nauki - medicitsine. Biofizicheskie meditsinskie tekhnologii. Moskova: MAKS Press; 2015.v. 1. s. 38-71. Rusça.

2. Chanda S, Dave R. Antioksidan aktivite değerlendirmesi için in vitro modeller ve antioksidan özelliklere sahip bazı tıbbi bitkiler: Genel bir bakış. Afr J Microbiol Res. 2009 Aralık; 3(13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal'tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Khimija Rastitel"nogo Syr"ja. 2004; (3): 63-75. Rusça.

4. Vasil"ev RF, K""ncheva VD, Fedorova GF, B""tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti ve kvantovo-khimicheskii raschet enerji ve stroeniya reaktif ve ara ürünler. Kinetik ve kataliz. 2010; 51(4): 533-41. Rusça.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA, ve diğerleri. Kurkumin ile ilgili bileşiklerin antioksidan potansiyeli, kemilüminesans kinetiği, zincir kırma verimliliği, temizleme aktivitesi (ORAC) ve DFT hesaplamaları ile incelenmiştir. Beilstein J Org Kimya. 11 Ağustos 2015; 11: 1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil'ev RF, Veprintsev TL. Peroksi-radikal aracılı kemilüminesans: mekanistik çeşitlilik ve antioksidan tahlilin temelleri. Arkivoc. 2007;8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil'ev RF. Bitkisel lipitlerin antioksidatif özellikleri için kolay kemilüminesans deneyi: temeller ve açıklayıcı örnekler. Analist. 2009 Ekim; 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-hemin kaynaklı luminol ile antiradikal kapasitenin değerlendirilmesi

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Svobodnye radikaly ve kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49: 341-88. Rusça.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya kak metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. Biyofizik. 2011; 56(6): 1081-90. Rusça.

11. Izmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiyoloji ve fotoğraf meditasyonu. 2011; 7(2): 70-6. Rusça.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termolizi ile indüklenen lüminol lüminesansı. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD aktivitesini değerlendirmek için luminol lüminesansının söndürülmesinin kullanılması üzerine. Serbest Radik Biol Med. 1994 Haziran; 16(6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Methemoglobin veya oksihemoglobin ile hidrojen peroksit arasındaki reaksiyonla ilişkili görünür kemilüminesans. Fotokim Fotobiyol. 1994 Kasım; 60(5): 405-11.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol ile güçlendirilmiş kemilüminesans ölçümlerinden toplam antioksidan potansiyelinin (TRAP) ve toplam antioksidan reaktivitesinin değerlendirilmesi. Serbest Radik Biol Med. 1995 Şubat; 18(2): 153-8.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV, ve diğerleri. Lipozomal flavonollerin antioksidan aktivitesinin HRP-H2O2-luminol sistemi ile in vitro değerlendirilmesi. J Mikroenkapsül. 2011; 28(4): 258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Mekanizmanın araştırılması

Durdurulmuş akış teknikleri ile luminolün ışıldayan peroksidasyonunun. J Biol Kimya. 1968 25 Eylül; 243 (18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Beş şifalı bitki ekstraktının fitokimyasal özellikleri, serbest radikal temizleme aktiviteleri ve nöroproteksiyonu. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternatif Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 10 Ağustos.

19. Chang CL, Lin CS. Terminalia chebula Retzius ekstraktlarının fitokimyasal bileşimi, antioksidan aktivitesi ve nöroprotektif etkisi. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternatif Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011 5 Temmuz.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Farklı flavonoidlerin antioksidan aktivitelerinin kemilüminesans yöntemiyle değerlendirilmesi. AAPS Eczacılık Bilimi. 2003; 5(2): 111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodo aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol"zovaniem 2,2"-azo-bis(2-amidinopropana). Moskova Üniversitesi Kimya Bülteni. 2012; 53(3): 187-93. Rusça.

22. Pogacnik L, Urrih NP. Bitkisel ekstraktların antioksidan kapasitesinin belirlenmesi için optimize edilmiş kemilüminesans testinin uygulanması. Lüminesans. 2012 Kasım-Aralık; 27(6): 505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Özet bir parametre olarak toplam düşük moleküler ağırlıklı antioksidanlar, biyolojik numunelerde bir kemilüminesans inhibisyon tahlili ile ölçülür. Nat Protokolü. 2010 Eylül; 5(10): 1627-34.

24. Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. 11. baskı. Iss. 2. "Obshchie metodik analizi."

Lekarstvennoe rastitel "noe syr"e". Moskova: Medltsina; 1987. s. 147-8. Rusça.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh hazırlık gemisiovnika. Eczane. 2012; (2): 14-6. Rusça.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii ve vodnykh izvlechenii. Farmatsiya. 2010; (5): 16-8. Rusça.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biyolojik aktivnye veshchestva plodov ve vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsiya. 2014; (1): 8-10. Rusça.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr"ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. 14. Moskova Uluslararası Homeopatik Konferansı "Razvitie gomeopaticheskogo methoda v sovremennoi meditine" Bildirileri; 2014 24-25 Ocak; Moskova. M .; 2014 s.146- 7. Rusça.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biyolojik olarak aktif ve lekarstvennom rastitel "nom syr" ve razlichnykh sposobov konservatsii. 20. Rusya Ulusal Kongresi "Chelovek i lekarstvo" Bildirileri; 2013 Nisan 1519; Moskova. Moskova: EkOOnis; 2013.s. 184-90. Rusça.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti vktakh iz kornei khrena ve ee stabil"nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moskova Üniversitesi Kimya Bülteni. 2006; 47 (5): 350-2. Russian.

1 Bolshakova L.S. 1Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federal Devlet Bütçe Yüksek Mesleki Eğitim Kurumu "Oryol Devlet Ekonomi ve Ticaret Enstitüsü"

2 Federal Devlet Bütçe Kurumu “Kimyasallaştırma ve Tarımsal Radyoloji Merkezi” Orlovsky”

3 Federal Devlet Bütçe Yüksek Mesleki Eğitim Kurumu "Devlet Üniversitesi - Eğitim, Araştırma ve Üretim Kompleksi"

Besinlerin antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kemilüminesans kullanma olasılığı araştırıldı. Önerilen yöntem, yoğunluğu kemilüminesan numunedeki peroksit miktarına bağlı olan alkalin bir ortamda luminolün kemilüminesansına dayanmaktadır. Kemilüminesans, bir dozaj pompası, ışık geçirmez bir oda, bir cam vakum fotomultiplikatörü ve bir bilgisayar sistemi içeren gelişmiş bir kurulum kullanılarak kaydedildi. Kemilüminesansı arttırmak için luminole bir potasyum demir sülfit çözeltisi eklendi. Analiz edilen numunenin luminol çözeltisine sokulduğu anda kemilüminesans yoğunluğundaki değişiklikler kaydedildi. Analiz edilen örnek olarak kuru düşük sıcaklıkta damıtma yoluyla elde edilen karahindiba özütü kullanıldı. Yüksek antioksidan aktiviteleriyle bilinen fenolik bileşikler içerir. Çeşitli gıda bileşiklerinin antioksidan özelliklerinin belirlenmesinde kemilüminesans yönteminin kullanılabileceği tespit edilmiştir.

Besinlerin antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kemilüminesans kullanma olasılığı araştırıldı. Önerilen yöntem, yoğunluğu kemilüminesan numunedeki peroksit miktarına bağlı olan alkalin bir ortamda luminolün kemilüminesansına dayanmaktadır. Kemilüminesans, bir dozaj pompası, ışık geçirmez bir oda, bir cam vakum fotomultiplikatörü ve bir bilgisayar sistemi içeren gelişmiş bir kurulum kullanılarak kaydedildi. Kemilüminesansı arttırmak için luminole bir potasyum demir sülfit çözeltisi eklendi. Analiz edilen numunenin luminol çözeltisine sokulduğu anda kemilüminesans yoğunluğundaki değişiklikler kaydedildi. Analiz edilen örnek olarak kuru düşük sıcaklıkta damıtma yoluyla elde edilen karahindiba özütü kullanıldı. Yüksek antioksidan aktiviteleriyle bilinen fenolik bileşikler içerir. Çeşitli gıda bileşiklerinin antioksidan özelliklerinin belirlenmesinde kemilüminesans yönteminin kullanılabileceği tespit edilmiştir.

Bibliyografik bağlantı

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. GIDA MADDELERİNİN ANTİOKSİDAN ÖZELLİKLERİNİ DEĞERLENDİRMEK İÇİN KİMYASAL MALZEME KULLANIMI // Akılcı beslenme, gıda katkı maddeleri ve biyostimülanlar. – 2014. – Sayı 6. – S. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (erişim tarihi: 17.12.2019). "Doğa Bilimleri Akademisi" yayınevinin yayınladığı dergileri dikkatinize sunuyoruz

mezuniyet çalışması

1.4 Antioksidan araştırma yöntemleri

antioksidan aktivite şu şekilde sınıflandırılır: ortaya çıkan AOA'yı kaydetme yöntemlerine göre (hacimsel, fotometrik, kemilüminesan, floresan, elektrokimyasal); oksidasyon kaynağının türüne göre; oksitlenen bileşiğin türüne göre; oksitlenmiş bileşiğin ölçülmesi yöntemi ile.

Ancak antioksidan aktiviteyi belirlemek için en iyi bilinen yöntemler şunlardır:

1 TEAC (trolox eşdeğer antioksidan kapasitesi): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

Metmyoglobin + H 2 O 2 > Ferrilglobin + ABTS > ABTS * + AO.

Trolox eşdeğerleri yöntemi (TEAC), antioksidanların 2,2-azinobis radikal katyonlarını (ABTS) azaltma ve böylece spektrumun uzun dalga boyu bölgesindeki (600 nm) emilimi engelleme yeteneğine dayanmaktadır. Yöntemin önemli bir dezavantajı, radikalin üretilmesi için iki aşamalı reaksiyondur. Bu, analiz için standart bir reaktif seti kullanılmasına rağmen analiz süresini uzatır ve sonuçların dağılımını artırabilir.

2 FRAP (ferrik indirgeyici antioksidan güç): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

Fe(III)-Tripiriditriazin+AO>Fe(II)-Tripiridiltriazin.

Demir azaltma/antioksidan kapasitesi (FRAP). Burada kullanılan reaksiyon, Fe(III)-tripiridiltriazinin Fe(II)-tripiridiltriazine indirgenmesidir. Ancak bu yöntem glutatyon gibi bazı antioksidanların tayinini belirleyememektedir. Bu yöntem düşük molekül ağırlıklı antioksidanların doğrudan belirlenmesine olanak sağlar. Düşük pH'ta Fe(III)-tripiridiltriazin kompleksinin Fe(II) kompleksine indirgenmesine yoğun mavi bir rengin görünümü eşlik eder. Ölçümler, antioksidanların, reaksiyon karışımında oluşan reaksiyon türlerinin oksidatif etkisini baskılama yeteneğine dayanmaktadır. Bu yöntemin uygulanması basit, hızlı ve düşük maliyetlidir.

3 ORAC (oksijen radikali absorbans kapasitesi): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

Fe(II)+H202 >Fe(III) + OH*+AO>OH* + Luminol.

Oksijen radikal absorbans kapasitesinin (ORAC) belirlenmesi. Bu yöntemde, ROS ile etkileşimi sonucu ortaya çıkan bir substratın (fikoeritrin veya fluorescein) floresansı kaydedilir. Test numunesi antioksidan içeriyorsa, kontrol numunesine kıyasla floresansta bir azalma gözlenir. Bu yöntem ilk olarak 1992 yılında Ulusal Yaşlanma Enstitüsü'nden Dr. Guohua Kao tarafından geliştirildi. 1996 yılında Dr. Kao, yarı otomatik yöntemin uygulandığı USDA Yaşlanma Araştırma Merkezi'nde ortak bir grupta Dr. Ronald Pryer ile birlikte çalıştı. yarattı.

4 TRAP (toplam radikal yakalama antioksidan parametresi): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

AAPH+AO>AAPH* + PL (FE).

Bu yöntem, antioksidanların peroksil radikali 2,2-azobis(2-amidinopropan) dihidroklorür (AAPH) ile etkileşime girme yeteneğinden yararlanır. TRAP modifikasyonları analitik sinyalin kaydedilmesine yönelik yöntemlerden oluşur. Çoğu zaman, analizin son aşamasında, peroksi radikali AAPH, bir ışıldayan (luminol), floresan (diklorofloresin diasetat, DCFH-DA) veya diğer optik olarak aktif substrat ile etkileşime girer.

TEAC, ORAC ve TRAP yöntemlerinde standart olarak suda çözünebilen E vitamini türevi Trolox (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksi asit) kullanılmaktadır.

Son zamanlarda antioksidan aktivitenin değerlendirilmesinde elektrokimyasal yöntemlerin kullanımına olan ilgi artmıştır. Bu yöntemler yüksek hassasiyete ve hızlı analize sahiptir.

Bazı gıda ürünlerinin antioksidan aktivitesinin değerlendirilmesi, antioksidan maddelerin enol (-OH) ve sülfhidril (-SH) gruplarından dolayı redoks reaksiyonlarına katılma özelliğinin kullanılmasına dayanan potansiyometri yöntemi ile gerçekleştirilmektedir.

Çözeltilerin antioksidan özelliklerinin belirlenmesi, antioksidanların medyatör sistemle kimyasal etkileşimine dayanır ve bu da onun redoks potansiyelinde bir değişikliğe yol açar. Bir elektrokimyasal hücre, redoks potansiyelini ölçmeden önce bir K-Na-fosfat tampon çözeltisi, bir Fe(III)/Fe(II) aracı sistemi ve karmaşık bir elektrot içeren bir kaptır. Antioksidan aktivite g-eq/l cinsinden değerlendirilir.

Antioksidan aktiviteyi belirlemeye yönelik amperometrik yöntem, belirli bir potansiyelin altındaki çalışma elektrotunun yüzeyinde test maddesinin oksidasyonu sırasında oluşan elektrik akımının ölçülmesine dayanmaktadır. Amperometrik yöntemin duyarlılığı hem çalışma elektrodunun doğasına hem de ona uygulanan potansiyele göre belirlenir. Polifenollerin ve flavonoidlerin amperometrik dedektörünün tespit limiti nano pikogram seviyesindedir; bu kadar düşük konsantrasyonlarda, bir arada bulunduklarında farklı antioksidanların karşılıklı etki olasılığı, özellikle de sinerji olgusunun tezahürü daha düşük olur. . Yöntemin dezavantajları spesifikliğini içerir: bu koşullar altında, oksijen elektro-indirgeme potansiyelleri bölgesinde kendileri oksitlenen veya indirgenen antioksidanlar analiz edilemez. Yöntemin avantajları arasında hızı, prostatı ve duyarlılığı yer alıyor.

Elektrikle üretilen oksidanları kullanan galvanostatik kulometri yöntemi - yöntem, yağda çözünen antioksidanların analizi için geçerlidir.

Askorbik asitin belirlenmesi için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir:

bir çözeltiye basit daldırma yoluyla bir nikel (II) hekzasiyanoferrat filmi ile modifiye edilmiş bir alüminyum elektrot kullanan amperometrik yöntem;

Wawele reaktifi ve indikatör tozu olarak bakır (II) ile modifiye edilmiş silisik asit kserojeli kullanılarak askorbik asidin katı faz spektrofotometrik ve görsel test tespiti için bir yöntem;

askorbik asidin kemilüminesan tespiti, sülfürik asit ortamında rodamin B'nin seryum (IV) ile kemilüminesan reaksiyonu kullanılarak akış enjeksiyon yöntemiyle gerçekleştirilebilir.

sulu ve sulu-organik ortamlarda anodik voltametri ile 10 -8 -10 -3 g/cm3 aralığında askorbik asitin belirlenmesi.

Hızlı ve son derece hassas olduğundan en yaygın olanı FRAP yöntemidir. Geçtiğimiz birkaç on yılda, FRAP yöntemini kullanarak antioksidan aktiviteyi belirlemek için çok sayıda yöntem geliştirildi (Tablo 1).

Tablo 1 FRAP yönteminin geliştirilmesi ve çeşitli nesnelerin antioksidan aktivitesini belirlemek için uygulanması

				Analiz nesneleri	Notlar
				Kan plazması	t=4 dk. Reaksiyon stokiyometrisi ve katkısallık incelenmiştir.
				Çay, şarap	Polifenollere bağlı AOA'nın belirlenmesi
					Farklı çay çeşitlerinin AOA değerleri karşılaştırıldı
Pulido,Bravo,Saura-Calixto				Model çözümleri	t=30 dk. Sulu olmayan bir çözücünün etkisi ortaya çıktı
				Bitkiler
				Kan, doku	PIA yöntemi. Yabancı maddelerin etkisi test edilmiştir.
Firuzi, Lacanna, Petrucci e.a.				Model çözümleri	Farklı AO'ların belirlenmesinin hassasiyeti, yapılarının ve redoks potansiyellerinin bir fonksiyonu olarak incelenmiştir.
Katalinik, Milos,				Çeşitli şaraplar
Temerdaşev, Tsyupko ve diğerleri.				Model karışımları
Loginova, Konovalova				İlaçlar İlaçlar	Test metodu
Temerdaşev, Tsyupko ve diğerleri.				Kuru kırmızı şaraplar	AOA'nın diğer şarap kalitesi göstergeleri ile korelasyonu
Tablo 1'in devamı
				Model karışımları	Farklı AO'ları belirlemenin hassasiyeti araştırıldı
Vershinin, Vlasova, Tsyupko				Model karışımları	Oksitleyici madde eksikliği olduğunda sinyalin katkı maddesi olmadığı bulundu
Anisimovich, Deineka ve diğerleri.				Model çözümleri	AOA'nın değerlendirilmesine yönelik kinetik parametreler önerilmiştir.

Notlar: Geleneksel olarak belirlenmiş: FIA-akış enjeksiyon analizi, TPTZ-tripiridiltriazin, DIP-2,2,-dipiridil, PHEN-o-fenantrolin, DPA-piridindikarboksilik asit, FZ-ferrozin, AA-askorbik asit, CT-katekol, t - maruz kalma süresi, dk.

Sulu çözeltilerde proteinler ve polielektrolitler arasındaki etkileşim

Protein-polielektrolit komplekslerini karakterize etmek için çeşitli analitik yöntemler kullanılır. Enstrümantal yöntemler yapısal ve optik özellikler hakkında bilgi sağlar ve ayrıca PEC bağlanmasının dinamiklerini ve doğasını belirler.

D-metal bileşiklerinin bipolar membrandaki su molekülünün ayrışma hızı üzerindeki etkisi

Yeni BPM'lerin sentezlenmesi sürecinde, sentezlenen membranların elektrokimyasal özelliklerinin iyileştirilmesini sağlayan sonraki sentez koşullarının seçimi için elde edilen örneklerin özelliklerinin incelenmesine çok dikkat edilmelidir.

Tasarımcı ilaçları ve sentetik kanabinoidler

Bitki karışımlarındaki sentetik kanabinoidlerin tespiti, kromatografi-kütle spektrometresi, gaz kromatografisi, ince tabaka kromatografisi ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi gibi çeşitli fizikokimyasal yöntemlerle gerçekleştirilebilmektedir.

Tıbbi bitki materyallerinde flavonoidlerin belirlenmesi için bir yöntemin geliştirilmesi

Kinolinonlar-2'nin sentezi ve farmakolojik özellikleri

Çalışmanın amacı: Kinolinon-2. Araştırma yöntemi: “Marvin JS” bilgisayar programı kullanılarak maddenin yapısı oluşturuldu. Daha sonra daha fazla araştırma yapılması için “http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php” sitesine gönderildi...

Epoksi polimer buharlaşma ürünlerini incelemek için termal spektral yöntem

Kabuklu deniz hayvanlarının kabuklarından yüksek oranda saflaştırılmış kitosan üretme teknolojisi

Kitosanın moleküler ağırlığının belirlenmesi Kitosanın moleküler ağırlığı, standart bir yöntem kullanılarak viskometrik olarak belirlendi. 0,05 ve 0,5 g/dL konsantrasyonlu çözeltiler, bir polimer tozu numunesinin asetat tamponu (0...

Tabiat parkı topraklarının fizyografik özellikleri

1 Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federal Devlet Bütçe Yüksek Mesleki Eğitim Kurumu "Oryol Devlet Ekonomi ve Ticaret Enstitüsü"

2 Federal Devlet Bütçe Kurumu “Kimyasallaştırma ve Tarımsal Radyoloji Merkezi” Orlovsky”

3 Federal Devlet Bütçe Yüksek Mesleki Eğitim Kurumu "Devlet Üniversitesi - Eğitim, Araştırma ve Üretim Kompleksi"

Besinlerin antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kemilüminesans kullanma olasılığı araştırıldı. Önerilen yöntem, yoğunluğu kemilüminesan numunedeki peroksit miktarına bağlı olan alkalin bir ortamda luminolün kemilüminesansına dayanmaktadır. Kemilüminesans, bir dozaj pompası, ışık geçirmez bir oda, bir cam vakum fotomultiplikatörü ve bir bilgisayar sistemi içeren gelişmiş bir kurulum kullanılarak kaydedildi. Kemilüminesansı arttırmak için luminole bir potasyum demir sülfit çözeltisi eklendi. Analiz edilen numunenin luminol çözeltisine sokulduğu anda kemilüminesans yoğunluğundaki değişiklikler kaydedildi. Analiz edilen örnek olarak kuru düşük sıcaklıkta damıtma yoluyla elde edilen karahindiba özütü kullanıldı. Yüksek antioksidan aktiviteleriyle bilinen fenolik bileşikler içerir. Çeşitli gıda bileşiklerinin antioksidan özelliklerinin belirlenmesinde kemilüminesans yönteminin kullanılabileceği tespit edilmiştir.

kemilüminesans

antioksidan aktivite

peroksitler

besinler

1. Vasilyev R.F. Kimyasal parıltı // Kimya ve kimyagerler, 01.21.10. – URL: http://chemistry-chemists.com. (erişim tarihi: 08/22/13).

2. Vladimirov Yu.A. Serbest radikaller ve antioksidanlar // Vestn. RAM'ler. – 1998. – Sayı. 7. – S. 43–51.

3. Kondrashova E.A. Enzim immünolojik tahlilinin en hassas yöntemi olarak kemilüminesans ve uygulaması // Klinik laboratuvar teşhisi. – 1999. – Sayı. 9. – S. 32.

4. Lyubimov, G.Yu. Kemilüminesans analizi // İmmünoloji. – 1991. – No. 1. – S. 40–49.

5. Mayansky A.N., Nevmyatullin A.L., Chebotar I.V. Fagositoz sisteminde reaktif kemilüminesans // Mikrobiyoloji. – 1987. – No. 1. – S. 109–115.

6. Sherstnev M.P. Hücre kemilüminesansının oluşumu için kalsiyuma bağımlı ve kalsiyumdan bağımsız yollar // Kemilüminesans soruları. – 1991. – No. 2. – S. 1–4.

Günümüzde kemilüminesans kimya, fizik ve biyoloji arasındaki arayüzde yer alan geniş bir bilim alanını temsil etmektedir. Kemilüminesans ile kimyasal enerjinin elektromanyetik titreşimlerin enerjisine doğrudan dönüşümü meydana gelir; Dünyaya Kemilüminesans kullanarak reaksiyonun nasıl ilerlediğini, mekanizmasının ne olduğunu, teknolojik süreçlerin etkili ve verimli bir şekilde uygulanması için neyin gerekli olduğunu öğrenebilirsiniz. Kimyasal bir ürün üretmenin teknolojik sürecine kemilüminesans eşlik ediyorsa, o zaman yoğunluğu sürecin hızının bir ölçüsü olarak hizmet edebilir: reaksiyon ne kadar hızlı olursa, parıltı da o kadar parlak olur. Kemilüminesans reaksiyonu sırasında, enerji açısından zengin ürünler elde edilir ve bunlar daha sonra ışık yayarak enerji açığa çıkarır, yani. kimyasal enerji elektromanyetik radyasyon enerjisine dönüştürülür.

Çalışmanın amacı besinlerin antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kemilüminesans kullanma olasılığını araştırmaktır.

Araştırma sonuçları ve tartışma

Besinlerin antioksidan aktivitesini değerlendirme sorunu çok önemlidir. Belirli bir ürünün kullanışlılığını göstermek için "antioksidan aktivite" teriminin kullanımı genellikle herhangi bir kimyasal veya biyokimyasal tartışma olmadan yapılır. Kural olarak herhangi bir maddenin antioksidan aktivitesi, peroksit değerini azaltma etkinliği anlamına gelir. Peroksit değeri kavramı, belirli bir gıda ürününün metabolizma aşamalarının kinetiğine ve termodinamiğine tam olarak uymadığından, kimyasal özünü de tam olarak ortaya çıkarmaz. Ayrıca bu değer, yağ formundaki lipitleri karakterize etmek için de kullanılır. Bununla birlikte, vücutta oksidasyon ve peroksit oluşumu süreçleri yalnızca yağ tüketirken değil diğer gıdaları da tüketirken meydana gelir. Başka bir deyişle, belirli bir üründeki peroksit içeriğinin bir tür ölçekte "tartıldığı" söylenebilir; burada "referans ağırlığı", peroksitler tarafından oksitlenen iyodür iyonunun asidik bir ortamdaki konsantrasyon birimidir. bunun sonucunda moleküler iyot oluşur:

ben- - e → ben; (1)

ben + ben → I20. (2)

Moleküler iyot, sodyum tiyosülfat içeren bir çözelti ile titre edildiğinde konsantrasyonu belirlenir ve dolayısıyla oksitleyici iyodür iyonlarının miktarı belirlenir; aslında peroksit numarası olarak adlandırılan peroksit bileşikleri. Bu tür bir "tartım" kullanılarak peroksit sayısının belirlenmesi, Şekil 2'de gösterilen reaksiyona dayanmaktadır. 1.

Pirinç. 1. Sodyum tiyosülfat kullanılarak peroksit değerinin belirlenmesi

Böylece peroksitlerin konsantrasyonu denklemden belirlenir.

С(I2) = ϒ(C[-O-O-]), (3)

burada ϒ, moleküler iyot konsantrasyonu ile peroksit konsantrasyonu arasındaki korelasyon katsayısıdır.

Ürünlerdeki peroksitleri belirlemek için önerdiğimiz yöntem, alkalin bir ortamdaki luminolün (C[lm]) kemilüminesansına dayanmaktadır; bunun yoğunluğu (Ichl), kemilüminesanstaki peroksitlerin (C[-O-O-]) konsantrasyonuna bağlıdır. örnek:

IHL = Ϧхл ω, (4)

burada Ϧhl kemilüminesansın kuantum verimidir; ω - peroksitleri içeren reaksiyon hızı:

khlC[-O-O-] C[lm] = ω, (5)

burada khl reaksiyon hızı sabitidir veya:

C[lm] khl Ϧkhl = K, (6)

IHL = K C[ -O-O- ]. (7).

Peroksit miktarı (-O-O-), ışık toplamı (S) ile belirlenir:

S'nin değeri, kemilüminesans reaksiyonunda peroksitin tamamen tüketilme derecesine bağlıdır.

K sabitini belirlemek için, ışık toplamı S'nin titrasyonla oluşturulan peroksit konsantrasyonuna bağımlılığı için bir kalibrasyon eğrisi oluşturulur:

S = f(C[-O-O-]). (9)

Peroksit olarak hidrojen peroksit H2O2 kullanılır.

Daha sonra denklem (3) ve (9)'dan elde edilen veriler karşılaştırılır. ϒ ve K karşılaştırmasına dayanarak, peroksitlerin bu yöntemlerle belirlenmesinin altında yatan reaksiyon mekanizmalarının uyumu hakkında bir sonuca varılmıştır. Bu aralıktaki peroksit konsantrasyonlarında ϒ ve K'nin aslında birbirleriyle uyumlu olduğu ve bu nedenle peroksit sayısını belirlemek için kullanılabileceği ortaya çıktı.

Luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik asit hidrazid, H2L) içeren alkalin ortamda kemilüminesans gözlendi. Bir cam vakumlu fotoçoğaltıcı içeren bir kemilüminesan kurulum kullanılarak kaydedildi. Fotoçoğaltıcı, bilgisayar monitörü ekranına (5) kaydedilen fotoçoğaltıcı sinyalini güçlendiren bir bloğa (9) bağlanan yüksek voltajlı bir doğrultucu (7) tarafından çalıştırılır.

Pirinç. 2. Analiz edilen ürünün kemilüminesansının kaydı: 1 - dozaj pompası; 2 - ışık geçirmez oda; 3 - ayna; 4 - küvet; 5 - bilgisayar sistemi; 6 - fotomultiplier; 7 - yüksek voltaj doğrultucu; 8 - kemilüminesans radyasyonun spektral bölgesini belirlemenizi sağlayan cihaz; 9 - fotomultiplier sinyalini güçlendiren blok

Analiz edilen numuneyi, kemilüminesans lüminol çözeltisi içeren bir küvete (4) yerleştirmek için bir dozaj pompası (1) gereklidir. Bu dağıtıcı, enjekte edilen numune için kemilüminesans solüsyonlu bir karıştırıcı görevi görür. Reaksiyon hızını ve kemilüminesans yoğunluğunu arttırmak için luminole bir potasyum demir sülfür çözeltisi ilave edildi. Karıştırma, çözelti sıvısının içine hava pompalanmasıyla elde edilen hava kabarcıkları ile gerçekleştirilir. Işık geçirmez bölmede (2) bulunan ayna (3), ışık geçirmez bölmeye monte edilen fotoçoğaltıcının (6) fotokatotuna gelen kemilüminesan radyasyonun daha iyi ışık toplamasına hizmet eder. Dağıtıcı, deneyler sırasında ışık geçirmez bölmeyi (2) açmadan gerekli sıvı bileşenlerini küvete vermenize olanak sağlar. Bu durumda bu sıvılar cam veya plastik tüpler vasıtasıyla küvete (4) girmektedir. Bilgisayar sistemi, ışıma yoğunluğunun I zamanına, yani kemilüminesans kinetiğine bağımlılığını kaydetmeyi mümkün kılar:

Bilgisayar sistemi, kemilüminesansa neden olan reaksiyonların hız sabitleriyle, yani kinetikleriyle ilişkili olan I = f(t) fonksiyonundaki yükselme ve düşme sabitlerini yansıtır. Kemilüminesans odasına, kemilüminesans radyasyonun spektral bölgesini, yani bağımlılığı belirlemeyi mümkün kılan bir cihaz (8) dahil edilmiştir:

ben = f1(λ). (on bir)

Bu blok, içine sınır filtrelerinin monte edildiği disk şeklinde bir kasettir. Filtrelerin değişimi, disk kasetinin, filtre düzleminin merkezlerini ve fotoçoğaltıcının fotokatot düzlemini birleştiren yatay eksene göre döndürülmesiyle gerçekleştirilir.

Ölçüm işlemi şu şekilde gerçekleştirilir:

1. Fotoçoğaltıcının besleme voltajındaki değişikliklere ve katodu üzerine düşen referans ışık kaynağının yoğunluğundaki değişikliklere tepkisi belirlenir.

2. Küvet, alkalin ortamda bir luminol çözeltisi ile doldurulur.

3. Dağıtıcı analiz edilen numuneyle doldurulur.

4. Kemilüminesans yoğunluğunun t zamanına bağımlılığı kaydedilir. Kemilüminesans gözlemleri t1 zamanına kadar gerçekleştirilir, bu zamanda t zamanından itibaren I1'deki değişiklik minimumdur: I1 = f1(t).

5. Analiz edilen çözeltinin bir kısmı bir dağıtıcı kullanılarak sağlanır.

6. Kinetiği I = f(t) olan analiz edilen numunenin kemilüminesansı gözlemlenir.

İncirde. Şekil 3, analiz edilen çözümün tanıtılmasından sonra (I = f(t)) grafiğiyle ilişkili fonksiyonların (I1 = f1(t)) bağımlılığının bir grafiğini gösterir.

Olarak Şekil l'de görülebilir. Şekil 3'te, luminol kemilüminesansın yoğunluğu değişir: analiz edilen numunenin eklenmesinden sonra keskin bir artışın ardından parlaklıkta keskin bir düşüş olur.

Luminol oksidasyonu sırasında kemilüminesanstaki artış peroksitlerin oluşumuyla ilişkili olduğundan, analiz edilen numunenin eklenmesinden sonra kemilüminesans yoğunluğundaki azalma, bunların miktarında bir azalma olduğunu gösterir. Sonuç olarak analiz edilen örnekte yer alan bileşiklerde antioksidan aktivitenin varlığından bahsedebiliriz.

Analiz edilen numunenin, yüksek antioksidan aktiviteleriyle bilinen fenolik bileşikleri içeren, kuru düşük sıcaklıkta damıtma yoluyla elde edilen bir karahindiba ekstraktı olduğuna dikkat edilmelidir.

Pirinç. 3. Analiz edilen çözümün tanıtılmasından sonra, fonksiyon bağımlılığı grafiği (I1 = f1(t)) ile (I = f(t)) grafiği

Ek olarak deney, kemilüminesans kullanarak ultra seyreltilmiş sistemlerde peroksit miktarını belirlemenin mümkün olduğunu ve bunun örneğin depolama sırasında ürünlerin oksidasyonunun başlangıcını değerlendirmek için önemli olduğunu ortaya koydu.

Bu nedenle çalışmalar, alkali bir ortamda luminolün kemilüminesansına dayanan ürünlerdeki peroksitleri belirleme yönteminin, gıda maddelerinin antioksidan aktivitesini değerlendirmeyi mümkün kıldığını ve çeşitli gıda bileşiklerinin antioksidan özelliklerini belirlemek için kullanılabileceğini göstermiştir. .

İnceleyenler:

Litvinova E.V., Teknik Bilimler Doktoru, Teknoloji, Organizasyon ve Gıda Hijyeni Bölümü Profesörü, Federal Devlet Bütçe Yüksek Mesleki Eğitim Kurumu "OrelGIET", Orel;

Kovaleva O.A., Biyolojik Bilimler Doktoru, Enstitü Müdürü, Federal Devlet Bütçe Yüksek Mesleki Eğitim Kurumu "Oryol Devlet Tarım Üniversitesi", Orel.

Çalışma editör tarafından 8 Kasım 2013'te teslim alındı.

Bibliyografik bağlantı

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. GIDA MADDELERİNİN ANTİOKSİDAN ÖZELLİKLERİNİ DEĞERLENDİRMEK İÇİN KİMYASAL MALZEME KULLANIMI // Temel Araştırma. – 2013. – Sayı 10-11. – S.2436-2439;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32810 (erişim tarihi: 12/17/2019). "Doğa Bilimleri Akademisi" yayınevinin yayınladığı dergileri dikkatinize sunuyoruz