MINISTARSTVO ZDRAVLJA RUJSKE FEDERACIJE
OPĆI FARMAKOPEJSKI ČLANAK
Validacija analitičkih procedura OFS.1.1.0012.15
Uveden po prvi put
Validacija analitičke tehnike je eksperimentalni dokaz da je tehnika pogodna za rješavanje predviđenih problema.
Ovom monografijom Opće farmakopeje uređuju se karakteristike analitičkih metoda utvrđenih radi njihove validacije, te odgovarajući kriteriji za prikladnost validiranih metoda namijenjenih kontroli kvaliteta lijekova: farmaceutskih supstanci i lijekova.
Metode kvantitativnog određivanja, uključujući metode za određivanje nečistoća i metode za određivanje granice sadržaja, podliježu validaciji. Metode provjere autentičnosti se provjeravaju ako je potrebno da se potvrdi njihova specifičnost.
Tokom validacije, analitička metoda se ocjenjuje prema dolje navedenim karakteristikama, odabranim uzimajući u obzir tipične preporuke date u tabeli:
- specifičnost;
- granica detekcije;
- granica kvantitativnog određivanja (granica kvantitacije);
- analitičko područje (opseg);
- linearnost;
- ispravnost (istinitost);
- preciznost;
- robusnost.
Tabela 1 — Karakteristike metoda utvrđenih tokom validacije
|
Ime karakteristike |
Glavne vrste tehnika | ||||
| Test autentičnosti | Strana materija | kvantitacija | |||
| Kvantitativne metode | Ograničenje sadržaja | Glavna aktivna tvar, standardizirane komponente | Aktivni sastojak u testu "Rastvaranje". | ||
| Specifičnost **) | Da | Da | Da | Da | Da |
| Granica detekcije | br | br | Da | br | br |
| Granica kvantifikacije | br | Da | br | br | br |
| Analitičko područje | br | Da | br | Da | Da |
| Linearnost | br | Da | br | Da | Da |
| U redu | br | Da | * | Da | Da |
| Preciznost :
– ponovljivost (konvergencija) – srednji (u laboratoriji) preciznost |
|||||
| Održivost | br | * | * | * | * |
*) može se definisati ako je potrebno;
**) nedostatak specifičnosti jedne analitičke tehnike može se nadoknaditi upotrebom druge analitičke tehnike.
Ponovna validacija (ponovna validacija) metoda se vrši kada dođe do promjene:
- tehnologije za dobijanje predmeta analize;
- sastav lijeka (predmet analize);
- prethodno odobrena metoda analize.
Specifičnost
Specifičnost je sposobnost analitičke tehnike da nedvosmisleno proceni analit u prisustvu pratećih komponenti.
Dokaz specifičnosti validirane procedure obično se zasniva na razmatranju podataka dobijenih pomoću nje iz analize modelskih mješavina poznatog sastava.
Specifičnost validirane metode može se dokazati i odgovarajućom statističkom obradom rezultata analiza stvarnih objekata urađenih njome i, paralelno, upotrebom druge, očigledno specifične, metode (metoda čija je specifičnost dokazana).
1.1 Za procedure testiranja identiteta
Validirana metoda (ili skup metoda) mora pružiti pouzdane informacije o prisutnosti date aktivne tvari u tvari ili doznom obliku ako sadrži komponente navedene u receptu, što je podložno eksperimentalnoj potvrdi.
Autentičnost aktivne supstance u farmaceutskoj supstanci ili leku utvrđuje se poređenjem sa standardnim uzorkom ili fizičko-hemijskim ili hemijskim svojstvima koja nisu karakteristična za druge komponente.
1.2 Za kvantifikaciju i postupke ispitivanja nečistoća
Metoda kvantitacije i ispitivanja nečistoća koja se validira podliježe istom pristupu: mora se procijeniti njegova specifičnost za analit, tj. mora se eksperimentalno potvrditi da prisustvo pratećih komponenti ne utiče neopravdano na analitički rezultat.
Specifičnost validirane metode moguće je ocijeniti kako analizom modelskih mješavina poznatog sastava koje sadrže analit, tako i poređenjem rezultata analiza stvarnih objekata dobijenih istovremeno primjenom validirane i druge, očigledno specifične metode. Rezultati relevantnih eksperimenata moraju se statistički obraditi.
Nedostatak specifičnosti testa može se nadoknaditi drugim dodatnim testovima.
Prilikom validacije metoda, ako je prikladno, mogu se koristiti uzorci lijeka koji su bili izloženi ekstremnim uvjetima (svjetlo, temperatura, vlažnost) ili kemijski modificirani bilo kojom odgovarajućom metodom kako bi se akumulirale nečistoće.
Za kromatografske tehnike prikazana je rezolucija između dvije supstance koje se najbliže eluiraju u odgovarajućim koncentracijama.
GRANICA DETEKCIJE
Granica detekcije je najmanja količina (koncentracija) analita u uzorku koja se može detektovati (ili aproksimirati) korištenjem metode koja se validira.
Granica detekcije u slučajevima navedenim u tabeli obično se izražava kao koncentracija analita (u relativnim % ili dijelovima na milion - ppm).
U zavisnosti od vrste tehnike (vizuelne ili instrumentalne), koriste se različite metode za određivanje granice detekcije.
2.1 Za metode sa vizuelnom procjenom rezultata analize
Testirajte uzorke sa različitim poznatim količinama (koncentracijama) analita i postavite minimalnu vrijednost na kojoj se rezultat analize može vizualno procijeniti. Ova vrijednost je procjena granice detekcije.
2.2 Za metode sa instrumentalnom evaluacijom rezultata analize
2.2.1 Odnosom signal-šum
Ovaj pristup je primjenjiv na metode za koje se promatra osnovni šum. Usporedite vrijednosti signala dobijene za kontrolni eksperiment i za uzorke s niskim koncentracijama analita. Postavite minimalnu količinu (koncentraciju) analita u uzorku, pri kojoj je odnos analitičkog signala i nivoa šuma jednak 3.
Pronađena vrijednost je procjena granice detekcije.
2.2.2 Po vrijednosti standardne devijacije signala i nagibu kalibracione krive
Granica detekcije (LO) nalazi se jednadžbom:
PO = 3,3 · S/b,
Gdje S
b je koeficijent osjetljivosti, koji je omjer analitičkog signala i utvrđene vrijednosti (tangenta nagiba kalibracijske krive).
S I b
S S a slobodni član jednačine ovog grafa. Dobivena vrijednost granice detekcije, ako je potrebno, može se potvrditi direktnim eksperimentom pri količinama (koncentracijama) analita blizu pronađene vrijednosti granice detekcije.
U pravilu, ako postoji dokaz o prikladnosti metode za pouzdano određivanje tvari u koncentracijama i iznad i ispod granice njenog sadržaja utvrđene specifikacijom, nije potrebno odrediti stvarnu granicu detekcije za takvu metodu. .
GRANICA KVANTIFIKACIJE
Granica kvantifikacije je najmanja količina (koncentracija) supstance u uzorku koja se može kvantificirati pomoću validirane metode sa potrebnom preciznošću i unutar laboratorijske (srednje) preciznosti.
Granica kvantifikacije je neophodna karakteristika validacije metoda koje se koriste za procjenu malih količina (koncentracija) supstanci u uzorku i, posebno, za procjenu sadržaja nečistoća.
Ovisno o vrsti tehnike, za pronalaženje granice kvantitacije koriste se sljedeće metode.
3.1 Za metode sa vizuelnom procjenom rezultata analize
Testirajte uzorke različitim poznatim količinama (koncentracijama) analita i postavite minimalnu vrijednost pri kojoj se rezultat analize može dobiti vizualno sa potrebnom preciznošću i unutarlaboratorijskom (srednje) preciznošću.
3.2 Za metode sa instrumentalnom procjenom rezultata analize
3.2.1 Odnosom signal-šum
Postavite minimalnu koncentraciju analita u uzorku pri kojoj je odnos analitičkog signala i nivoa buke oko 10:1.
3.2.2 Na osnovu standardne devijacije signala i nagiba kalibracionog grafikona
Granica kvantitacije (LOQ) se izračunava pomoću jednadžbe:
PKO = 10 · S/b,
Gdje S– standardna devijacija analitičkog signala;
b– koeficijent osjetljivosti, koji je odnos analitičkog signala prema utvrđenoj vrijednosti.
U prisustvu eksperimentalnih podataka u širokom rasponu izmjerenih veličina S I b može se procijeniti metodom najmanjih kvadrata.
Za linearnu kalibraciju, vrijednost S uzeto jednako standardnoj devijaciji S a slobodni član jednačine ovog grafa. Dobivena vrijednost granice kvantifikacije, ako je potrebno, može se potvrditi direktnim eksperimentom na količinama (koncentracijama) tvari koja se utvrđuje koje su blizu pronađene vrijednosti granice kvantifikacije.
Ako postoje podaci o sposobnosti tehnike da pouzdano odredi analit u koncentracijama iznad i ispod norme njegovog sadržaja utvrđene u specifikaciji, određivanje stvarne vrijednosti granice kvantifikacije za takvu tehniku, po pravilu, nije moguće. potrebno.
ANALITIČKO PODRUČJE METODOLOGIJE
Analitičko područje tehnike je interval između gornje i donje vrijednosti analitičkih karakteristika komponente koja se utvrđuje u objektu analize (njena količina, koncentracija, aktivnost itd.). U okviru ovog opsega, rezultati dobijeni metodom koja se validira moraju imati prihvatljiv nivo tačnosti i unutar laboratorijske (srednje) preciznosti.
Na veličinu analitičkog područja metoda primjenjuju se sljedeći zahtjevi:
– metode kvantitativnog određivanja moraju biti primjenjive u rasponu od 80 do 120% nominalne vrijednosti analitičke karakteristike koja se utvrđuje;
– metode za procjenu ujednačenosti doze treba da budu primjenjive u rasponu od 70 do 130% nominalne doze;
– metode kvantitacije koje se koriste u testu rastvaranja trebale bi općenito biti primjenjive u rasponu od 50 do 120% očekivane koncentracije aktivne tvari u mediju za otapanje;
– metode ispitivanja čistoće moraju biti primjenjive u rasponu od “Granice kvantitacije” ili “Granice detekcije” do 120% dozvoljenog sadržaja nečistoće koja se utvrđuje.
Analitički opseg tehnike može se utvrditi iz raspona eksperimentalnih podataka koji zadovoljavaju linearni model.
LINEARNOST
Linearnost tehnike je prisustvo linearne zavisnosti analitičkog signala o koncentraciji ili količini analita u analiziranom uzorku unutar analitičkog opsega tehnike.
Prilikom validacije metode, njena linearnost u analitičkom domenu se eksperimentalno provjerava mjerenjem analitičkih signala za najmanje 5 uzoraka s različitim količinama ili koncentracijama analita. Eksperimentalni podaci se obrađuju metodom najmanjih kvadrata koristeći linearni model:
y = b · x + a,
X- količinu ili koncentraciju analita;
y– veličina odziva;
b– ugaoni koeficijent;
a- slobodni termin (OFS "Statistička obrada rezultata hemijskog eksperimenta").
Vrijednosti se moraju izračunati i prezentirati. b, a i koeficijent korelacije r. U većini slučajeva koriste se linearne zavisnosti koje ispunjavaju uslov 0,99, a tek kada se analiziraju količine tragova uzimaju se u obzir linearne zavisnosti za koje je 0,9.
U nekim slučajevima, mogućnost linearne aproksimacije eksperimentalnih podataka pruža se tek nakon njihove matematičke transformacije (na primjer, uzimanjem logaritama).
Za neke analitičke metode, koje se u principu ne mogu zasnivati na linearnom odnosu između eksperimentalnih podataka, koncentracija ili količina supstance se određuje korišćenjem nelinearnih kalibracionih grafikona. U ovom slučaju, ovisnost analitičkog signala o količini ili koncentraciji analita može se aproksimirati odgovarajućom nelinearnom funkcijom korištenjem metode najmanjih kvadrata, što je izvodljivo uz odgovarajući validirani softver.
PRAVO
Ispravnost tehnike karakterizira odstupanje prosječnog rezultata određivanja napravljenih pomoću nje od vrijednosti prihvaćene kao istinite.
Potvrđena metoda se smatra ispravnom ako vrijednosti prihvaćene kao istinite leže unutar intervala povjerenja odgovarajućih prosječnih rezultata ispitivanja dobijenih eksperimentalno korištenjem ove metode.
Za procjenu ispravnosti metoda kvantitacije primjenjuju se sljedeći pristupi:
a) analizu pomoću validirane metodologije standardnih uzoraka ili modelnih mješavina sa poznatim sadržajem (koncentracijom) supstance koja se utvrđuje;
b) poređenje rezultata dobijenih primenom validirane metode i referentne metode, čija je ispravnost prethodno utvrđena;
c) razmatranje rezultata proučavanja linearnosti validirane metode: ako slobodni član u jednačini datoj u Odjeljku 5 nije statistički značajno različit od nule, tada korištenje takve metode daje rezultate bez sistematske greške.
Za pristupe “a” i “b” moguće je dobijene podatke prikazati u obliku jednačine linearne zavisnosti (regresije) između eksperimentalno pronađenih i pravih vrijednosti. Za ovu jednačinu testiraju se hipoteze o jednakosti tangente ugla nagiba na jedinicu b i o jednakosti slobodnog člana na nulu a. Po pravilu, ako se ove hipoteze prepoznaju kao istinite sa stepenom pouzdanosti jednakim 0,05, onda upotreba validirane metodologije daje tačne, odnosno bez sistematske greške, rezultate.
PRECIZNOST
Preciznost tehnike karakteriše disperzija rezultata dobijenih njenom upotrebom u odnosu na vrednost prosečnog rezultata. Mjera takvog raspršenja je vrijednost standardne devijacije rezultata pojedinačnog određivanja, dobivenog za uzorak dovoljno velike veličine.
Preciznost se ocjenjuje za bilo koju metodu kvantitativnog određivanja na osnovu rezultata najmanje tri određivanja za svaki od tri nivoa utvrđenih vrijednosti (donji, srednji i gornji) koji se nalaze u analitičkom opsegu metode. Ponovljivost se takođe može proceniti za bilo koju proceduru kvantifikacije na osnovu rezultata najmanje šest određivanja za uzorke sa sadržajem analita blizu nominalnog. U mnogim slučajevima, preciznost se može procijeniti na osnovu rezultata obrade eksperimentalnih podataka metodom najmanjih kvadrata, kao što je navedeno u Monografiji Opće farmakopeje „Statistička obrada rezultata hemijskih eksperimenata“.
Preciznost treba proučavati na homogenim uzorcima i može se procijeniti na tri načina:
– kao ponovljivost (konvergencija);
– kao unutarlaboratorijska (srednja) preciznost;
– kao međulaboratorijska preciznost (ponovljivost).
Rezultate procene analitičke tehnike za svaku od opcija preciznosti obično karakteriše odgovarajuća vrednost standardne devijacije rezultata posebnog određivanja.
Obično se prilikom razvoja originalne metode utvrđuje ponovljivost (konvergencija) rezultata dobivenih upotrebom nje. Ukoliko je potrebno razvijenu metodu uvrstiti u regulatornu dokumentaciju, dodatno se utvrđuje njena unutarlaboratorijska (srednja) preciznost. Međulaboratorijska preciznost (reproducibilnost) metode se ocjenjuje nakon njenog namjeravanog uključivanja u nacrt opće farmakopejske monografije, farmakopejske monografije ili u regulatornu dokumentaciju za farmakopejske referentne materijale.
7.1 Ponovljivost (konvergencija)
Ponovljivost analitičke tehnike se ocjenjuje nezavisnim rezultatima dobijenim pod istim propisanim uslovima u istoj laboratoriji (isti izvođač, ista oprema, isti set reagensa) u kratkom vremenskom periodu.
7.2 Intralaboratorijska (srednja) preciznost
Unutarlaboratorijska (srednja) preciznost validirane metode ocjenjuje se u uslovima rada jedne laboratorije (različiti dani, različiti izvođači, različita oprema itd.).
7.3 Međulaboratorijska preciznost (ponovljivost)
Međulaboratorijska preciznost (ponovljivost) validirane metode se ocjenjuje kada se ispitivanje provodi u različitim laboratorijama.
ODRŽIVOST
Stabilnost validirane metode je sposobnost održavanja utvrđenih karakteristika za nju pod optimalnim (nominalnim) uslovima, datim u tabeli, sa verovatnim malim odstupanjima od ovih uslova analize.
Robusnost postupka ne treba određivati u odnosu na lako kontrolirane analitičke uvjete. Ovo dramatično smanjuje potrebu za posvećenim studijama održivosti.
Stabilnost treba proučavati samo kada se postupak koji se validira zasniva na upotrebi posebno osjetljivih analitičkih metoda, kao što su različite vrste hromatografije i funkcionalne analize. Po potrebi se stabilnost metodologije procjenjuje u fazi njenog razvoja. Ako je stabilnost metode vjerovatno niska, njena prikladnost se mora provjeriti direktno tokom praktične upotrebe.
Testiranje podobnosti analitičkog sistema
Validacija podobnosti analitičkog sistema je provjera ispunjenosti osnovnih zahtjeva za njega. Sistem čija se prikladnost ispituje je zbirka specifičnih instrumenata, reagensa, standarda i uzoraka koji se analiziraju. Zahtjevi za takav sistem obično su navedeni u opštoj farmakopejskoj monografiji za odgovarajuću analitičku metodu. Dakle, testiranje podobnosti analitičkog sistema postaje procedura uključena u proceduru koja se validira.
Prezentacija rezultata validacije
Protokol validacije analitičke procedure treba da sadrži:
– njegov potpuni opis, dovoljan za reprodukciju i koji odražava sve uslove potrebne za obavljanje analize;
– karakteristike koje se procjenjuju;
– svi primarni rezultati koji su uključeni u statističku obradu podataka;
– rezultate statističke obrade podataka dobijenih eksperimentalno tokom razvoja ili testiranja validirane metode;
– ilustrativni materijali, kao što su kopije hromatograma dobijenih tečnom hromatografijom visokih performansi ili gasnom hromatografijom; elektroferogrami, elektronski i infracrveni spektri; fotografije ili crteži kromatograma dobivenih metodama tankoslojne ili papirne hromatografije; crteži titracionih krivulja, kalibracioni grafikoni;
– zaključak o podobnosti validirane metode za uključivanje u regulatorni dokument.
Preporučljivo je dokumentirati materijale za validaciju za pojedinačne analitičke metode u obliku kombinovanog izvještaja o validaciji.
Svaki instrumentalni metod karakteriše određeni nivo buke povezan sa specifičnostima mernog procesa. Stoga uvijek postoji granica sadržaja ispod koje se supstanca uopće ne može pouzdano otkriti.
Granica detekcije C min , P – najniži sadržaj pri kojem ova metoda može otkriti prisustvo komponente sa datom vjerovatnoćom pouzdanosti.
Granica detekcije se može postaviti i minimalnim analitičkim signalom y min, koji se pouzdano može razlikovati od signala kontrolnog eksperimenta - y pozadine.
Statističke metode koje koriste Čebiševljevu nejednakost dokazale su da se granica detekcije može kvantitativno odrediti pomoću izraza
Gdje je s background standardna devijacija pozadinskog analitičkog signala; S - koeficijent osjetljivosti (ponekad nazvan jednostavno "osjetljivost"), karakterizira odgovor analitičkog signala na sadržaj komponente. Koeficijent osjetljivosti je vrijednost prvog izvoda kalibracijske funkcije za dato određivanje koncentracije. Za pravolinijske kalibracijske grafikone, ovo je tangenta ugla nagiba:
(pažnja: nemojte zbuniti faktor osetljivostiS sa standardna devijacijas!)
Postoje i drugi načini za izračunavanje granice detekcije, ali ova jednačina se najčešće koristi.
U kvantitativnoj hemijskoj analizi obično se daje raspon određenih sadržaja ili koncentracija. To znači raspon vrijednosti utvrđenih sadržaja (koncentracija) predviđen ovom tehnikom i ograničen donjom i gornjom granicom utvrđenih koncentracija.
Analitiku češće zanima donja granica utvrđenih koncentracija With n ili sadržaj m n komponenta određena ovom metodom. Preko donje granice utvrđenih sadržaja obično uzimaju minimalnu količinu ili koncentraciju koja se može odrediti s relativnom standardnom devijacijom
. .
Primjer
Masena koncentracija gvožđa u rastvoru određena je spektrofotometrijskom metodom, merenjem optičke gustine rastvora obojenih kao rezultat interakcije jona Fe 3+ sa sulfosalicilnom kiselinom. Za konstruiranje kalibracijske ovisnosti mjerene su optičke gustoće otopina s povećanjem (specificiranih) koncentracija željeza tretiranih sulfosalicilnom kiselinom.
Optičke gustine referentnog rastvora (kontrolni eksperiment za reagense, tj. bez dodatka gvožđa, (pozadina) bile su 0,002; 0,000; 0,008; 0,006; 0,003.
Izračunati granica detekcije gvožđa.
Rješenje
1) Kao rezultat proračuna metodom najmanjih kvadrata (vidi primjer za testni zadatak br. 5), dobijene su vrijednosti za konstruisanje kalibracionog grafikona.
Izračunate vrijednosti za pravljenje kalibracionog grafikona
2) Izračunavamo koeficijent osjetljivosti, odnosno kutni koeficijent kalibracijske zavisnosti (S) prema podacima iz tabele.
3) Izračunajte standardna devijacija pozadinskog signala, šta je 0,0032 jedinice optičke gustine.
4) Granica detekcije će biti, mg/cm 3
Testni zadatak br. 6
Odredite granicu detekcije željeza u vodi.
Početni podaci : vrijednosti optičke gustoće pozadine (referentnog rješenja) pri konstruisanju kalibracionog grafikona za određivanje željeza bile su 0,003; 0,001; 0,007; 0,005; 0,006; 0,003; 0,001; 0,005. Vrijednosti optičkih gustoća koje odgovaraju koncentracijama željeza u otopini prikazane su u tabeli kontrolnog zadatka br. 5.
Izračunati granicu detekcije gvožđa u mg/cm 3 koristeći koeficijente osetljivosti S izračunate na osnovu dobijenih podataka da bi se konstruisao kalibracioni grafikon metodom najmanjih kvadrata pri izvođenju kontrolnog zadatka br. 5;
Granica kvantifikacije
„...Granica kvantifikacije (LOQ) (u analitičkim definicijama): najniža koncentracija ili analit u uzorku analita koji se može kvantificirati s prihvatljivim nivoom preciznosti i tačnosti, kao što je pokazano laboratorijskim zajedničkim testiranjem ili provjerom druge odgovarajuće metode. .."
Izvor:
"PREHRAMBENI PROIZVODI. METODE ANALIZE ZA DETEKCIJU GENETSKI MODIFIKOVANIH ORGANIZAMA I PROIZVODA DOBIJENIH OD NJIH. OPŠTI ZAHTJEVI I DEFINICIJE. GOST R 53214-2008 (ISO 24066)":
(odobreno naredbom Rostekhregulirovaniya od 25. decembra 2008. N 708-st)
Zvanična terminologija. Akademik.ru. 2012.
Pogledajte šta je “Limit of Quantification” u drugim rječnicima:
granica kvantifikacije- 3.7 granica kvantifikacije (LOQ): desetostruko povećanje standardne devijacije mase uzorka. Napomena LOQ vrijednost se koristi kao granična vrijednost, iznad koje masa ... ...
granica ponovljivosti- 3.7 granica ponovljivosti: Apsolutna razlika između rezultata maksimalne i minimalne vrijednosti iz navedenog broja mjerenja izvršenih pod uvjetima ponovljivosti prema GOST R ISO 5725 1. Izvor ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
granica reproduktivnosti- 2.9 granica reproducibilnosti: Vrijednost ispod koje se, s vjerovatnoćom od 95%, nalazi apsolutna vrijednost razlike između dva rezultata testa dobijenih pod uslovima ponovljivosti. Izvor… Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
granica ponovljivosti (konvergencija)- 3.11 granica ponovljivosti: Vrijednost koja, s vjerovatnoćom pouzdanosti od 95%, nije premašena apsolutnom vrijednošću razlike između rezultata dva mjerenja (ili testa) dobijenih u uvjetima ponovljivosti... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
Intralaboratorijska granica preciznosti- 3.11 Granica unutarlaboratorijske preciznosti: Apsolutna neusklađenost dozvoljena za prihvaćenu vjerovatnoću P između dva analitička rezultata dobijena pod uslovima unutarlaboratorijske preciznosti. Izvor… Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
granica reproduktivnosti R- 2.19.2 granica reproducibilnosti R: Apsolutna vrijednost razlike između dva rezultata testa pod uslovima ponovljivosti (vidjeti 2.19.1) sa nivoom pouzdanosti od 95%. 2.19.1, 2.19.2 (Promijenjeno izdanje, naslov= Promjena br. 1, IUS 12 2002).… … Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
MI 2881-2004: Preporuka. GSI. Metode kvantitativne hemijske analize. Procedure za provjeru prihvatljivosti analitičkih rezultata- Terminologija MI 2881 2004: Preporuka. GSI. Metode kvantitativne hemijske analize. Postupci za provjeru prihvatljivosti rezultata analize: 3.17 kritična razlika: Apsolutna razlika je dozvoljena za prihvaćenu vjerovatnoću od 95% između ... ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
GOST R 50779.11-2000: Statističke metode. Statističko upravljanje kvalitetom. Termini i definicije- Terminologija GOST R 50779.11 2000: Statističke metode. Statističko upravljanje kvalitetom. Pojmovi i definicije originalnog dokumenta: 3.4.3 (gornje i donje) kontrolne granice Granica na kontrolnoj karti, iznad koje je gornja granica, ... ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
GOST R 50779.10-2000: Statističke metode. Vjerovatnoća i osnovna statistika. Termini i definicije- Terminologija GOST R 50779.10 2000: Statističke metode. Vjerovatnoća i osnovna statistika. Termini i definicije originalni dokument: 2.3. (opća) populacija Skup svih razmatranih jedinica. Napomena Za slučajnu varijablu ... ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
RMG 61-2003: Državni sistem za osiguranje ujednačenosti mjerenja. Pokazatelji tačnosti, ispravnosti, preciznosti metoda kvantitativne hemijske analize. Metode ocjenjivanja- Terminologija RMG 61 2003: Državni sistem za osiguranje ujednačenosti mjerenja. Pokazatelji tačnosti, ispravnosti, preciznosti metoda kvantitativne hemijske analize. Metode ocjenjivanja: 3.12 unutarlaboratorijska preciznost: Preciznost ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije
COLLEGE
RJEŠENJE
U skladu sa članom 30. Ugovora o Evroazijskoj ekonomskoj uniji od 29. maja 2014. godine i stavom 2. člana 3. Sporazuma o zajedničkim principima i pravilima za promet lekova u okviru Evroazijske ekonomske unije od 23. decembra 2014. godine. , Odbor Evroazijske ekonomske komisije
odlučio:
1. Odobreti priložene Smjernice za validaciju analitičkih metoda za ispitivanje lijekova.
2. Ova Odluka stupa na snagu 6 mjeseci od dana zvaničnog objavljivanja.
Predsjednik odbora
Evroazijska ekonomska komisija
T. Sargsyan
Vodič za validaciju analitičkih metoda za testiranje na droge
ODOBRENO
Odlukom Upravnog odbora
Evroazijska ekonomska komisija
od 17. jula 2018. godine N 113
I. Opće odredbe
1. Ovaj Vodič definiše pravila za validaciju analitičkih metoda za ispitivanje medicinskih proizvoda, kao i spisak karakteristika koje treba procijeniti tokom validacije ovih metoda i uključiti u registracione dosijee koji se dostavljaju nadležnim tijelima država članica Evroazijska ekonomska unija (u daljem tekstu države članice). Unija).
2. Svrha validacije analitičkog postupka za ispitivanje medicinskih proizvoda je dokumentovana potvrda njegove podobnosti za predviđenu svrhu.
II. Definicije
3. Za potrebe ovog Vodiča koriste se koncepti koji znače sljedeće:
"analitički postupak" - metodologija za ispitivanje medicinskih proizvoda, koja uključuje detaljan opis redoslijeda radnji potrebnih za obavljanje analitičkog ispitivanja (uključujući opis pripreme uzoraka za ispitivanje, standardnih uzoraka, reagensa, upotrebe opreme, konstrukcije kalibraciona kriva, korišćene formule za proračun, itd.);
„ponovljivost” je svojstvo koje karakteriše preciznost u međulaboratorijskim testovima;
“opseg primjene (analitičko područje)” (opseg) – interval između najveće i najniže koncentracije (količine) analita u uzorku (uključujući ove koncentracije), za koji se pokazuje da analitički postupak ima prihvatljiv nivo preciznosti , tačnost i linearnost;
“linearnost” je direktno proporcionalna ovisnost analitičkog signala o koncentraciji (količini) analita u uzorku unutar područja primjene (analitičko područje) tehnike;
“oporavak” (oporavak) - odnos između dobijenog prosjeka i pravih (referentnih) vrijednosti, uzimajući u obzir odgovarajuće intervale povjerenja;
"ponovljivost (intra-assay preciznost)" - preciznost metode kada se ponovljeni testovi izvode pod istim radnim uslovima (na primjer, od strane istog analitičara ili grupe analitičara, na istoj opremi, s istim istim reagensima, itd.) za kratak vremenski period;
“ispravnost” (tačnost, istinitost) - bliskost između prihvaćene prave (referentne) vrijednosti i rezultirajuće vrijednosti, koja se izražava vrijednošću otvaranja;
“granica kvantitacije” - najmanja količina supstance u uzorku koja se može kvantifikovati sa odgovarajućom preciznošću i tačnošću;
"granica detekcije" - najmanja količina analita u uzorku koja se može detektovati, ali ne mora nužno i precizno kvantificirati;
„preciznost” (preciznost) - izraz bliskosti (stepena raspršenosti) rezultata (vrednosti) između niza merenja sprovedenih na više uzoraka uzetih iz istog homogenog uzorka, pod uslovima propisanim metodom;
„srednja (intralaboratorijska) preciznost“ (srednja preciznost) – uticaj varijacija unutar laboratorije (različiti dani, različiti analitičari, različita oprema, različite serije (lotovi) reagensa, itd.) na rezultate ispitivanja identičnih uzoraka uzetih iz laboratorije. ista serija;
“specifičnost” - sposobnost analitičke tehnike da nedvosmisleno proceni supstancu koja se utvrđuje, bez obzira na druge supstance (nečistoće, produkti razgradnje, ekscipijenti, matriks (medij) itd.) prisutnih u uzorku za ispitivanje;
„robustnost“ je sposobnost analitičke tehnike da bude otporna na uticaj malih specificiranih promena u uslovima ispitivanja, što ukazuje na njenu pouzdanost pri normalnoj (standardnoj) upotrebi.
III. Vrste analitičkih metoda koje treba validirati
4. Ovaj vodič razmatra pristupe validaciji 4 najčešće vrste analitičkih metoda:
a) testovi identifikacije (autentičnost);
b) ispitivanja za određivanje kvantitativnog sadržaja nečistoća (kvantitativna ispitivanja sadržaja nečistoća);
c) ispitivanja za određivanje maksimalnog sadržaja nečistoća u uzorku (granični testovi za kontrolne nečistoće);
d) kvantitativni testovi (za sadržaj ili aktivnost) za određivanje aktivnog dijela molekula aktivne tvari u uzorku za ispitivanje.
5. Sve analitičke metode koje se koriste za kontrolu kvaliteta medicinskih proizvoda moraju biti validirane. Ovaj Vodič ne pokriva validaciju analitičkih metoda za tipove testova koji nisu obuhvaćeni stavom 4 ovih Smjernica (na primjer, testovi rastvaranja ili određivanje veličine čestica (disperznosti) farmaceutske supstance, itd.).
6. Testovi identifikacije (autentičnosti) obično se sastoje od poređenja svojstava (na primjer, spektralne karakteristike, hromatografsko ponašanje, hemijska aktivnost, itd.) testnog uzorka i standardnog uzorka.
7. Ispitivanja za određivanje kvantitativnog sadržaja nečistoća i ispitivanja za određivanje graničnog sadržaja nečistoća u uzorku imaju za cilj da se ispravno opiše čistoća uzorka. Zahtjevi za validaciju metoda za kvantitativno određivanje nečistoća razlikuju se od zahtjeva za validaciju metoda za određivanje graničnog sadržaja nečistoća u uzorku.
8. Kvantitativne metode ispitivanja imaju za cilj mjerenje sadržaja analita u uzorku za ispitivanje. U ovim Smjernicama, kvantitacija se odnosi na kvantitativno mjerenje glavnih komponenti farmaceutske supstance. Slični parametri validacije važe za kvantitativno određivanje aktivne supstance ili drugih komponenti leka. Parametri validacije kvantifikacije mogu se koristiti u drugim analitičkim postupcima (npr. ispitivanje rastvaranja).
Svrha analitičkih postupaka mora biti jasno definisana, jer to određuje izbor validacijskih karakteristika koje se moraju procijeniti tokom validacije.
9. Sljedeće tipične karakteristike validacije analitičkog postupka podliježu procjeni:
a) ispravnost (tačnost (istinitost));
b) preciznost:
ponovljivost;
srednja (intralaboratorijska) preciznost (srednja preciznost);
c) specifičnost;
d) granica detekcije;
e) kvantitativno ograničenje;
f) linearnost;
g) područje primjene (analitičko područje).
10. Najvažnije karakteristike validacije za validaciju različitih tipova analitičkih metoda date su u tabeli.
Table. Validacijske karakteristike za validaciju različitih tipova analitičkih metoda
Validacija | Vrsta analitičkog postupka |
||||
karakteristika | testovi za | ispitivanja nečistoća | kvantitativni testovi |
||
(autentičnost) | kvantitativno | ograničiti sadržaj | rastvaranje (samo mjerenje), sadržaj (aktivnost) |
||
U redu | |||||
Preciznost | |||||
ponovljivost | |||||
srednja preciznost | |||||
Specifičnost** | |||||
Granica detekcije | |||||
Granica kvantifikacije | |||||
Linearnost | |||||
Opseg primjene | |||||
________________
*Ako je ponovljivost određena, određivanje srednje preciznosti nije potrebno.
** Nedostatak specifičnosti jedne analitičke tehnike može se nadoknaditi upotrebom jedne ili više dodatnih analitičkih tehnika.
*** Može biti potrebno u nekim slučajevima (na primjer, kada su granica detekcije i normalizirana granica za sadržaj nečistoće koja se utvrđuje blizu).
Bilješka. "-" - karakteristika se ne vrednuje, "+" - karakteristika se vrednuje.
Navedenu listu treba smatrati standardnom prilikom validacije analitičkih metoda. Mogu postojati izuzeci koji zahtijevaju posebno opravdanje od strane proizvođača lijeka. Takva karakteristika analitičke tehnike kao što je stabilnost (robustnost) nije prikazana u tabeli, ali je treba razmotriti u odgovarajućoj fazi razvoja analitičke tehnike.
Ponovna validacija (ponovljenje) može biti potrebna u sljedećim slučajevima (ali ne ograničavajući se na):
promjena sheme sinteze farmaceutske supstance;
promjena u sastavu lijeka;
promjena analitičke metodologije.
Ponovna validacija se ne provodi ako proizvođač pruži odgovarajuće opravdanje. Obim produženja važenja ovisi o prirodi izvršenih promjena.
IV. Metodologija validacije analitičkih metoda
1. Opšti zahtjevi za metodologiju validacije analitičkih metoda
11. Ovaj odjeljak opisuje karakteristike koje se razmatraju u validaciji analitičkih metoda i daje neke pristupe i preporuke za uspostavljanje različitih karakteristika validacije svake analitičke metode.
12. U nekim slučajevima (na primjer, prilikom dokazivanja specifičnosti), može se koristiti kombinacija nekoliko analitičkih tehnika kako bi se osigurala kvaliteta farmaceutske supstance ili lijeka.
13. Treba prikazati i analizirati sve relevantne podatke prikupljene tokom validacije i formule koje se koriste za izračunavanje karakteristika validacije.
14. Dozvoljeno je koristiti pristupe koji nisu navedeni u ovim Smjernicama. Izbor procedure i protokola validacije je odgovornost podnosioca. U ovom slučaju, glavni cilj validacije analitičke metode je potvrda prikladnosti metode za namjeravanu svrhu. Zbog svoje složenosti, pristupi analitičkim metodama za biološke i biotehnološke proizvode mogu se razlikovati od onih opisanih u ovom Vodiču.
15. Tokom studije validacije treba koristiti referentne materijale sa poznatim, dokumentovanim karakteristikama. Potreban stepen čistoće standardnih uzoraka zavisi od namjene.
16. Različite karakteristike validacije razmatraju se u posebnim pododjeljcima ovog odjeljka. Struktura ovog odjeljka odražava napredak razvoja analitičke metodologije i procesa evaluacije.
17. Eksperimentalni rad treba osmisliti tako da se relevantne karakteristike validacije proučavaju istovremeno, dobijajući pouzdane podatke o mogućnostima analitičkog postupka (npr. specifičnost, linearnost, opseg primjene, tačnost i preciznost).
2. Specifičnost
18. Studije specifičnosti treba izvršiti tokom validacije testova identifikacije, nečistoće i kvantitacije. Procedure za potvrđivanje specifičnosti zavise od namjene analitičkog postupka.
19. Metoda potvrđivanja specifičnosti zavisi od zadataka za koje se analitička tehnika namjerava riješiti. Nije uvijek moguće potvrditi da je analitički postupak specifičan za dati analit (potpuna selektivnost). U ovom slučaju preporučuje se korištenje kombinacije 2 ili više analitičkih tehnika.
Nedostatak specifičnosti jedne analitičke tehnike može se nadoknaditi upotrebom jedne ili više dodatnih analitičkih tehnika.
20. Specifičnost za različite vrste testova znači sljedeće:
a) prilikom ispitivanja za identifikaciju - potvrda da metoda omogućava identifikaciju supstance koja se utvrđuje;
b) prilikom ispitivanja na nečistoće, potvrda da postupak može ispravno identificirati nečistoće u uzorku (na primjer, ispitivanje srodnih jedinjenja, teških metala, zaostalog sadržaja rastvarača, itd.);
c) u kvantitativnim ispitivanjima - potvrda da metoda omogućava određivanje sadržaja ili aktivnosti supstance koja se utvrđuje u uzorku.
Identifikacija
21. Zadovoljavajući identifikacioni test mora biti u stanju da razlikuje strukturno blisko povezana jedinjenja koja mogu biti prisutna u uzorku. Selektivnost analitičkog postupka može se demonstrirati dobijanjem pozitivnih rezultata (možda poređenjem sa poznatim referentnim standardom) za uzorke koji sadrže analit i negativnih rezultata za uzorke koji ga ne sadrže.
22. Da bi se potvrdilo odsustvo lažno pozitivnih rezultata, može se izvršiti test identifikacije za supstance slične strukture ili supstance povezane sa analitom.
23. Izbor potencijalno interferirajućih supstanci treba biti opravdan.
Kvantifikacija i ispitivanje na nečistoće
24. Prilikom potvrđivanja specifičnosti za analitičku proceduru upotrebom metode hromatografskog odvajanja, reprezentativni hromatogrami treba da budu obezbeđeni sa odgovarajućom identifikacijom pojedinačnih komponenti. Slične pristupe treba koristiti za druge tehnike zasnovane na separaciji.
25. Kritična odvajanja u hromatografiji treba proučavati na odgovarajućem nivou. U slučaju kritičnog odvajanja, treba postaviti rezolucionu vrijednost 2 komponente koje se najbliže eluiraju.
26. Kada se koristi metoda nespecifične kvantifikacije, treba koristiti dodatne analitičke metode i potvrditi specifičnost cjelokupnog skupa metoda. Na primjer, ako se kvantitativno određivanje vrši titrimetrijskom metodom tokom oslobađanja farmaceutske supstance, može se dopuniti odgovarajućim testom na nečistoće.
27. Pristup je sličan i za kvantifikaciju i za ispitivanje nečistoća.
Dostupnost uzoraka nečistoća
28. U prisustvu uzoraka nečistoća, utvrđivanje specifičnosti analitičkog postupka je kako slijedi:
a) prilikom kvantitativnog određivanja potrebno je potvrditi selektivnost određivanja supstance u prisustvu nečistoća i (ili) drugih komponenti uzorka. U praksi se to radi dodavanjem nečistoća i (ili) ekscipijenata u odgovarajućoj količini u uzorak (farmaceutska supstanca ili lek) i ako postoji dokaz da ne utiču na rezultat kvantitativnog određivanja aktivne supstance;
b) kod ispitivanja nečistoća, specifičnost se može utvrditi dodavanjem nečistoća u farmaceutsku supstancu ili proizvodu lijeka u određenim količinama i pružanjem dokaza o odvajanju ovih nečistoća jedne od drugih i (ili) od drugih komponenti uzorka.
Nema uzoraka nečistoća
29. Ako standardni uzorci nečistoća ili proizvoda razgradnje nisu dostupni, specifičnost se može potvrditi poređenjem rezultata ispitivanja uzoraka koji sadrže nečistoće ili produkte razgradnje s rezultatima drugog validiranog postupka (na primjer, farmakopeja ili drugog validiranog analitičkog (nezavisnog)) procedura). Tamo gdje je prikladno, referentni standardi za nečistoće trebaju uključivati uzorke koji su podvrgnuti skladištenju pod određenim stresnim uvjetima (svjetlo, toplina, vlažnost, kisela (bazna) hidroliza i oksidacija).
30. U slučaju kvantitativnog određivanja, 2 rezultata se moraju uporediti.
31. U slučaju ispitivanja nečistoća, treba uporediti profile nečistoća.
32. Da bi se dokazalo da je vrh analita određen samo jednom komponentom, preporučljivo je provesti studije o čistoći pikova (na primjer, korištenje detekcije niza dioda, masena spektrometrija).
3. Linearnost
33. Linearni odnos se mora procijeniti u cijelom opsegu primjene analitičke tehnike. Može se potvrditi direktno na farmaceutskoj supstanci (razrjeđivanjem glavne standardne otopine) i (ili) na pojedinačnim uzorcima umjetnih (modelnih) mješavina komponenti lijeka primjenom predložene metode. Potonji aspekt se može proučavati tokom određivanja opsega primjene (analitičke oblasti) tehnike.
34. Linearnost se procjenjuje vizuelno crtanjem analitičkog signala kao funkcije koncentracije ili količine analita. Ako postoji jasan linearni odnos, dobijeni rezultati se moraju obraditi odgovarajućim statističkim metodama (na primjer, izračunavanjem regresijske linije korištenjem metode najmanjih kvadrata). Da bi se postigla linearnost između rezultata analize i koncentracija uzorka, mogu biti potrebne matematičke transformacije rezultata testa prije regresione analize. Rezultati analize regresionih linija mogu se koristiti za matematičku procjenu stepena linearnosti.
35. U nedostatku linearnosti, podatke testa treba podvrgnuti matematičkoj transformaciji prije izvođenja regresione analize.
36. Da bi se potvrdila linearnost, potrebno je odrediti i prikazati koeficijent korelacije ili koeficijent determinacije, član presjeka linearne regresije, nagib linije regresije i rezidualni zbir kvadrata odstupanja, kao i grafikon sa svim eksperimentalnim podacima. .
37. Ako linearnost nije uočena pri bilo kojoj vrsti matematičke transformacije (na primjer, tokom validacije imunoanalitičkih metoda), analitički signal mora biti opisan korištenjem odgovarajuće funkcije koncentracije (količine) analita u uzorku.
V. Raspon primjene (analitičko područje)
39. Opseg primjene analitičke tehnike zavisi od njene namjene i određuje se proučavanjem linearnosti. U okviru područja primjene, postupak mora osigurati potrebnu linearnost, tačnost i preciznost.
40. Sljedeće opsege primjene (analitičke oblasti) analitičkih metoda treba smatrati minimalno prihvatljivim:
a) za kvantitativno određivanje aktivne supstance u farmaceutskoj supstanci ili leku - od koncentracije (sadržaja) od 80 odsto do koncentracije (sadržaja) od 120 odsto nazivne koncentracije (sadržaja);
b) za ujednačenost doziranja - od koncentracije (sadržaja) od 70 posto do koncentracije (sadržaja) od 130 posto, osim ako je za lijek opravdan širi raspon u zavisnosti od doznog oblika (na primjer, inhalatori za doziranje);
c) za test rastvaranja, ±20 posto (apsolutno) nazivnog opsega primjene. Na primjer, ako specifikacije za proizvod s modificiranim oslobađanjem pokrivaju raspon od 20 posto u prvom satu do 90 posto traženog sadržaja u 24 sata, potvrđeni opseg upotrebe trebao bi biti od 0 do 110 posto traženog sadržaja;
d) za određivanje nečistoća - od granice detekcije nečistoće do 120% vrednosti navedene u specifikaciji;
e) za nečistoće koje su izuzetno potentne ili imaju toksični ili neočekivani farmakološki efekat, granica detekcije i granica kvantifikacije treba da budu proporcionalne nivou na kojem se ove nečistoće kontrolišu. Da bi se validirale metode ispitivanja nečistoća koje se koriste tokom razvoja, možda će biti potrebno postaviti analitičko područje blizu očekivane (moguće) granice;
e) ako se kvantitacija i čistoća proučavaju istovremeno u istom testu i koristi se samo 100% standard, odnos bi trebao biti linearan u cijelom opsegu primjene analitičkog postupka od praga izvješćivanja za nečistoću (u skladu sa pravila za proučavanje nečistoća u lekovima i postavljanje zahteva). njima u specifikacijama koje je odobrila Evroazijska ekonomska komisija) do 120 posto sadržaja navedenog u specifikaciji za kvantitativno određivanje.
VI. U redu
41. Tačnost se mora utvrditi za čitav opseg primjene analitičkog postupka.
1. Kvantitativno određivanje aktivne farmaceutske supstance
Farmaceutska supstanca
42. Može se koristiti nekoliko metoda za procjenu ispravnosti:
primjena analitičkog postupka na analit poznate čistoće (na primjer, na standardni materijal);
poređenje analitičkih rezultata dobijenih korišćenjem validirane analitičke procedure i rezultata dobijenih korišćenjem poznate procedure i/ili nezavisnog postupka.
Zaključak o tačnosti može se donijeti nakon utvrđivanja preciznosti, linearnosti i specifičnosti.
Lijek
43. Može se koristiti nekoliko metoda za procjenu ispravnosti:
primjena analitičkih tehnika na vještačke (modelne) mješavine komponenti lijeka, kojima je dodana unaprijed poznata količina analita;
U nedostatku uzoraka svih komponenti lijeka, moguće je lijeku dodati prethodno poznatu količinu farmaceutske tvari ili uporediti rezultate dobijene drugom metodom čija je točnost poznata i (ili) nezavisna metoda.
Zaključak o tačnosti može se donijeti nakon određivanja preciznosti, linearnosti i specifičnosti.
2. Kvantitativno određivanje nečistoća
44. Tačnost se utvrđuje uzorcima (farmaceutske supstance i lijeka) kojima je dodana poznata količina nečistoća.
45. U nedostatku uzoraka prepoznatljivih nečistoća i (ili) proizvoda razgradnje, prihvatljivo je poređenje rezultata sa rezultatima dobijenim nezavisnom tehnikom. Dozvoljena je upotreba analitičkog signala aktivne supstance.
46. Treba navesti specifičnu metodu izražavanja sadržaja pojedinačnih nečistoća ili njihove sume (na primjer, kao težinski postotak ili kao postotak površine pika, ali u svim slučajevima u odnosu na glavni analit).
47. Tačnost se procjenjuje za najmanje 9 određivanja u 3 različite koncentracije koje pokrivaju cijeli raspon primjene (tj. 3 koncentracije i 3 ponavljanja za svaku koncentraciju). Definicije treba da uključuju sve faze metodologije.
48. Tačnost se izražava procentom otvaranja na osnovu rezultata kvantitativnog određivanja supstance koja je u poznatoj količini dodata u analizirani uzorak, odnosno razlikom između dobijenog prosjeka i pravih (referentnih) vrijednosti, uzimajući u obzir odgovarajući intervali pouzdanosti.
VII. Preciznost
49. Validacija testova kvantitacije i nečistoća uključuje određivanje preciznosti.
50. Preciznost se uspostavlja na 3 nivoa: ponovljivost, srednja preciznost i reproduktivnost. Preciznost treba utvrditi korištenjem homogenih, autentičnih uzoraka. Ako je nemoguće dobiti homogeni uzorak, dozvoljeno je odrediti preciznost pomoću umjetno pripremljenih (modelnih) uzoraka ili otopine uzorka. Preciznost analitičkog postupka obično se izražava u terminima varijanse, standardne devijacije ili koeficijenta varijacije serije mjerenja.
VIII. Ponovljivost
51. Ponovljivost se utvrđuje izvođenjem najmanje 9 određivanja koncentracije u opsegu primjene analitičke metode (3 koncentracije i 3 ponavljanja za svaku koncentraciju), odnosno najmanje 6 određivanja koncentracije za uzorke sa 100% sadržajem analita.
IX. Srednja (u laboratoriji) preciznost
52. Stepen do kojeg se uspostavlja srednja preciznost zavisi od uslova upotrebe analitičke tehnike. Podnosilac prijave mora utvrditi uticaj slučajnih faktora na preciznost analitičkog postupka. Tipični faktori koji se proučavaju (varijable) su različiti dani, analitičari, oprema itd. Nije potrebno posebno proučavati ove uticaje. Prilikom proučavanja uticaja različitih faktora, poželjno je koristiti eksperimentalni dizajn.
X. Reproducibilnost
53. Reproducibilnost karakteriše preciznost u međulaboratorijskom eksperimentu. Reproducibilnost treba utvrditi u slučaju standardizacije analitičkog postupka (na primjer, kada je uključen u Farmakopeju Unije ili u farmakopeje država članica). Uključivanje podataka o reproduktivnosti u registracioni dosije nije potrebno.
XI. Prezentacija podataka
54. Za svaku vrstu preciznosti potrebno je navesti standardnu devijaciju, relativnu standardnu devijaciju (koeficijent varijacije) i interval pouzdanosti.
XII. Granica detekcije
55. Mogući su različiti pristupi određivanju granice detekcije, u zavisnosti od toga da li je tehnika instrumentalna ili neinstrumentalna. Mogu se koristiti i drugi pristupi.
XIII. Vizuelna procjena
56. Vizuelna procjena se može koristiti i za neinstrumentalne i za instrumentalne tehnike. Granica detekcije se utvrđuje analizom uzoraka sa poznatim koncentracijama analita i određivanjem njegovog minimalnog sadržaja pri kojem se pouzdano detektuje.
XIV. Procjena granice detekcije na osnovu omjera signal-šum
57. Ovaj pristup je primjenjiv samo na analitičke tehnike za koje se opaža osnovni šum.
58. Određivanje odnosa signal-šum se vrši upoređivanjem signala dobijenih iz uzoraka sa poznatim niskim koncentracijama sa signalima dobijenim iz slijepih uzoraka, te utvrđivanjem minimalne koncentracije pri kojoj se analit može pouzdano detektirati. Za procjenu granice detekcije, omjer signala i šuma od 3:1 do 2:1 se smatra prihvatljivim.
XV. Procjena granice detekcije iz standardne devijacije analitičkog signala i nagiba kalibracijske krivulje
59. Granica detekcije (LOD) može se izraziti na sljedeći način:
gdje:
60. Vrijednost k se izračunava iz kalibracione krive za analit. Procjena s može se izvršiti na nekoliko načina:
b) prema kalibracionoj krivulji. Potrebno je analizirati rezultujuću kalibracionu krivu, konstruisanu za uzorke sa sadržajem analita blizu granice detekcije. Preostala standardna devijacija linije regresije ili standardna devijacija tačke preseka sa y-osom (standardna devijacija slobodnog člana linearne regresije) može se koristiti kao standardna devijacija.
XVI. Prezentacija podataka
61. Potrebno je navesti granicu detekcije i metod za njeno određivanje. Ako je određivanje granice detekcije zasnovano na vizuelnoj proceni ili proceni odnosa signal-šum, predstavljanje relevantnih hromatograma se smatra dovoljnim da to opravda.
62. Ako se vrijednost granice detekcije dobije proračunom ili ekstrapolacijom, procjena mora biti potvrđena nezavisnim ispitivanjem dovoljnog broja uzoraka sa sadržajem analita koji odgovara granici detekcije ili joj je blizu.
XVII. Granica kvantifikacije
63. Granica kvantitacije je neophodna karakteristika validacije postupaka koji se koriste za određivanje niskog sadržaja supstanci u uzorku, posebno za određivanje nečistoća i/ili proizvoda razgradnje.
64. Moguće je nekoliko pristupa određivanju granice kvantitacije, u zavisnosti od toga da li je tehnika instrumentalna ili neinstrumentalna. Mogu se koristiti i drugi pristupi.
XVIII. Vizuelna procjena
65. Vizuelna procjena se može koristiti i za neinstrumentalne i za instrumentalne tehnike.
66. Granica kvantitacije se obično utvrđuje analizom uzoraka sa poznatim koncentracijama analita i procjenom minimalne koncentracije pri kojoj se analit može kvantificirati s prihvatljivom točnošću i preciznošću.
XIX. Procjena granice kvantifikacije iz odnosa signal-šum
67. Ovaj pristup je primjenjiv samo na metode mjerenja gdje se uočava osnovni šum.
68. Određivanje omjera signal-šum se vrši upoređivanjem izmjerenih signala dobijenih iz uzoraka sa poznatim niskim koncentracijama analita sa signalima dobijenim iz slijepih uzoraka i utvrđivanjem minimalne koncentracije pri kojoj se analit može pouzdano kvantificirati . Tipičan odnos signal-šum je 10:1.
XX. Procjena granice kvantifikacije iz standardne devijacije signala i nagiba kalibracijske krive
69. Granica kvantitacije (LOQ) može se izraziti na sljedeći način:
gdje:
s je standardna devijacija analitičkog signala;
k je tangent ugla nagiba kalibracione krive.
70. Vrijednost k se izračunava iz kalibracijske krive za analit. Procjena s može se izvršiti na nekoliko načina:
a) prema standardnoj devijaciji slijepog uzorka. Mjeri se veličina analitičkog signala za dovoljan broj slijepih uzoraka i izračunava se standardna devijacija njihovih vrijednosti;
b) prema kalibracionoj krivulji. Rezultirajuću kalibracijsku krivulju, konstruiranu za uzorke sa sadržajem analita blizu granice kvantifikacije, treba analizirati. Kao standardna devijacija može se koristiti rezidualna standardna devijacija linije regresije ili standardna devijacija tačke preseka sa ordinatnom osom (standardna devijacija slobodnog člana linearne regresije).
XXI. Prezentacija podataka
71. Potrebno je navesti granicu kvantitacije i način njenog određivanja.
72. Granica kvantitacije mora se naknadno potvrditi analizom dovoljnog broja uzoraka koji sadrže analit na ili blizu granice kvantitacije.
73. Drugi pristupi koji nisu gore navedeni mogu biti prihvatljivi.
XXII. Stabilnost (robustnost)
74. Proučavanje stabilnosti (robustnosti) mora se provesti u fazi razvoja, a obim istraživanja zavisi od analitičke tehnike koja se razmatra. Pouzdanost analize potrebno je pokazati namjernim varijacijama parametara (uslova) metode.
75. Ukoliko rezultati merenja zavise od promene uslova korišćenja analitičkog postupka, potrebno je strogo kontrolisati poštovanje tih uslova ili predvideti mere predostrožnosti tokom ispitivanja.
76. Da bi se osiguralo da se validnost analitičke procedure održava tokom njene upotrebe, jedna od posljedica studija robusnosti treba da bude uspostavljanje niza parametara prikladnosti sistema (npr. test rezolucije).
77. Uobičajene varijacije parametara su:
stabilnost rješenja korištenih u analitičkim tehnikama;
vrijeme ekstrakcije.
Parametri varijacije za tečnu hromatografiju su:
promjena pH mobilne faze;
promjena u sastavu mobilne faze;
različite kolone (različite serije i dobavljači);
temperatura;
brzina mobilne faze (brzina protoka).
Parametri varijacije za plinsku hromatografiju su:
različite kolone (različite serije i dobavljači);
temperatura;
brzina gasa nosača.
XXIII. Procjena prikladnosti sistema
78. Procjena podobnosti sistema je sastavni dio mnogih analitičkih tehnika. Ovi testovi se zasnivaju na konceptu da oprema, elektronika, analitičke operacije i analizirani uzorci čine kompletan sistem i moraju se kao takvi evaluirati. Kriterijumi podobnosti sistema moraju biti uspostavljeni za određeni postupak i zavise od vrste analitičkog postupka koji se validira. Dodatne informacije mogu se dobiti u Farmakopeji Unije ili u farmakopejama država članica.
Tekst elektronskog dokumenta
pripremio Kodeks dd i verificirao prema:
službena stranica
Evroazijska ekonomska unija
www.eaeunion.org, 20.07.2018
