24.11.202227.05.2017

], megjithatë, përkufizimi i antioksidantëve si komponime kimike nuk jep një pamje të plotë të vetive mbrojtëse të objektit që studiohet: ato përcaktohen jo vetëm nga sasia e një antioksiduesi të veçantë, por edhe nga aktiviteti i secilit prej tyre. Aktiviteti antioksidant, ose aktiviteti antioksidant, AOA, është konstanta e shpejtësisë së reagimit të një antioksiduesi me një radikal të lirë (kInH). Metoda e kimilumineshencës (CL) ju lejon të përcaktoni sasinë totale të radikalëve që lidhin antioksidantët në një mostër (kapaciteti total antioksidant, TAU), dhe kur përdorni metodën e modelimit matematik të kinetikës CL, gjithashtu shkallën e formimit dhe reagimit të radikalëve. me antioksidantë, domethënë AOA [, ,].

Modifikimi më i zakonshëm i metodës së kimilumineshencës për përcaktimin e kapacitetit total antioksidues bazohet në përdorimin e luminolit si një aktivizues i kimilumineshencës [, , ,]. Një kampion vendoset në një kuvetë kimiluminometri me shtimin e luminolit, peroksidit të hidrogjenit dhe një përbërje të aftë për të formuar radikale si rezultat i dekompozimit spontan (termolizë), për shembull 2,2'-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorur (ABAP). ): ABAP → 2R. Në prani të oksigjenit molekular, radikali alkil R formon radikalin peroksil ROO: R + O 2 → ROO. Më pas, radikali i peroksilit oksidon sondën kimilumineshente luminol (LH 2) dhe formohet radikali luminol (LH): ROO + LH 2 → ROOH + LH. Nga LH, nëpërmjet formimit të substancave të ndërmjetme (hidroperoksid luminol dhe endoperoksid luminol), formohet në gjendje të ngacmuar elektronikisht një molekulë e produktit përfundimtar të oksidimit të luminolit, acidi aminoftalik, i cili lëshon një foton dhe si rezultat vërehet kimilumineshencë. . Intensiteti CL është proporcional me shpejtësinë e prodhimit të fotonit, dhe ai, nga ana tjetër, është proporcional me përqendrimin e palëvizshëm të LH në sistem. Duke ndërvepruar me radikalet, antioksidantët ndërpresin zinxhirin e përshkruar të transformimeve dhe parandalojnë formimin e një fotoni.

Komponimet e ndjeshme ndaj termolizës nuk janë burimi i vetëm i mundshëm i radikalëve kur analizohet kapaciteti antioksidues i një kampioni duke përdorur metodën e kimilumineshencës. Alternativat janë sistemet peroksidazë rrikë-peroksid hidrogjeni [, ], hemin-peroksid hidrogjeni, citokrom Me–kardiolipinë–peroksid hidrogjeni etj. Skema e reaksionit për oksidimin e luminolit nga peroksidazat është konsideruar në veprën e Cormier et al. .

Kurbat kinetike të CL për këto sisteme pasqyrojnë dy faza të reaksionit: fazën e rritjes së intensitetit të CL dhe fazën e një pllaje ose rënie graduale të luminescencës, kur intensiteti CL është konstant ose zvogëlohet ngadalë. Puna përshkruan dy qasje për matjen e kapacitetit total antioksidues që marrin parasysh këtë veçori të kthesave. Metoda TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) bazohet në matjen e periudhës latente të CL τ dhe mund të përdoren për të përcaktuar antioksidantë si Trolox ose acid askorbik: ato karakterizohen nga një konstante e shpejtësisë së lartë të reagimit me radikalet dhe për këtë arsye mund të quhen antioksidantë të fortë. Gjatë periudhës latente ndodh oksidimi i plotë i tyre. Metoda TAR (Total Antioxidant Reactivity) mat shkallën e shuarjes së kimilumineshencës q në pllajën ose maksimumin e kurbës së kimilumineshencës: formula, ku I është intensiteti i kimilumineshencës pa një antioksidant dhe I 1 është intensiteti i CL në prani të një antioksiduesi. Kjo metodë përdoret nëse sistemi përmban kryesisht antioksidantë të dobët me konstante të shkallës së ulët të ndërveprimit me radikalët - shumë më e ulët në krahasim me konstantën e luminolit.

Efekti i antioksidantëve karakterizohet jo vetëm nga treguesit τ Dhe q. Siç shihet nga punimet [,], efekti i antioksidantëve si acidi urik në sistemin hemin–H2O2–luminol ose tokoferoli, rutina dhe kuercetina në sistemin citokrom Me-kardiolipinë-H2O2-luminol, e karakterizuar nga një ndryshim në shkallën maksimale të rritjes së CL ( vmax). Siç tregojnë rezultatet e modelimit matematikor të kinetikës, vlerat e konstanteve të shpejtësisë së ndërveprimit të këtyre antioksidantëve me radikalet janë afër vlerës së konstantës së luminolit, prandaj antioksidantë të tillë mund të quhen antioksidantë me forcë mesatare.

Nëse materiali në studim, në veçanti lëndët e para bimore, përmban vetëm një lloj antioksidantësh, atëherë përmbajtja e tyre mund të karakterizohet nga një nga tre treguesit e listuar më sipër ( τ , q ose vmax). Por materialet bimore përmbajnë një përzierje antioksidantësh me fuqi të ndryshme. Për të zgjidhur këtë problem, disa autorë [ , , , ] përdorën ndryshimin në shumën e dritës së kemilumineshencës gjatë një kohe të caktuar ∆S, të llogaritur me formulën , ku ∆ S 0 dhe ∆ S S- Shumat e dritës CL për një kohë të caktuar t respektivisht në mostrat e kontrollit dhe testimit. Koha duhet të jetë e mjaftueshme për oksidimin e të gjithë antioksidantëve në sistem, domethënë që kurba CL e kampionit të provës të arrijë nivelin e kurbës CL të kampionit të kontrollit. Ky i fundit supozon se studiuesit jo vetëm që duhet të regjistrojnë shumën e dritës së shkëlqimit, por edhe të regjistrojnë kurbën e kinetikës CL për një kohë mjaft të gjatë, gjë që nuk bëhet gjithmonë.

Meqenëse të gjithë treguesit e matur varen nga pajisja dhe kushtet e matjes, efekti antioksidant i substancës në sistemin në studim zakonisht krahasohet me efektin e një antioksidanti të marrë si standard, për shembull Trolox [,].

Sistemi i peroksidazës së rrikë-peroksid hidrogjeni është përdorur për të analizuar kapacitetin total antioksidues të materialeve bimore nga shumë autorë. Në punimet [ , ] u përdor periudha latente e CL (metoda TRAP) për të vlerësuar sasinë e antioksidantëve në mostra, dhe në punimet [ , , ] - zona nën kurbën e zhvillimit të CL. Sidoqoftë, punimet e listuara nuk japin një justifikim të qartë për zgjedhjen e një ose një parametri tjetër për vlerësimin e OAU.

Qëllimi i studimit ishte të përcaktonte se si raporti i llojeve të ndryshme të antioksidantëve ndikon në TOA dhe të modifikonte metodën e kimilumineshencës në mënyrë të tillë që të mund të përcaktonte më saktë TOA në materialet bimore. Për ta bërë këtë, ne i vendosëm vetes disa detyra. Së pari, krahasoni kinetikën CL të objekteve të studiuara me kinetikën e antioksidantëve standardë të tre llojeve (të fortë, të mesëm dhe të dobët) për të kuptuar se cili lloj antioksidantësh jep kontributin kryesor në OAU të objekteve të studiuara. Së dyti, llogaritni OAE-në e objekteve në studim duke matur uljen e shumës së dritës CL nën ndikimin e këtyre objekteve në krahasim me efektin e antioksidantit që jep kontributin më të madh në OAE.

MATERIALE DHE METODA

Objektet e studimit ishin mostrat industriale të murrizit, rowanit dhe kofshëve të trëndafilit të prodhuara nga SHA Krasnogorskleksredstva (Rusi), si dhe frutat e mjedrës të mbledhura nga autorët në rajonin e Moskës në kushte të rritjes natyrore dhe të thara në një temperaturë prej 60-80 ° C derisa ata ndaluan lëshimin e lëngut dhe deformimit kur shtypen.

Reagentët për analizimin e kapacitetit antioksidues duke përdorur metodën kemilumineshente ishin: KH 2 PO 4, tretësirë buferike 20 mM (pH 7.4); peroksidaza nga rrënjët e rrikës (aktiviteti 112 njësi/mg, M = 44,173,9), tretësirë ujore 1 mM; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazinedion, hidrazid 3-aminoftalik, M = 177,11), tretësirë ujore 1 mM; peroksid hidrogjeni (H2O2, M = 34.01), tretësirë ujore 1 mM; tretësirat e antioksidantëve (acidi askorbik, kuercetina, tokoferoli). Të gjithë reagentët prodhohen nga Sigma Aldrich (SHBA).

Zierjet e frutave të murrizit, rowanit dhe trëndafilit dhe një infuzion i frutave të mjedrës u përgatitën sipas metodave të Farmakopesë Shtetërore të BRSS, të përcaktuara në artikullin e përgjithshëm farmakopeial "Infuzione dhe zierje".

Përcaktimi i kapacitetit total antioksidant u krye duke regjistruar kimilumineshencën në një kimiluminometër Lum-100 (DISoft, Rusi) duke përdorur softuerin PowerGraph 3.3. Për të përcaktuar OAE në materialet bimore, 40 μl luminol në një përqendrim prej 1 mM, 40 μl peroksidazë rrikë në një përqendrim prej 0,1 μM, nga 10 deri në 50 μl zierje ose infuzion (në varësi të përqendrimit) dhe tampon fosfati në sasia e kërkuar u vendos në kuvetën e pajisjes për të sjellë vëllimin total të mostrës në 1 ml. Kuveta u instalua në pajisje dhe CL u regjistrua, duke vëzhguar sinjalin e sfondit. Pas 48 s të regjistrimit të sinjalit të sfondit, 100 μl H2O2 në një përqendrim 1 mM u shtuan në kuvetë dhe regjistrimi CL vazhdoi për 10 min. Janë përgatitur katër mostra me përqendrime të ndryshme të secilit objekt bimor. CL u regjistrua gjithashtu për tretësirat e acidit askorbik, kuercetinës dhe tokoferolit në pesë përqendrime të ndryshme për çdo antioksidant. Më pas, OAU e mostrave të zierjeve dhe infuzioneve u rillogarit në kuercetinë.

Përqendrimet e luminolit, peroksidazës së rrikës dhe peroksidit të hidrogjenit u zgjodhën në mënyrë që të përcaktohej kapaciteti antioksidues i ekstrakteve ujore nga materialet bimore mjekësore në një kohë të pranueshme (jo më shumë se 10 minuta). Gjatë kësaj kohe, kurbat e kimilumineshencës për antioksidantët askorbat dhe flavonoidin kuercetin (antioksidantët kryesorë të materialeve bimore) arritën një pllajë, duke treguar shkatërrimin e plotë të antioksidantëve në sistem. Hollimet e mostrave të studiuara dhe përqendrimet e tretësirave të antioksidantëve standardë (të treguar në legjendat e figurave) u zgjodhën në atë mënyrë që të gjitha kthesat kinetike të CL të maten me të njëjtën ndjeshmëri të pajisjes.

Kapaciteti antioksidant u llogarit nga ndryshimi në sipërfaqe (Δ S) nën kurbën kinetike të kimilumineshencës (shuma e lehtë) kur shtohet një substancë që përmban një antioksidant. Për këtë qëllim kemi llogaritur S 0 për një sistem pa një antioksidant dhe zbriti sipërfaqen prej tij S S, duke karakterizuar sistemin në të cilin është shtuar antioksidanti. Vlera ∆ S varet nga ndjeshmëria e kimiluminometrit dhe kushtet e matjes. Raporti ∆ S/C V(ku C- përqendrimi i materialit biologjik në studim në kuvetë, g/l dhe V- vëllimi i kuvetës, l) shpreh kapacitetin antioksidues të 1 g të materialit që studiohet, pra lëndëve të para bimore.

Kapaciteti antioksidant Δ është llogaritur në mënyrë të ngjashme S A një tretësirë e një antioksidanti standard, për shembull kuercetin, i vendosur në të njëjtin vëllim të përzierjes së reaksionit. Raporti ∆ S A / C A V(ku C A- përqendrimi në peshë i antioksidantit në kuvetë, g/l) shpreh kapacitetin antioksidues të 1 g antioksidant.

Për secilin prej antioksidantëve standardë, u regjistrua sinjali nga tretësirat e disa përqendrimeve për të siguruar që llogaritjet ishin brenda një marrëdhënie lineare dhe rezultatet e marra ishin të riprodhueshme. Në të vërtetë, u përftua një varësi lineare (Δ S A = k A C A) sinjal nga përqendrimi nga i cili është llogaritur koeficienti stekiometrik k A. Sipas kriterit Fisher, vlerat e marra për antioksidantët standardë k A statistikisht e rëndësishme me një probabilitet prej 0.975. Më pas, sinjali nga katër përqendrimet u regjistrua për secilën nga katër mostrat e bimëve dhe për të gjitha mostrat u përftua një varësi lineare e sinjalit nga përqendrimi (∆ S = k·C), nga i cili është llogaritur koeficienti stekiometrik k. Me një probabilitet prej 0,975 (testi i Fisher), vlerat k të marra për mostrat e bimëve janë statistikisht të rëndësishme. Kapaciteti total antioksidant i materialit bimor për sa i përket masës së antioksidantit standard (mg%) u gjet duke përdorur formulën.

Vlerat u paraqitën si mesatare aritmetike ± devijimi standard (M ± δ) në f

REZULTATET E KËRKIMIT

Studimi i kinetikës së kimilumineshencës në prani të askorbatit të natriumit (Fig. 1. Efekti i askorbatit të natriumit në kinetikën e kimilumineshencës" data-note="Përqendrimet e përbërësve të sistemit: luminol - 40 μM, peroksidazë rrikë - 4 nM, peroksid hidrogjeni - 100 μM. Kurbat: 1 - kampion kontrolli; 2 - 0.05 μM; 3 - 0.10 μM; 4 - 0.15 μM; 5 - 0.2 μM; 6 - 0.25 μM askorbat natriumi."> Fig. 1) tregoi se për këtë antioksidant është karakterizohet nga një periudhë latente kur CL është pothuajse plotësisht e shtypur. Kohëzgjatja e saj është proporcionale me sasinë e antioksidantit në sistem. Në të njëjtën kohë, as pjerrësia e kurbave CL dhe as intensiteti i CL në pllajë nuk ndryshon. Kjo shpjegohet nga fakti se acidi askorbik është një antioksidant i fortë që kap të gjithë radikalët e formuar në sistem, duke përfshirë radikalët e luminolit, dhe CL nuk zhvillohet derisa të oksidohet i gjithë askorbati.

Studiues të tjerë kanë treguar gjithashtu se rezultatet e analizave kimike dhe vlera e TAU-së e përcaktuar me metodën e kimilumineshentit shpesh nuk përkojnë. Në punim, kapaciteti total antioksidant i përcaktuar në sistemin peroksidazë-luminol-peroksid hidrogjeni lidhet me përmbajtjen e komponimeve të triterpenit. Megjithatë, në veprën e të njëjtëve autorë, në të cilën objekt studimi ishte një bimë tjetër, ata nuk vunë re një korrelacion të OAE me përmbajtjen e asnjë grupi substancash, përfshirë flavonoidet.

Mospërputhje të tilla shoqërohen me të paktën tre faktorë. Së pari, aktiviteti i antioksidantëve është i rëndësishëm, pra shkalla e ndërveprimit të tyre me radikalet, e cila është e ndryshme për antioksidantë të ndryshëm të përfshirë në kampionin bimor. Sipas Izmailov, konstantet e shpejtësisë së reaksioneve përkatëse për meksidolin, tokoferolin dhe kuercetinën lidhen si 0.04: 2: 60. Së dyti, çdo molekulë antioksiduese, duke hyrë në një reaksion kimik, mund të kapë një numër të ndryshëm radikalësh. Sipas punës, kuercetina, acidet urik dhe askorbik kapën përkatësisht 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 dhe 0,5 ± 0,2 radikale për një molekulë antioksidante të reaguar (përdoret sistemi hemin-H 2 O 2 - luminol). Së treti, rezultatet e studimit mund të ndikohen nga prania e aktivitetit të peroksidazës në vetë kampionët e bimëve, si në punim, si dhe prania e kalciumit në kampione, e cila, siç tregohet në punim, është në gjendje të rritet. aktiviteti i peroksidazës së rrikës në kushte të caktuara. Kjo zakonisht shkakton një intensitet më të lartë CL në pllajë sesa në kthesat e kontrollit, të cilat ne, megjithatë, nuk i vëzhguam.

Faktori i parë kufizon ashpër përdorimin e një parametri të tillë si një ndryshim në shumën e dritës, pasi koha për matjen e kimilumineshencës duhet të jetë më e gjatë se koha për konsumimin e të gjithë antioksidantëve në mostrën e provës. Ndodhja e këtij momenti mund të gjykohet vetëm duke matur kinetikën e kimilumineshencës. Për më tepër, kontributi i antioksidantëve të dobët në TAU është nënvlerësuar ndjeshëm, pasi koha për oksidimin e plotë të tyre është shumë herë më e gjatë se kohëzgjatja e pranueshme e matjes (10-20 min).

Koeficienti stekiometrik i antioksidantit është edhe më i rëndësishëm. Numri i radikalëve n përgjuar nga ajo është e barabartë me , ku ρ është koeficienti stekiometrik, dhe ∆ m- ndryshimi i përqendrimit të antioksidantit gjatë matjes, në rastin tonë - përqendrimi fillestar i substancës së provës në mostrën e provës.

Dallimi në shumën e dritës së lumineshencës në mungesë të një antioksiduesi dhe në praninë e tij është proporcional n. Numri i përgjithshëm i radikalëve të përgjuar është , ku ρ iështë koeficienti stekiometrik i një antioksiduesi specifik dhe m i- përqendrimi i tij gjatë matjes. Numri i përgjithshëm i radikalëve të përgjuar nuk është padyshim i barabartë me sasinë totale të antioksidantëve, pasi koeficientët ρ i jo vetëm që nuk janë të barabarta me unitetin, por edhe ndryshojnë ndjeshëm për antioksidantë të ndryshëm.

Madhësia nështë proporcionale me diferencën në shumat e lehta të matura gjatë një kohe të caktuar midis një kampioni që përmban një antioksidant dhe një kampioni kontrolli që nuk përmban antioksidantë: S = k n, Ku k- koeficienti, konstant në të njëjtat kushte matjeje.

Metoda e diskutuar në artikull na lejon të përcaktojmë kapacitetin total antioksidant, ndërsa analiza kimike na lejon të përcaktojmë përmbajtjen totale të antioksidantëve në produkt. Prandaj, metoda e kimilumineshencës duket të jetë më informuese sesa analizat kimike.

Kushtet që zgjodhëm për vlerësimin e kapacitetit total antioksidues të lëndëve të para bimore duke regjistruar kinetikën e kimilumineshencës në një sistem të përbërë nga peroksidazë rrikë, peroksid hidrogjeni dhe luminol (përqendrimet e përbërësve - përkatësisht 4 nM, 100 μM dhe 40 μM; fosfat 20 mM tampon, pH 7.4), siguroi oksidimin e antioksidantëve të fortë (acidi askorbik) dhe antioksidantëve me forcë mesatare (quercetin) në 10 minuta. Kjo kohëzgjatje matjeje është e përshtatshme dhe siguron cilësinë e kërkuar të matjes.

Analiza e kinetikës së kimilumineshencës tregoi se në objektet e studiuara (zierje të frutave të rowanit, kofshëve të trëndafilit, murrizit dhe infuzionit të frutave të mjedrës) antioksidantët kryesorë janë antioksidantë me forcë mesatare, përfshirë flavonoidet, dhe forcë të dobët (tokoferol, etj.). Bazuar në uljen e shumës së dritës së kimilumineshencës, u llogarit kapaciteti total antioksidant për objektet e studiuara. Krahasimi i vlerave të marra të TAU me rezultatet e analizave kimike tregoi se produktet që përmbajnë të njëjtën sasi antioksidantësh me raporte të ndryshme mund të ndryshojnë në aftësinë e tyre për të mbrojtur në mënyrë efektive trupin nga efektet e dëmshme të radikalëve të lirë. Teknika e përshkruar është premtuese për studimin e objekteve bimore që përmbajnë një përzierje të antioksidantëve të ndryshëm. Në të njëjtën kohë, ai karakterizohet nga thjeshtësia dhe kostoja e ulët e kërkimit. Kombinimi i matjes së kinetikës së kimilumineshencës me modelimin matematikor të reaksioneve jo vetëm që do të automatizojë procesin e përcaktimit të TAU, por gjithashtu do të përcaktojë kontributin e grupeve individuale të antioksidantëve në tregues.

Fjalë kyçe

radikal i lirë/antioksidant/ aktivitet antioksidant / kapaciteti total antioksidant / kimilumineshencë/ luminol / radikal i lirë / aktivitet antioksidant / antioksidues / kapaciteti total antioksidues / kimilumineshencë / luminol

shënim artikull shkencor mbi shkencat kimike, autor i veprës shkencore - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Materialet bimore mjekësore janë një nga burimet e antioksidantëve për trupin e njeriut. Ndër metodat për përcaktimin e përmbajtjes së antioksidantëve në objektet bimore, është e përhapur metoda e analizës së kimilumineshencës. Në këtë punë është përdorur për të vlerësuar kapaciteti total antioksidant(OAE) zierje të frutave rowan, kofshëve të trëndafilit dhe murrizit dhe infuzion të frutave të mjedrës. Kinetika u regjistrua në eksperiment kimilumineshencë në një sistem të përbërë nga peroksidaza e rrikës, peroksidi i hidrogjenit dhe luminoli. Përqendrimet dhe vëllimi i përbërësve të sistemit në kampion u zgjodhën në mënyrë që antioksidantët e fortë (acidi askorbik) dhe antioksidantët e moderuar (quercetin) të oksidoheshin plotësisht gjatë kohës së matjes (10 min). Një metodë për llogaritjen e OAE bazuar në ndryshimet në shumën e lehtë është propozuar dhe justifikuar kimilumineshencë në prani të mostrave bimore. Analiza kinetike kimilumineshencë tregoi se objektet e studiuara dominoheshin nga antioksidantë me forcë mesatare, përfshirë flavonoidet dhe antioksidantë të dobët (tokoferol, etj.). Krahasimi i vlerave të llogaritura të OAE për objektet e studiuara dhe të dhënat e analizës së tyre kimike tregoi se produktet që përmbajnë të njëjtën sasi antioksidantësh me raporte të ndryshme sipas llojit mund të ndryshojnë në aftësinë e tyre për të mbrojtur trupin nga efektet e dëmshme të radikalëve të lirë. . Teknika e përshkruar është premtuese për studimin e objekteve bimore që përmbajnë një përzierje antioksidantësh të llojeve të ndryshme.

Tema të ngjashme punime shkencore në shkencat kimike, autor i veprës shkencore - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

2016 / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.
Përcaktimi i antioksidantëve me anë të kemilumineshencës së aktivizuar duke përdorur 2,2"-azo-bis(2-amidinopropan)
2012 / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Efekti antioksidant i dihidroquercetinës dhe rutinës në reaksionet e peroksidazës të katalizuara nga citokromi c
2008 / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Vlerësimi i kapacitetit oksidativ dhe antioksidant të substrateve biologjike nga kimilumineshenca e shkaktuar nga reaksioni Fenton
2016 / Piskarev Igor Mikhailovich, I.P. Ivanova
Përcaktimi i përmbajtjes së lipohidroperoksideve në lipoproteinat e serumit duke përdorur sistemin mikroperoksidazë-luminol
2011 / Teselkin Yuri Olegovich, Babenkova Irina Vladimirovna
Metodat e kërkimit antioksidues
2004 / Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V.
Aktiviteti antioksidant i bimëve të përdorura në etnomjekësinë e Tuvës
2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitsky O.B.
Studimi i vetive antioksidante të Fosprenil në sisteme të ndryshme testimi biologjik
2017 / A. V. Sanin, A. N. Narovlyansky, A. V. Pronin, T. N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova
Ndikimi i dozave të ndryshme të bifenileve të poliklorinuara në gjendjen e kimilumineshencës spontane dhe të shkaktuar nga imunoglobulina e varur nga luminoli i gjakut të plotë
2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samokhodova O.V.
Vlerësimi i sistemit të peroksidimit të lipideve të mbrojtjes antioksiduese tek fëmijët me hipertension arterial esencial duke përdorur metodat e spektrofotometrisë dhe kimilumineshencës
2014 / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Përcaktimi kimilumineshent i kapacitetit total antioksidant në materialin bimor mjekësor

Materiali bimor mjekësor është një nga burimet e antioksidantëve për trupin e njeriut. Analiza e kimilumineshencës është një nga metodat e zakonshme për përcaktimin e përmbajtjes së antioksidantëve në materialet bimore. Në punën tonë, analiza e kimilumineshencës u përdor për të përcaktuar kapacitetin total antioksidant (TAC) të zierjeve të frutave të hirit të malit, trëndafilit dhe murrizit, si dhe infuzionit të frutave të mjedrës. Eksperimentet përcaktuan kinetikën e kimilumineshencës së një sistemi të përbërë nga peroksidaza e rrikës, peroksidi i hidrogjenit dhe luminoli. Përqendrimet dhe vëllimet e përbërësve të sistemit u zgjodhën të tilla që antioksidantët e fortë (acidi askorbik) dhe antioksidantët me forcë mesatare (quercetin) u oksiduan plotësisht gjatë matjes (10 minuta). U propozua dhe u vërtetua një metodë për llogaritjen e TAC bazuar në ndryshimet në shumën e dritës së kimilumineshencës në prani të mostrave të bimëve. Analiza e kinetikës së kimilumineshencës tregoi se në objektet e studiuara dominojnë antioksidantë me forcë mesatare, duke përfshirë flavonoidet dhe antioksidantët e dobët (tokoferol dhe të tjerë). Krahasimi i vlerave të llogaritura të TAC për objektet në studim dhe të dhënat e analizës së tyre kimike treguan se produktet që përmbajnë të njëjtën sasi antioksidantësh me raporte të ndryshme antioksidantësh sipas llojeve mund të ndryshojnë në aftësinë e tyre për të mbrojtur trupin nga efektet e dëmshme të radikaleve të lira. . Teknika e përshkruar është një teknikë premtuese për studimin e objekteve bimore që përmbajnë një përzierje të llojeve të ndryshme të antioksidantëve.

Teksti i punës shkencore me temën “Metodë kimilumineshente për përcaktimin e kapacitetit total antioksidant në materialet bimore mjekësore”

metodë kimilumineshente për përcaktimin e kapacitetit total antioksidant në materialet bimore mjekësore

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1 Departamenti i Biofizikës Mjekësore, Fakulteti i Mjekësisë Fundamentale, M.V. Lomonosov Universiteti Shtetëror i Moskës, Moskë

2 Departamenti i Farmakognozës, Fakulteti i Farmacisë,

Universiteti i Parë Mjekësor Shtetëror i Moskës me emrin I.M. Sechenov, Moskë

Materialet bimore mjekësore janë një nga burimet e antioksidantëve për trupin e njeriut. Ndër metodat për përcaktimin e përmbajtjes së antioksidantëve në objektet bimore, është e përhapur metoda e analizës së kimilumineshencës. Në këtë punim, u përdor për të vlerësuar kapacitetin total antioksidant (TAC) të zierjeve të frutave të rowanit, trëndafilit dhe murrizit dhe infuzionit të frutave të mjedrës. Në eksperiment, kinetika e kimilumineshencës u regjistrua në një sistem të përbërë nga peroksidaza e rrikë, peroksid hidrogjeni dhe luminol. Përqendrimet dhe vëllimi i përbërësve të sistemit në kampion u zgjodhën në mënyrë që antioksidantët e fortë (acidi askorbik) dhe antioksidantët e moderuar (quercetin) të oksidoheshin plotësisht gjatë kohës së matjes (10 min). Është propozuar dhe justifikuar një metodë për llogaritjen e OAE bazuar në ndryshimet në shumën e dritës së kimilumineshencës në prani të mostrave bimore. Analiza e kinetikës së kimilumineshencës tregoi se në objektet e studiuara mbizotërojnë antioksidantë me forcë mesatare, përfshirë flavonoidet, dhe antioksidantë të dobët (tokoferol etj.). Krahasimi i vlerave të llogaritura të OAE për objektet e studiuara dhe të dhënat e analizës së tyre kimike tregoi se produktet që përmbajnë të njëjtën sasi antioksidantësh me raporte të ndryshme sipas llojit mund të ndryshojnë në aftësinë e tyre për të mbrojtur trupin nga efektet e dëmshme të radikalëve të lirë. . Teknika e përshkruar është premtuese për studimin e objekteve bimore që përmbajnë një përzierje antioksidantësh të llojeve të ndryshme.

Fjalët kyçe: radikal i lirë, antioksidant, aktivitet antioksidues, kapacitet total antioksidant, kimilumineshencë, luminol

Financimi: puna u mbështet nga Fondacioni Rus i Shkencës, granti nr. 14-15-00375.

Shem3 Për korrespondencë: Georgy Konstantinovich Vladimirov

119192, Moskë, Lomonosovsky pr-t, 31, ndërtesa 5; [email i mbrojtur]

Artikulli u pranua: 10.03.2016 Artikulli u pranua për publikim: 18.03.2016

Përcaktimi kimilumineshent i kapacitetit total antioksidant në materialin bimor mjekësor

1 Departamenti i Biofizikës Mjekësore, Fakulteti i Mjekësisë Fundamentale, Universiteti Shtetëror i Moskës Lomonosov, Moskë, Rusi

2 Departamenti i Farmakognozës, Fakulteti i Farmacisë,

Universiteti i Parë Mjekësor Shtetëror i Moskës Sechenov, Moskë, Rusi

Fjalët kyçe: radikal i lirë, antioksidant, aktivitet antioksidues, kapacitet total antioksidues, kimilumineshencë, luminol

Financimi: kjo punë u mbështet nga Fondacioni Rus i Shkencës, granti nr. 14-15-00375.

Mirënjohje: autorët falënderojnë Andrey Alekseev nga Universiteti Shtetëror i Moskës Lomonosov për ndihmën e tij në kryerjen e eksperimentit. Korrespondenca duhet të adresohet: Georgiy Vladimirov

Lomonosovskiy prospekt, d. 31, k. 5, Moskë, Rusi, 119192; ur [email i mbrojtur] Marrë: 10.03.2016 Pranuar: 18.03.2016

Radikalet e lira të formuara në trup prishin strukturën e membranave qelizore, gjë që, nga ana tjetër, çon në zhvillimin e kushteve të ndryshme patologjike. Efektet oksiduese shkatërruese të radikalëve parandalohen nga sistemi mbrojtës antioksidues i trupit, në të cilin përbërësit me peshë të ulët molekulare - interceptorët radikalë (kurthe) - luajnë një rol të rëndësishëm. Një nga burimet e antioksidantëve janë materialet bimore mjekësore, si dhe medikamentet e bazuara në to, studimi i potencialit antioksidues të të cilave ndihmon në rritjen e efektit të tyre parandalues dhe terapeutik.

Metodat kryesore për përcaktimin e antioksidantëve diskutohen në punime, megjithatë, përkufizimi i antioksidantëve si komponime kimike nuk jep një pamje të plotë të vetive mbrojtëse të objektit në studim: ato përcaktohen jo vetëm nga sasia e një antioksiduesi të veçantë, por edhe nga veprimtaria e secilit prej tyre. Aktiviteti antioksidant, ose aktiviteti antioksidant, AOA, është konstanta e shpejtësisë së reagimit të një antioksiduesi me një radikal të lirë (kInH). Metoda e kimilumineshencës (CL) bën të mundur përcaktimin e sasisë totale të radikaleve që lidhin antioksidantët në një kampion (kapaciteti total antioksidues, TCA), dhe kur përdoret metoda e modelimit matematikor të kinetikës CL, gjithashtu shpejtësia e formimit dhe reagimit të radikale me antioksidantë, domethënë AOA.

Modifikimi më i zakonshëm i metodës së kimilumineshencës për përcaktimin e kapacitetit total antioksidant bazohet në përdorimin e luminolit si një aktivizues i kimilumineshencës. Një mostër me shtimin e luminolit, peroksidit të hidrogjenit dhe një përbërje të aftë për të formuar radikale si rezultat i dekompozimit spontan (termolizë), për shembull 2,2"-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorur (ABAP):

Në prani të oksigjenit molekular, radikali alkil R^ formon radikalin peroksil ROO^:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv Nga LH, nëpërmjet formimit të substancave ndërmjetëse (hidroperoksid luminol dhe endoperoksid luminol), një molekulë e produktit përfundimtar të oksidimit të luminolit, acidi aminoftalik, formohet në një gjendje të ngacmuar elektronikisht, e cila lëshon një foton. , dhe si rezultat vërehet kimilumineshencë . Intensiteti CL është proporcional me shpejtësinë e prodhimit të fotonit, dhe ai, nga ana tjetër, është proporcional me përqendrimin e palëvizshëm të LH në sistem. Duke ndërvepruar me radikalet, antioksidantët ndërpresin zinxhirin e përshkruar të transformimeve dhe parandalojnë formimin e një fotoni.

Komponimet e ndjeshme ndaj termolizës nuk janë burimi i vetëm i mundshëm i radikalëve kur analizohet kapaciteti antioksidues i një kampioni duke përdorur metodën e kimilumineshencës. Alternativat janë peroksidaza rrikë-peroksid hidrogjeni, hemin-peroksid hidrogjeni, citokrom c-kardiolipin-peroksid hidrogjeni etj. Skema e reagimit për oksidimin e luminolit nga peroksidazat diskutohet në veprën e Cormier et al. .

Kurbat kinetike të CL për këto sisteme pasqyrojnë dy faza të reaksionit: fazën e rritjes së intensitetit të CL dhe fazën e një pllajë ose rënie graduale të luminescencës, kur

Intensiteti i CL është ose konstant ose zvogëlohet ngadalë. Puna përshkruan dy qasje për matjen e kapacitetit total antioksidues që marrin parasysh këtë veçori të kthesave. Metoda TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) bazohet në matjen e periudhës latente të CL t dhe mund të përdoret për të përcaktuar antioksidantët si Trolox ose acidi askorbik: ato karakterizohen nga një konstante e shpejtësisë së lartë të reagimit me radikalet dhe për këtë arsye mund të të quajtur antioksidantë të fortë. Gjatë periudhës latente ndodh oksidimi i plotë i tyre. Metoda TAR (Total Antioxidant Reaktiviteti) përdoret për të matur shkallën e shuarjes së kimilumineshencës q në pllajën ose maksimumin e kurbës kemilumineshente:

ku I është intensiteti i kimilumineshencës pa një antioksidant dhe 11 është intensiteti CL në prani të një antioksiduesi. Kjo metodë përdoret nëse sistemi përmban kryesisht antioksidantë të dobët me konstante të shkallës së ulët të ndërveprimit me radikalët - shumë më e ulët në krahasim me konstantën e luminolit.

Efekti i antioksidantëve karakterizohet jo vetëm nga treguesit t dhe c. Siç shihet nga punimet, efekti i antioksidantëve si acidi urik në sistemin hemin-H2O2-luminol ose tokoferoli, rutina dhe kuercetina në sistemin citokrom c-kardiolipin-H2O2-luminol karakterizohet nga një ndryshim në shkallën maksimale. e rritjes së CL (utx). Siç tregojnë rezultatet e modelimit matematikor të kinetikës, vlerat e konstanteve të shpejtësisë së ndërveprimit të këtyre antioksidantëve me radikalet janë afër vlerës së konstantës së luminolit, prandaj antioksidantë të tillë mund të quhen antioksidantë me forcë mesatare.

Nëse materiali në studim, veçanërisht lëndët e para bimore, përmbanin vetëm një lloj antioksidantësh, atëherë përmbajtja e tyre mund të karakterizohet nga një nga tre treguesit e renditur më sipër (t, c ose V). Por materialet bimore përmbajnë një përzierje antioksidantësh me fuqi të ndryshme. Për të zgjidhur këtë problem, disa autorë përdorën ndryshimin në shumën e dritës së kimilumineshencës gjatë një kohe të caktuar DE, të llogaritur me formulën

DE = DE0 - DE,

ku DE0 dhe DE5 janë shumat e dritës CL për një kohë të caktuar? respektivisht në mostrat e kontrollit dhe testimit. Koha duhet të jetë e mjaftueshme për oksidimin e të gjithë antioksidantëve në sistem, domethënë që kurba CL e kampionit të provës të arrijë nivelin e kurbës CL të kampionit të kontrollit. Ky i fundit supozon se studiuesit jo vetëm që duhet të regjistrojnë shumën e dritës së shkëlqimit, por edhe të regjistrojnë kurbën e kinetikës CL për një kohë mjaft të gjatë, gjë që nuk bëhet gjithmonë.

Meqenëse të gjithë parametrat e matur varen nga pajisja dhe kushtet e matjes, efekti antioksidant i substancës në sistemin në studim zakonisht krahasohet me efektin e një antioksidanti standard, për shembull Trolox.

Sistemi i peroksidazës së rrikës-peroksid hidrogjeni është përdorur për të analizuar kapacitetin total antioksidues të materialeve bimore nga shumë autorë. Për të vlerësuar sasinë e antioksidantëve në mostra, është përdorur periudha latente e CL (metoda TRAP) dhe zona nën kurbën e zhvillimit të CL është përdorur në punime. Megjithatë, veprat e listuara nuk japin një justifikim të qartë

zgjedhja e një ose një parametri tjetër për vlerësimin e OAU.

MATERIALE DHE METODA

Reagentët për analizimin e kapacitetit antioksidant me metodën e kimilumineshentit ishin: KH2PO4, tretësirë buferike 20 mM (pH 7.4); peroksidaza nga rrënjët e rrikës (aktiviteti 112 njësi/mg, M = 44,173,9), tretësirë ujore 1 mM; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazinedion, hidrazid 3-aminoftalik, M = 177,11), tretësirë ujore 1 mM; peroksid hidrogjeni (H2O2, M = 34,01), tretësirë ujore 1 mM; tretësirat e antioksidantëve (acidi askorbik, kuercetina, tokoferoli). Të gjithë reagentët prodhohen nga Sigma Aldrich (SHBA).

Përcaktimi i kapacitetit total antioksidant u krye duke regjistruar kimilumineshencën në një kimiluminometër Lum-100 (DISoft, Rusi) duke përdorur softuerin PowerGraph 3.3. Për të përcaktuar OAE në materialet bimore, 40 μl luminol në një përqendrim prej 1 mM, 40 μl peroksidazë rrikë në një përqendrim prej 0,1 μM, nga 10 deri në 50 μl zierje ose infuzion (në varësi të përqendrimit) dhe tampon fosfati në sasia e kërkuar u vendos në kuvetën e pajisjes për të sjellë vëllimin total të mostrës në 1 ml. Kuveta u instalua në pajisje dhe CL u regjistrua, duke vëzhguar sinjalin e sfondit. Pas 48 s të regjistrimit të sinjalit të sfondit, 100 μl H2O2 në një përqendrim 1 mM u shtuan në kuvetë dhe regjistrimi CL vazhdoi për 10 min. Janë përgatitur katër mostra me përqendrime të ndryshme të secilit objekt bimor. CL u regjistrua gjithashtu për tretësirat e acidit askorbik, kuercetinës dhe tokoferolit në pesë përqendrime të ndryshme për secilin prej antioksidantëve. Më pas, OAU e mostrave të zierjeve dhe infuzioneve u rillogarit në kuercetinë.

arriti një pllajë, duke treguar shkatërrimin e plotë të antioksidantëve në sistem. Hollimet e mostrave të studiuara dhe përqendrimet e tretësirave të antioksidantëve standardë (të treguar në titujt e figurave) u zgjodhën në atë mënyrë që të gjitha kthesat kinetike të CL të maten me të njëjtën ndjeshmëri të pajisjes.

Kapaciteti antioksidant u llogarit nga ndryshimi në sipërfaqen (AS) nën kurbën kinetike të kimilumineshencës (shuma e lehtë) pas shtimit të një substance që përmban një antioksidant. Për ta bërë këtë, ne kemi llogaritur S0 për një sistem pa një antioksidant dhe kemi zbritur prej tij zonën SS, e cila karakterizon sistemin në të cilin është shtuar antioksidanti. Vlera e AS varet nga ndjeshmëria e kimiluminometrit dhe kushtet e matjes. Raporti AS/C ■ V (ku C është përqendrimi i materialit biologjik në studim në kuvetë, g/l, dhe V është vëllimi i kuvetës, l) shpreh kapacitetin antioksidues të 1 g të materialit të studiuar, d.m.th., lëndët e para bimore.

Në mënyrë të ngjashme, ne llogaritëm kapacitetin antioksidues ASa të një tretësire të një antioksiduesi standard, për shembull, kuercetin, të vendosur në të njëjtin vëllim të përzierjes së reaksionit. Raporti AS/CÄ ■ V (ku CA është përqendrimi në peshë i antioksidantit në kuvetë, g/l) shpreh kapacitetin antioksidues prej 1 g antioksidant.

Për secilin prej antioksidantëve standardë, u regjistrua sinjali nga tretësirat e disa përqendrimeve për të siguruar që llogaritjet ishin brenda një marrëdhënie lineare dhe rezultatet e marra ishin të riprodhueshme. Në të vërtetë, u përftua një varësi lineare (ASa = kA ■ CA) e sinjalit nga përqendrimi, nga e cila u llogarit koeficienti stoikiometrik kA. Sipas kriterit Fisher, vlerat e kA të marra për antioksidantët standardë janë statistikisht të rëndësishme me një probabilitet prej 0,975. Më pas, sinjali nga katër përqendrimet u regjistrua për secilën nga katër mostrat e bimëve dhe për të gjitha mostrat u përftua një varësi lineare e sinjalit nga përqendrimi (AS = k ■ C), nga e cila u llogarit koeficienti stoikiometrik k. Me një probabilitet prej 0,975 (testi i Fisher), vlerat k të marra për mostrat e bimëve janë statistikisht të rëndësishme. Kapaciteti total antioksidant i materialit bimor në lidhje me masën e antioksidantit standard (mg%) u gjet duke përdorur formulën

OAE = k ■ 105. k

Vlerat u paraqitën si mesatare aritmetike ± devijimi standard (M ± 5) në p<0,05.

REZULTATET E KËRKIMIT

Një studim i kinetikës së kimilumineshencës në prani të askorbatit të natriumit (Fig. 1) tregoi se ky antioksidant karakterizohet nga një periudhë latente kur CL është pothuajse plotësisht i shtypur. Kohëzgjatja e tij është proporcionale me sasinë e antioksidantit në sistem. Në këtë rast, as pjerrësia e kthesave CL dhe as intensiteti i CL në pllajë nuk ndryshojnë. Kjo shpjegohet me faktin se acidi askorbik është një antioksidant i fortë që kap të gjithë radikalët e formuar në sistem, duke përfshirë radikalët luminol, dhe CL nuk zhvillohet derisa të oksidohet i gjithë askorbati.

Efekti i tokoferolit (Fig. 2) u manifestua nga një ulje e intensitetit të CL në pllajë, gjë që është tipike për antioksidantët e dobët, megjithëse tokoferoli konsiderohet një nga më

antioksidantë të fuqishëm. Ndoshta kjo mospërputhje është për shkak të faktit se në eksperimentin tonë radikalet e lira ishin në një tretësirë ujore, ndërsa efekti i tokoferolit zakonisht studiohet në media jopolare. Në një studim ku burimi i radikalëve ishte një kompleks i citokromit c me kardiolipinë dhe reaksioni me luminol u zhvillua brenda këtij kompleksi, tokoferoli kishte vetitë e një antioksiduesi me forcë mesatare.

Duke studiuar efektin e përqendrimeve të ndryshme të kuercetinës në sistemin tonë (Fig. 3) dhe duke krahasuar kthesat kinetike për të dhe askorbatin e natriumit dhe tokoferolin, mund të vërehet se efekti kryesor i kuercetinës manifestohet në një ndryshim në pjerrësinë e kthesa, d.m.th., shkalla e zhvillimit të CL, e cila është tipike për antioksidantët me forcë mesatare.

Kurbat e CL për të gjitha zierjet e studiuara (Fig. 4) ngjajnë me kurbat për kuercetinën me një ulje të lehtë të intensitetit të CL në fund, d.m.th., kur arrihet

Koha, min

Oriz. 1. Efekti i askorbatit të natriumit në kinetikën e kimilumineshencës

Përqendrimet e përbërësve të sistemit: luminol - 40 μM, peroksidazë rrikë - 4 nM, peroksid hidrogjeni - 100 μM. Kurbat: 1 - mostra e kontrollit; 2 - 0,05 μM; 3 - 0,10 μM; 4 - 0,15 μM; 5 - 0.2 μM; 6 - 0,25 μM askorbat natriumi.

pllajë. Siç tregohet në punim, kjo sjellje është tipike për antioksidantët me forcë mesatare, të cilët në rastin tonë përfshijnë polifenolet - flavonoidet dhe taninet. Për infuzionin e frutave të mjedrës (Fig. 4, D), vërehet një rënie e dukshme e kimilumineshencës në nivelin e pllajës, e cila është tipike për antioksidantët e dobët, siç është tokoferoli në këtë rast. Për sa i përket kuercetinës dhe tokoferolit, infuzioni i mjedrës përmban 4,7 ± 0,9 µmol/g kuercetinë dhe 11,9 ± 0,8 µmol/g tokoferol.

Kur krahasohen kurbat e kimilumineshencës të marra për përqendrime të ndryshme të katër ekstrakteve ujore të studiuara nga materialet bimore, u tregua se kontributi i antioksidantëve të mesëm dhe të dobët në kapacitetin total antioksidues të mostrave u ul në seritë e mëposhtme: infuzion i frutave të mjedrës (Fig. 4 , D), zierje e kofshëve të trëndafilit (Fig. 4, B), zierje e frutave rowan (Fig. 4, A), zierje e frutave të murrizit (Fig. 4, B). Vlerat e AS bazuar në përqendrimin C të substancës së studiuar në kuvetë dhe vlerat e kapacitetit total antioksidant në terma të kuercetinës janë paraqitur në tabelë.

DISKUTIMI I REZULTATEVE

Të dhënat e marra gjatë eksperimenteve dhe vlerat OAE të objekteve të studiuara të llogaritura në bazë të tyre u krahasuan me përmbajtjen e antioksidantëve kryesorë në to, të përcaktuara duke përdorur metoda kimike të analizës. Pavarësisht se korrelacioni pozitiv midis sasisë totale të antioksidantëve dhe TAU në objekte të ndryshme është i pamohueshëm, ka ende dallime të dukshme midis këtyre treguesve. Për shembull, nëse marrim shumën e përmbajtjes së flavonoideve, taninave dhe acidit askorbik, atëherë rezulton të jetë më e madhe se TAU e llogaritur për të gjitha objektet e studiuara, me përjashtim të zierjes së frutave të murrizit (tabela).

Studiues të tjerë kanë treguar gjithashtu se rezultatet e analizave kimike dhe vlera e TAU-së e përcaktuar me metodën e kimilumineshentit shpesh nuk përkojnë. Në funksionim, përcaktohet kapaciteti total antioksidant

46 Koha, min

Unë" "h chi----.

Oriz. 2. Efekti i tokoferolit në kinetikën e kimilumineshencës

Përqendrimet e përbërësve të sistemit: luminol - 40 μM, peroksidazë rrikë - 4 nM, peroksid hidrogjeni - 100 μM. Kurbat: 1 - mostra e kontrollit; 2 - 0,01 μM; 3 - 0,025 μM; 4 - 0.06 μM; 5 - 0.1 μM; 6 - 0,2 μM tokoferol.

46 Koha, min

Oriz. 3. Efekti i kuercetinës në kinetikën e kimilumineshencës Përqendrimet e komponentëve të sistemit: luminol - 40 µM, peroksidazë rrikë - 4 nM, peroksid hidrogjeni - 100 µM. Kurbat: 1 - mostra e kontrollit; 2 - 0.02 μM; 3 - 0.03 μM; 4 - 0,04 μM; 5 - 0,05 μM; 6 - 0,06 μM kuercetinë.

Koha, min

46 Koha, min

120 I 100 80\60 40 20

46 Koha, min

Oriz. 4. Efekti i zierjeve të frutave rowan (A), murrizit (B), ijeve të trëndafilit (C) dhe infuzionit të frutave të mjedrës (D) në kinetikën e kimilumineshencës Përqendrimet e përbërësve të sistemit: luminol - 40 μM, peroksidazë rrikë - 4 nM, peroksid hidrogjeni - 100 μM. (A) Kurbat: 1 - mostra e kontrollit; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l zierje e frutave rowan. (B) Kurbat: 1 - mostra e kontrollit; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l zierje e frutave të murrizit. (B) Kurbat: 1 - mostra e kontrollit; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l zierje trëndafili. (D) Kurbat: 1 - mostra e kontrollit; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g/l infuzion i frutave të mjedrës.

në sistemin peroksidazë-luminol-peroksid hidrogjeni në korrelacion me përmbajtjen e komponimeve të triterpenit. Megjithatë, në veprën e të njëjtëve autorë, në të cilën objekt studimi ishte një bimë tjetër, ata nuk vunë re një korrelacion të OAE me përmbajtjen e asnjë grupi substancash, përfshirë flavonoidet.

Mospërputhje të tilla shoqërohen me të paktën tre faktorë. Së pari, aktiviteti i antioksidantëve është i rëndësishëm, pra shkalla e ndërveprimit të tyre me radikalet, e cila është e ndryshme për antioksidantë të ndryshëm të përfshirë në kampionin bimor. Sipas Izmailov, konstantet e shpejtësisë së reaksioneve përkatëse për meksidolin, tokoferolin dhe kuercetinën lidhen si 0.04: 2: 60. Së dyti, çdo molekulë antioksiduese, duke hyrë në një reaksion kimik, mund të kapë një numër të ndryshëm radikalësh. Sipas punës, kuercetina, acidet urik dhe askorbik kapën përkatësisht 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 dhe 0,5 ± 0,2 radikale për një molekulë antioksiduese të reaguar (është përdorur sistemi hemin-H2O2-luminol). Së treti, rezultatet e studimit mund të ndikohen nga prania e aktivitetit të peroksidazës në vetë kampionët e bimëve, si në punim, si dhe prania e kalciumit në kampione, e cila, siç tregohet në punim, është në gjendje të rritet. aktiviteti i peroksidazës së rrikës në kushte të caktuara. Kjo zakonisht çon në më shumë

intensitet më i lartë CL në pllajë sesa në kthesat e kontrollit, të cilat ne, megjithatë, nuk i vëzhguam.

Faktori i parë kufizon ashpër përdorimin e një parametri të tillë si një ndryshim në shumën e dritës, pasi koha për matjen e kimilumineshencës duhet të jetë më e gjatë se koha për konsumimin e të gjithë antioksidantëve në mostrën e provës. Ndodhja e këtij momenti mund të gjykohet vetëm duke matur kinetikën e kimilumineshencës. Për më tepër, kontributi i antioksidantëve të dobët në OAU është nënvlerësuar ndjeshëm, pasi koha për oksidimin e plotë të tyre është shumë herë më e gjatë se kohëzgjatja e pranueshme e matjes (10-20 min).

Koeficienti stekiometrik i antioksidantit është edhe më i rëndësishëm. Numri i radikalëve n të përgjuar prej tij është i barabartë me

ku p është koeficienti stoikiometrik, dhe Am është ndryshimi në përqendrimin e antioksidantit gjatë kohës së matjes, në rastin tonë, përqendrimi fillestar i substancës së provës në kampionin e provës.

Diferenca në shumën e dritës së lumineshencës në mungesë të antioksidantit dhe në prani të tij është në përpjesëtim me n. Numri i përgjithshëm i radikalëve të përgjuar është i barabartë me n = Y.p. m,

ku është koeficienti stekiometrik i një antioksiduesi të caktuar dhe m është përqendrimi i tij gjatë matjes

Objekti i studimit Flavonoidet, mg%* Taninet, mg%* Acidi askorbik, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. njësi TAU, mg% kuercetinë

Zierje frutash rowan 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Zierje e trëndafilit 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Zierje e frutave të murrizit 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Infuzion i frutave të thata të mjedrës 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Shënim: * - të dhënat e literaturës, . AS - ndryshimi i shumës së lehtë për kampionin, rel. njësi, C - përqendrimi i mostrës në kuvetë, g/l. Vlerat e llogaritura janë të besueshme në f<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

Rhenia. Numri i përgjithshëm i radikalëve të përgjuar sigurisht nuk është i barabartë me sasinë totale të antioksidantëve, pasi koeficientët pt jo vetëm që nuk janë të barabartë me unitetin, por gjithashtu ndryshojnë ndjeshëm për antioksidantë të ndryshëm.

Vlera e n është proporcionale me ndryshimin në shumat e lehta të matura gjatë një kohe të caktuar midis një kampioni që përmban një antioksidant dhe një kampioni kontrolli që nuk përmban antioksidantë:

ku k është një koeficient që është konstant në të njëjtat kushte matjeje.

Ne zgjodhëm kushtet për vlerësimin e kapacitetit total antioksidues të lëndëve të para bimore duke regjistruar kinetikën e kimilumineshencës në një sistem të përbërë nga peroksidaza rrikë, peroksid hidrogjeni dhe luminol (përqendrimet e përbërësve - përkatësisht 4 nM, 100 μM dhe 40 μM; fosfat 20 mM tampon, pH 7.4),

siguroi oksidimin e antioksidantëve të fortë (acidi askorbik) dhe antioksidantëve me forcë mesatare (quercetin) në 10 minuta. Kjo kohëzgjatje matjeje është e përshtatshme dhe siguron cilësinë e kërkuar të matjes.

Letërsia

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Radikalët e lirë si pjesëmarrës në proceset rregullatore dhe patologjike. Në: Grigoriev A.I., Vladimirov Yu.A., redaktorë. Shkencat themelore - mjekësia. Biofiza. mjaltë. teknologjisë. M.: MAX Press; 2015. vëll 1. fq. 38-71.

3. Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V. Metodat për studimin e antioksidantëve. Kimik. rast. lende e pare, lende e paperpunuar. 2004; (3): 63-75.

4. Vasiliev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Butovska D. I., Trofimov A. V. Aktiviteti antioksidant i kalkoneve. Përcaktimi kimilumineshent i reaktivitetit dhe llogaritja kimike kuantike e energjive dhe strukturave të reagentëve dhe ndërmjetësve. Kinetika dhe kataliza. 2010; 51 (4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil"ev RF, Veprintsev TL. Peroxy-

Kimiluminescenca e ndërmjetësuar nga radikalet: diversiteti mekanik dhe bazat për analizën antioksiduese. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Vlerësimi i kapacitetit antiradikal nga kimilumineshenca e luminolit të shkaktuar nga H2O2-hemin. J Agric Food Chem. 3 dhjetor 2003; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V. Radikalet e lira dhe kimilumineshenca qelizore. Uspekhi biol. kimi. 2009; 49: 341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kimilumineshenca kinetike si metodë për studimin e reaksioneve të radikaleve të lira. Biofizika. 2011; 56 (6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Përcaktimi i aktivitetit antioksidues duke matur kinetikën e kimilumineshencës. Fotobiologjia dhe fotomjekësia. 2011; 7 (2): 70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Ndriçimi i luminolit i shkaktuar nga termoliza 2.2"-Azo-bis(2-amidinopropan). Pa pagesë

Komuna Radic Res. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Mbi përdorimin e shuarjes së luminescencës së luminolit për të vlerësuar aktivitetin e SOD. Free Radic Biol Med. Qershor 1994; 16 (6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Vlerësimi i potencialit total antioksidant (TRAP) dhe i reaktivitetit total antioksidant nga matjet e kimilumineshencës së përmirësuar me luminol. Free Radic Biol Med. shkurt 1995; 18 (2): 153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Një hetim i mekanizmit të peroksidimit lumineshent të luminolit nga teknikat e rrjedhjes së ndalur. J Biol Chem. 25 shtator 1968; 243 (18): 4706-14.

21. Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. Përcaktimi i antioksidantëve me kimilumineshencë të aktivizuar duke përdorur 2,2"-azo-bis(2-amidinopropane). Vestn. MGU. Ser. 2. Chem 2012; 53 (3): 187-93.

24. Ministria e Shëndetësisë e Farmakopesë Shtetërore të BRSS të BRSS XI ed. Vëll. 2 “Metodat e përgjithshme të analizës. Lëndët e para të bimëve mjekësore." M.: Mjekësi; 1987. fq. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. Studimi i përgatitjeve për nxjerrjen e trëndafilit. Farmaci. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Studimi i frutave të murrizit duke përdorur metoda të ndryshme të ruajtjes dhe nxjerrjes ujore. Farmaci. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Substancat biologjikisht aktive të frutave dhe ekstraktet ujore të mjedrës së zakonshme. Farmaci. 2014; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Studimi i substancave biologjikisht aktive të frutave të murrizit - lëndë të para për përgatitjen e tinkturave të matricës homeopatike. Të Shtun. shkencore tr. bazuar në materiale nga XXIV Moska. ndërkombëtare homeopatist. konf. “Zhvillimi i metodës homeopatike në mjekësinë moderne”; 24-25 janar 2014; Moska. M.; 2014. fq. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Studimi i përbërjes së substancave biologjikisht aktive në lëndët e para të bimëve medicinale të metodave të ndryshme të ruajtjes. Të Shtun. teza të bazuara në materiale nga XX Ross. kombëtare kongreg. "Njeriu dhe mjekësia"; 15-19 prill 2013; Moska. M.: EKOOnis; 2013. fq. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M. A., Neiman P. L. Studimi i aktivitetit të peroksidazës në ekstrakte nga rizomat dhe rrënjët e rrikë dhe qëndrueshmëria e saj ndaj ndikimeve të ndryshme. Vestn. Universiteti Shtetëror i Moskës. Ser. 2. Kimik. 2006; 47 (5): 350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Svobodnye radikaly kak uchastniki regulyatornykh dhe patologicheskikh protsessov. Në: Grigor"ev AI, Vladimirov YuA, redaktorë. Fundamental"nye nauki - medicitsine. Biofizicheskie meditsinskie tekhnologii. Moskë: MAKS Press; 2015. v. 1. fq. 38-71. ruse.

2. Chanda S, Dave R. Modele in vitro për vlerësimin e aktivitetit antioksidues dhe disa bimë medicinale që zotërojnë veti antioksiduese: Një përmbledhje. Afr J Microbiol Res. dhjetor 2009; 3 (13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal"tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Khimija Rastitel"nogo Syr"ja. 2004; (3): 63-75. Rusisht.

4. Vasil"ev RF, K""nçeva VD, Fedorova GF, B""tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti dhe kvantovo-khimicheskii raschet energii dhe stroeniya reagentov dhe intermediatov. Kinetika dhe kataliza. 2010; 51 (4): 533-41. rusisht.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA, et al. Potenciali antioksidant i komponimeve të lidhura me kurkuminën e studiuar nga kinetika e kimilumineshencës, efikasiteti i thyerjes së zinxhirit, aktiviteti i pastrimit (ORAC) dhe llogaritjet e DFT. Beilstein J Org Chem. 11 gusht 2015; 11: 1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil"ev RF, Veprintsev TL. Kimiluminescenca e ndërmjetësuar nga peroksi-radikale: diversiteti mekanik dhe bazat për analizën antioksiduese. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil"ev RF. Analiza e lehtë e kimilumineshencës për vetitë antioksiduese të lipideve bimore: bazat dhe shembujt ilustrues. Analist 2009 Tetor; 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Vlerësimi i kapacitetit antiradikal nga luminoli i shkaktuar nga H2O2-hemin

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Svobodnye radikaly dhe kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49: 341-88. ruse.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya kak metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. Biofizika. 2011; 56 (6): 1081-90. ruse.

11. Izmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiologjia dhe fotomeditsina. 2011; 7 (2): 70-6. rusisht.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Ndriçimi i luminolit i shkaktuar nga termoliza 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan). Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Mbi përdorimin e shuarjes së luminescencës së luminolit për të vlerësuar aktivitetin e SOD. Free Radic Biol Med. Qershor 1994; 16 (6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Kimilumineshencë e dukshme e lidhur me reaksionin ndërmjet methemoglobinës ose oksihemoglobinës me peroksid hidrogjeni. Photochem Photobiol. 1994 nëntor; 60 (5): 405-11.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV, et al. Vlerësimi in vitro i aktivitetit antioksidant të flavonoleve liposomale nga sistemi HRP-H2O2-luminol. J Microencapsul. 2011; 28 (4): 258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Një hetim i mekanizmit

e peroksidimit lumineshent të luminolit nga teknikat e rrjedhjes së ndalur. J Biol Chem. 25 shtator 1968; 243 (18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Karakteristikat fitokimike, aktivitetet e pastrimit të radikalëve të lirë dhe neurombrojtja e pesë ekstrakteve të bimëve mjekësore. Komplementi i bazuar në Evid Alternat Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 10 gusht.

19. Chang CL, Lin CS. Përbërja fitokimike, aktiviteti antioksidant dhe efekti neuroprotektiv i ekstrakteve të Terminalia chebula Retzius. Komplementi i bazuar në Evid Alternat Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011 5 korrik.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Vlerësimi i aktivitetit antioksidues të flavonoideve të ndryshme me metodën e kimilumineshencës. AAPS PharmSci. 2003; 5 (2): 111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol"zovaniem 2,2"-azo-bis(2-amidinopropana). Buletini i Kimisë i Universitetit të Moskës. 2012; 53 (3): 187-93. ruse.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. Aplikimi i analizës së optimizuar të kimilumineshencës për përcaktimin e kapacitetit antioksidues të ekstrakteve bimore. Lumineshencë. 2012 nëntor-dhjetor; 27 (6): 505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Antioksidantë totale me peshë molekulare të ulët si një parametër përmbledhës, i përcaktuar në mostrat biologjike nga një analizë e frenimit të kimilumineshencës. Nat Protoc. 2010 shtator; 5 (10): 1627-34.

24. Ministristvo zdravookhraneniya RSSS. Gosudarsvennaya farmakopeya RSSS. botimi i 11-të. Iss. 2. "Analiza e metodave obshchie."

Lekarstvennoe rastitel "noe syr"e". Moskë: Medltsina; 1987. f. 147-8. Rusisht.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. Farmaci. 2012; (2): 14-6. rusisht.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii dhe vodnykh izvlechenii. Farmatsiya. 2010; (5): 16-8. rusisht.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsiya. 2014; (1): 8-10. rusisht.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr"ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. Punimet e Konferencës së 14-të Ndërkombëtare Homeopatike të Moskës "Razvitie gomeopaticheskogo methoda v sovremennoi p.2014"; 146- 7. Ruse.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicalheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr"e razlichnykh sposobov konservatsii. Punimet e Kongresit të 20-të Kombëtar Rus "Chelovek i Lekarstvo"; 2013 Prill 1519; Moska. Moskë: EkOOnis; 2013. fq. 184-90. rusisht.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktakh iz kornevishcha i kornei khrena i ee stabil"nosti k razlichnym vozdeistviyam. Buletini i Kimisë i Universitetit të Moskës. 2006; 47 (5): 350-2. Rusisht.

1 Bolshakova L.S. 1Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Institucioni Arsimor Buxhetor i Shtetit Federal i Arsimit të Lartë Profesional "Instituti Shtetëror i Ekonomisë dhe Tregtisë Oryol"

2 Institucioni Buxhetor Federal i Shtetit "Qendra për Kimikalizimin dhe Radiologjinë Bujqësore "Orlovsky"

3 Institucioni Arsimor Buxhetor i Shtetit Federal i Arsimit të Lartë Profesional "Universiteti Shtetëror - Kompleksi Arsimor, Kërkimor dhe Prodhues"

U hetua mundësia e përdorimit të kimilumineshencës për të vlerësuar aktivitetin antioksidues të lëndëve ushqyese. Metoda e propozuar bazohet në kimilumineshencën e luminolit në një mjedis alkalik, intensiteti i të cilit varet nga sasia e peroksideve në kampionin kemilumineshent. Kimiluminescenca u regjistrua duke përdorur një instalim të zhvilluar që përmban një pompë dozimi, një dhomë rezistente ndaj dritës, një fotomultiplifikues me vakum xhami dhe një sistem kompjuterik. Për të rritur kimilumineshencën, një zgjidhje e sulfurit të hekurit të kaliumit iu shtua luminolit. Ndryshimet në intensitetin e kimilumineshencës u regjistruan në momentin e futjes së mostrës së analizuar në tretësirën e luminolit. Ekstrakti i luleradhiqes i marrë nga distilimi i thatë në temperaturë të ulët është përdorur si mostër e analizuar. Ai përmban komponime fenolike të njohura për aktivitetin e tyre të lartë antioksidues. Është vërtetuar se metoda e kimilumineshencës mund të përdoret për të përcaktuar vetitë antioksiduese të përbërjeve të ndryshme ushqimore.

Lidhje bibliografike

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. PËRDORIMI I KIMILUMINESCENTËS PËR VLERËSIMIN E VETITË ANTIOXIDANTE TË SUBSTANCAVE USHQIMORE // Ushqimi racional, aditivët ushqimorë dhe biostimuluesit. – 2014. – Nr.6. – F. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (data e hyrjes: 12/17/2019). Ne sjellim në vëmendjen tuaj revistat e botuara nga shtëpia botuese "Akademia e Shkencave të Natyrës"

punë pasuniversitare

1.4 Metodat e kërkimit antioksidues

Aktiviteti antioksidant klasifikohet: sipas metodave të regjistrimit të AOA të manifestuar (volumetrik, fotometrik, kimilumineshent, fluoreshent, elektrokimik); sipas llojit të burimit të oksidimit; sipas llojit të përbërjes që oksidohet; me metodën e matjes së përbërjes së oksiduar.

Megjithatë, metodat më të njohura për përcaktimin e aktivitetit antioksidant janë:

1 TEAC (kapaciteti antioksidant ekuivalent i trolox): metoda bazohet në reagimin e mëposhtëm:

Metmioglobinë + H 2 O 2 > Ferrilglobinë + ABTS > ABTS * + AO.

Metoda e ekuivalentëve të Trolox (TEAC) bazohet në aftësinë e antioksidantëve për të reduktuar kationet radikale 2,2-azinobis (ABTS) dhe në këtë mënyrë pengojnë përthithjen në rajonin me gjatësi vale të gjatë të spektrit (600 nm). Një disavantazh i rëndësishëm i metodës është reagimi me dy hapa për të prodhuar radikal. Kjo zgjat kohën e analizës dhe mund të rrisë shpërndarjen e rezultateve, pavarësisht nga fakti se një grup i standardizuar i reagentëve përdoret për analizë.

2 FRAP (fuqia antioksiduese e reduktimit të ferrit): metoda bazohet në reagimin e mëposhtëm:

Fe(III)-Tripiridiltriazinë+AO>Fe(II)-Tripiridiltriazinë.

Kapaciteti reduktues/antioksidant i hekurit (FRAP). Reagimi i përdorur këtu është reduktimi i Fe(III)-tripiridiltriazinë në Fe(II)-tripiridiltriazinë. Megjithatë, kjo metodë nuk mund të përcaktojë përcaktimin e disa antioksidantëve, siç është glutationi. Kjo metodë lejon përcaktimin e drejtpërdrejtë të antioksidantëve me peshë të ulët molekulare. Në pH të ulët, reduktimi i kompleksit Fe(III)-tripiridiltriazinë në kompleksin Fe(II) shoqërohet me shfaqjen e një ngjyre blu intensive. Matjet bazohen në aftësinë e antioksidantëve për të shtypur efektin oksidativ të llojeve të reaksionit të krijuara në përzierjen e reaksionit. Kjo metodë është e thjeshtë, e shpejtë dhe me kosto të ulët për t'u zbatuar.

3 ORAC (kapaciteti i absorbimit të radikaleve të oksigjenit): metoda bazohet në reagimin e mëposhtëm:

Fe(II)+H2O2 >Fe(III) + OH*+AO>OH* + Luminol.

Përcaktimi i kapacitetit absorbues të radikaleve të oksigjenit (ORAC). Në këtë metodë, regjistrohet fluoreshenca e një substrati (fikoeritrinë ose fluoresceinë), e cila lind si rezultat i ndërveprimit të tij me ROS. Nëse kampioni i testimit përmban antioksidantë, atëherë vërehet një ulje e fluoreshencës në krahasim me kampionin e kontrollit. Kjo metodë u zhvillua fillimisht nga Dr. Guohua Kao në Institutin Kombëtar të Plakjes në vitin 1992. Në vitin 1996, Dr. Kao u bashkua me Dr. Ronald Pryer në një grup të përbashkët në Qendrën Kërkimore të Plakjes USDA, ku metoda gjysmë e automatizuar ishte krijuar.

4 TRAP (parametri antioksidant i bllokimit total të radikaleve): metoda bazohet në reagimin e mëposhtëm:

AAPH+AO>AAPH* + PL (FE).

Kjo metodë përfiton nga aftësia e antioksidantëve për të bashkëvepruar me radikalin peroksil 2,2-azobis(2-amidinopropan) dihidroklorur (AAPH). Modifikimet e TRAP konsistojnë në metodat për regjistrimin e sinjalit analitik. Më shpesh, në fazën përfundimtare të analizës, radikali peroksi AAPH ndërvepron me një substrat lumineshent (luminol), fluoreshent (diklorofluorescein diacetat, DCFH-DA) ose një substrat tjetër optikisht aktiv.

Derivati i tretshëm në ujë i vitaminës E Trolox (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksi acid) përdoret si standard për metodat TEAC, ORAC dhe TRAP.

Kohët e fundit, interesi për përdorimin e metodave elektrokimike është rritur për të vlerësuar aktivitetin antioksidues. Këto metoda kanë ndjeshmëri të lartë dhe analizë të shpejtë.

Vlerësimi i aktivitetit antioksidues të disa produkteve ushqimore kryhet me metodën e potenciometrisë, bazuar në përdorimin e vetive të substancave antioksiduese për të marrë pjesë në reaksionet redoks për shkak të grupeve enol (-OH) dhe sulfhidril (-SH).

Përcaktimi i vetive antioksiduese të solucioneve bazohet në ndërveprimin kimik të antioksidantëve me sistemin ndërmjetës, i cili çon në një ndryshim në potencialin e tij redoks. Një qelizë elektrokimike është një enë që përmban një zgjidhje tampon K-Na-fosfat, një sistem ndërmjetësues Fe(III)/Fe(II) dhe një elektrodë komplekse përpara matjes së potencialit redoks. Aktiviteti antioksidant vlerësohet në g-eq/l.

Metoda amperometrike për përcaktimin e aktivitetit antioksidues bazohet në matjen e rrymës elektrike që ndodh gjatë oksidimit të substancës testuese në sipërfaqen e elektrodës së punës, e cila është nën një potencial të caktuar. Ndjeshmëria e metodës amperometrike përcaktohet si nga natyra e elektrodës së punës ashtu edhe nga potenciali i aplikuar në të. Kufiri i zbulimit të detektorit amperometrik të polifenoleve dhe flavonoideve është në nivelin nano-pikogram; në përqendrime kaq të ulëta, ekziston një probabilitet më i ulët i ndikimit të ndërsjellë të antioksidantëve të ndryshëm kur ata janë të pranishëm së bashku, në veçanti manifestimi i fenomenit të sinergjisë. . Disavantazhet e metodës përfshijnë specifikën e saj: në këto kushte, antioksidantët që vetë oksidohen ose reduktohen në rajonin e potencialeve elektroreduktuese të oksigjenit nuk mund të analizohen. Përparësitë e metodës përfshijnë shpejtësinë, prostatën dhe ndjeshmërinë e saj.

Metoda e kulometrisë galvanostatike duke përdorur oksidantë të gjeneruar elektrik - metoda është e aplikueshme për analizën e antioksidantëve të tretshëm në yndyrë.

Janë zhvilluar metoda të ndryshme për përcaktimin e acidit askorbik:

metodë amperometrike duke përdorur një elektrodë alumini të modifikuar me një shtresë hekscianoferrate nikeli (II) me zhytje të thjeshtë në një tretësirë;

një metodë për përcaktimin e testit spektrofotometrik dhe vizual në fazën e ngurtë të acidit askorbik duke përdorur xerogel të acidit silicik të modifikuar me reagent Wawele dhe bakër (II) si pluhur tregues;

Përcaktimi kemilumineshent i acidit askorbik mund të kryhet me metodën e injektimit të rrjedhës duke përdorur reaksionin kimilumineshent të rodaminës B me cerium (IV) në një mjedis acid sulfurik.

përcaktimi i acidit askorbik në intervalin 10 -8 -10 -3 g/cm 3 me voltammetri anodike në mjedise ujore dhe ujore-organike.

Më e zakonshme është metoda FRAP, pasi është e shpejtë dhe shumë e ndjeshme. Gjatë dekadave të fundit, janë zhvilluar një numër i madh metodash për përcaktimin e aktivitetit antioksidues duke përdorur metodën FRAP (Tabela 1).

Tabela 1 Zhvillimi i metodës FRAP dhe aplikimi i saj për të përcaktuar aktivitetin antioksidues të objekteve të ndryshme

	Objektet e analizës	Shënime
	Plazma e gjakut	t=4min. U studiuan stoikiometria e reaksionit dhe aditiviteti.
	Çaj, verë	Përcaktimi i AOA për shkak të polifenoleve
		U krahasuan vlerat e AOA të varieteteve të ndryshme të çajit
Pulido,Bravo,Saura-Calixto	Zgjidhje modele	t=30min. U zbulua ndikimi i një tretësi jo ujor
	Bimët
	Gjaku, indi	Metoda PIA. Është testuar ndikimi i substancave të huaja.
Firuzi, Lacanna, Petrucci e.a.	Zgjidhje modele	Ndjeshmëria e përcaktimit të AO-ve të ndryshme u studiua si funksion i strukturës së tyre dhe potencialit redoks.
Katalinic, Milos,	Verëra të ndryshme
Temerdashev, Tsyupko dhe të tjerë.	Modelet e përzierjeve
Loginova, Konovalova	Barna Barna	Metoda e testimit
Temerdashev, Tsyupko dhe të tjerë.	Verërat e kuqe të thata	Korrelacioni i AOA me tregues të tjerë të cilësisë së verës
Vazhdimi i tabelës 1
	Modelet e përzierjeve	Është studiuar ndjeshmëria e përcaktimit të AO-ve të ndryshme
Vershinin, Vlasova, Tsyupko	Modelet e përzierjeve	Sinjali u zbulua se nuk ishte aditiv kur kishte mungesë të agjentit oksidues
Anisimovich, Deineka dhe të tjerë.	Zgjidhje modele	Janë propozuar parametrat kinetikë për vlerësimin e AOA.

Shënime: Përcaktuar në mënyrë konvencionale: analiza e injektimit të rrjedhës FIA, TPTZ-tripiridiltriazinë, DIP-2,2,-dipiridil, PHEN-o-fenantroline, acid DPA-piridinedikarboksilik, FZ-ferrozinë, AA-acid askorbik, CT-katekol, t - koha e ekspozimit, min.

Ndërveprimi ndërmjet proteinave dhe polielektroliteve në tretësirat ujore

Metoda të ndryshme analitike përdoren për të karakterizuar komplekset protein-polelektrolite. Metodat instrumentale ofrojnë informacion mbi vetitë strukturore dhe optike, dhe gjithashtu përcaktojnë dinamikën dhe natyrën e lidhjes së PEC...

Efekti i komponimeve d-metal në shkallën e disociimit të një molekule uji në një membranë bipolare

Në procesin e sintetizimit të BPM-ve të reja, shumë vëmendje duhet t'i kushtohet studimit të vetive të mostrave të marra për zgjedhjen e mëvonshme të kushteve të sintezës që sigurojnë përmirësimin e karakteristikave elektrokimike të membranave të sintetizuara.

Droga projektuese dhe kanabinoidë sintetikë

Zbulimi i kanabinoideve sintetike në përzierjet e bimëve mund të kryhet me metoda të ndryshme fiziko-kimike, si kromatografia-spektrometria e masës, kromatografia me gaz, kromatografia me shtresë të hollë dhe kromatografia e lëngshme me performancë të lartë...

Zhvillimi i një metode për përcaktimin e flavonoideve në materialet bimore mjekësore

Sinteza dhe vetitë farmakologjike të kinolinoneve-2

Objekti i studimit: Quinolinone-2. Metoda e kërkimit: Duke përdorur programin kompjuterik "Marvin JS", u krijua struktura e substancës. Më pas ajo u dërgua në faqen "http://www.way2drug.com/PASSONline/predict.php" për kërkime të mëtejshme...

Metoda spektrale termike për studimin e produkteve të avullimit të polimerit epoksi

Teknologji për prodhimin e kitozanit shumë të pastruar nga predha e krustaceve

Përcaktimi i peshës molekulare të kitozanit Pesha molekulare e kitozanit u përcaktua në mënyrë viskometrike duke përdorur një metodë standarde. Tretësirat me përqendrim 0,05 dhe 0,5 g/dL u përgatitën duke tretur një kampion pluhuri polimer në tampon acetati (0...

Karakteristikat fiziografike të territorit të parkut natyror

1 Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Institucioni Arsimor Buxhetor i Shtetit Federal i Arsimit të Lartë Profesional "Instituti Shtetëror i Ekonomisë dhe Tregtisë Oryol"

2 Institucioni Buxhetor Federal i Shtetit "Qendra për Kimikalizimin dhe Radiologjinë Bujqësore "Orlovsky"

3 Institucioni Arsimor Buxhetor i Shtetit Federal i Arsimit të Lartë Profesional "Universiteti Shtetëror - Kompleksi Arsimor, Kërkimor dhe Prodhues"

kimilumineshencë

aktivitet antioksidant

peroksidet

lëndë ushqyese

1. Vasiliev R.F. Shkëlqimi kimik // Kimia dhe kimistët, 21.01.10. – URL: http://chemistry-chemists.com. (data e hyrjes: 22.08.13).

2. Vladimirov Yu.A. Radikalet e lira dhe antioksidantët // Vestn. RAMS. – 1998. – Nr. 7. – F. 43–51.

3. Kondrashova E.A. Kimiluminescenca si metoda më e ndjeshme e analizës së imunitetit të enzimës dhe aplikimi i saj // Diagnostifikimi klinik laboratorik. – 1999. – Nr. 9. – F. 32.

4. Lyubimov, G.Yu. Analiza kimilumineshente // Imunologji. – 1991. – Nr. 1. – F. 40–49.

5. Mayansky A.N., Nevmyatullin A.L., Chebotar I.V. Kimilumineshencë reaktive në sistemin e fagocitozës // Mikrobiologji. – 1987. – Nr. 1. – F. 109–115.

6. Sherstnev M.P. Rrugët e varura nga kalciumi dhe të pavarura nga kalciumi për gjenerimin e kimilumineshencës së qelizave // Pyetjet e kimilumineshencës. – 1991. – Nr. 2. – F. 1–4.

Sot, kimilumineshenca përfaqëson një zonë të madhe të shkencës, e vendosur në ndërfaqen midis kimisë, fizikës dhe biologjisë. Me kimilumineshencë, ndodh një shndërrim i drejtpërdrejtë i energjisë kimike në energjinë e dridhjeve elektromagnetike, d.m.th. në botë Duke përdorur kimilumineshencën, mund të zbuloni se si vazhdon reagimi, cili është mekanizmi i tij, çfarë është e nevojshme për zbatimin efektiv dhe efikas të proceseve teknologjike. Nëse procesi teknologjik i prodhimit të një produkti kimik shoqërohet me kimilumineshencë, atëherë intensiteti i tij mund të shërbejë si masë e shpejtësisë së procesit: sa më i shpejtë të jetë reagimi, aq më i ndritshëm është shkëlqimi. Gjatë reaksionit të kimilumineshencës fitohen produkte të pasura me energji, të cilat më pas lëshojnë energji duke emetuar dritë, pra energjia kimike shndërrohet në energji rrezatimi elektromagnetik.

Qëllimi i studimit është të eksplorojë mundësinë e përdorimit të kimilumineshencës për të vlerësuar aktivitetin antioksidues të lëndëve ushqyese.

Rezultatet e hulumtimit dhe diskutimi

Problemi i vlerësimit të aktivitetit antioksidues të lëndëve ushqyese është shumë i rëndësishëm. Përdorimi i termit "aktivitet antioksidues" për të treguar dobinë e një produkti të caktuar shpesh bëhet pa ndonjë argumentim kimik ose biokimik. Si rregull, aktiviteti antioksidant i çdo substance nënkupton efektivitetin e uljes së vlerës së peroksidit. Vetë koncepti i vlerës së peroksidit gjithashtu nuk zbulon plotësisht thelbin e tij kimik, pasi nuk korrespondon plotësisht me kinetikën dhe termodinamikën e fazave të metabolizmit të një produkti të veçantë ushqimor. Përveç kësaj, kjo vlerë përdoret për të karakterizuar lipidet në formën e yndyrave. Sidoqoftë, proceset e oksidimit dhe formimi i peroksideve në trup ndodhin jo vetëm kur konsumoni yndyrna, por edhe ushqime të tjera. Me fjalë të tjera, përmbajtja e peroksidit në një produkt të caktuar mund të thuhet se "peshohet" në një lloj peshore, ku "pesha e referencës" është njësia e përqendrimit në një mjedis acid të jonit të jodit të oksiduar nga peroksidet, si një rezultat i të cilit formohet jodi molekular:

I- - e → I; (1)

I + I → I20. (2)

Kur jodi molekular titrohet me një tretësirë që përmban tiosulfat natriumi, vendoset përqendrimi i tij dhe, për rrjedhojë, përcaktohet sasia e joneve jodidike oksiduese, d.m.th. komponimet e peroksidit, i cili në fakt quhet numri i peroksidit. Përcaktimi i numrit të peroksidit duke përdorur këtë lloj "peshimi" bazohet në reagimin e treguar në Fig. 1.

Oriz. 1. Përcaktimi i vlerës së peroksidit duke përdorur tiosulfat natriumi

Kështu, përqendrimi i peroksideve përcaktohet nga ekuacioni

С(I2) = ϒ(C[-O-O-]), (3)

ku ϒ është koeficienti i korrelacionit midis përqendrimit të jodit molekular dhe përqendrimit të peroksideve.

Metoda që ne propozojmë për përcaktimin e peroksideve në produkte bazohet në kimilumineshencën e luminolit (C[lm]) në një mjedis alkalik, intensiteti (Ichl) i të cilit varet nga përqendrimi i peroksideve (C[-O-O-]) në Mostra kimilumineshente:

DNH = Ϧхл ω, (4)

ku Ϧhl është rendimenti kuantik i kimilumineshencës; ω - shpejtësia e reagimit që përfshin peroksidet:

khlC[-O-O-] C[lm] = ω, (5)

ku khl është konstante e shpejtësisë së reagimit ose në:

C[lm] khl Ϧkhl = K, (6)

IHL = K C[ -O-O- ]. (7).

Sasia e peroksideve (-O-O-) përcaktohet nga shuma e lehtë (S):

Vlera e S varet nga shkalla e konsumit të plotë të peroksidit në reaksionin kimilumineshent.

Për të përcaktuar konstanten K, ndërtohet një kurbë kalibrimi për varësinë e shumës së dritës S nga përqendrimi i peroksidit, i cili përcaktohet me titrim:

S = f(C[-O-O-]). (9)

Peroksidi i hidrogjenit H2O2 përdoret si perokside.

Më pas krahasohen të dhënat e marra nga ekuacioni (3) dhe (9). Bazuar në një krahasim të ϒ dhe K, arrihet një përfundim në lidhje me pajtimin e mekanizmave të reagimit që qëndrojnë në themel të përcaktimit të peroksideve me këto metoda. U zbulua se në këtë gamë të përqendrimeve të peroksidit ϒ dhe K në fakt pajtohen me njëra-tjetrën dhe për këtë arsye ato mund të përdoren për të përcaktuar numrin e peroksidit.

Kimilumineshenca u vu re në një mjedis alkalik që përmban luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazinedion, 3-hidrazid i acidit aminoftalik, H2L). Ai u regjistrua duke përdorur një strukturë kimilumineshente, duke përfshirë një fotomultipliator me vakum xhami. Fotoshumëzuesi mundësohet nga një ndreqës i tensionit të lartë (7) i shoqëruar me një bllok (9) që amplifikon sinjalin e fotoshumëzuesit, i cili regjistrohet në ekranin e monitorit të kompjuterit (5).

Oriz. 2. Regjistrimi i kimilumineshencës së produktit të analizuar: 1 - pompë dozuese; 2 - dhoma e papërshkueshme nga drita; 3 - pasqyrë; 4 - kuvetë; 5 - sistemi kompjuterik; 6 - fotoshumëzues; 7 - ndreqës i tensionit të lartë; 8 - pajisje që ju lejon të përcaktoni rajonin spektral të rrezatimit kimilumineshent; 9 - bllok që përforcon sinjalin e fotoshumëzuesit

Një pompë dozimi (1) është e nevojshme për të futur kampionin e analizuar në një kuvetë (4) që përmban një tretësirë kemilumineshente të luminolit. Ky shpërndarës vepron si një mikser për kampionin e injektuar me një zgjidhje kimilumineshente. Për të rritur shpejtësinë e reagimit dhe intensitetin e kimilumineshencës, një zgjidhje e sulfurit të hekurit të kaliumit iu shtua luminolit. Përzierja kryhet nga flluska ajri të marra duke pompuar ajrin përmes lëngut të tretësirës. Pasqyra (3), e vendosur në dhomën rezistente ndaj dritës (2), shërben për grumbullimin më të mirë të dritës së rrezatimit kemilumineshent që bie në fotokatodën e fotoshumëzuesit (6), të montuar në dhomën kundër dritës. Shpërndarësi ju lejon të futni përbërësit e kërkuar të lëngshëm në kuvetë pa hapur dhomën e ngushtë (2) gjatë eksperimenteve. Në këtë rast, këto lëngje hyjnë në kuvetë (4) përmes tubave qelqi ose plastikë. Sistemi kompjuterik bën të mundur regjistrimin e varësisë së intensitetit të shkëlqimit I në kohën t, domethënë kinetikën e kimilumineshencës:

Sistemi kompjuterik pasqyron konstantet e ngritjes dhe rënies në funksionin I = f(t), të cilat shoqërohen me konstantet e shpejtësisë së reaksioneve që shkaktojnë kimilumineshencën, pra me kinetikën e tyre. Një pajisje (8) përfshihet në dhomën kimilumineshente, e cila bën të mundur përcaktimin e rajonit spektral të rrezatimit kimilumineshent, domethënë varësinë:

I = f1 (λ). (njëmbëdhjetë)

Ky bllok është një kasetë në formë disku në të cilën janë montuar filtrat kufitarë. Ndryshimi i filtrave kryhet duke rrotulluar kasetën e diskut në lidhje me boshtin horizontal që lidh qendrat e planit të filtrave dhe rrafshin e fotokatodës së fotoshumëzuesit.

Procesi i matjes kryhet si më poshtë:

1. Vendoset reagimi i fotoshumëzuesit ndaj ndryshimeve në tensionin e furnizimit të tij dhe ndaj ndryshimeve të intensitetit të burimit të dritës referuese që bie në katodën e tij.

2. Kuveta mbushet me një tretësirë të luminolit në një mjedis alkalik.

3. Dispenzeri mbushet me kampionin e analizuar.

4. Regjistrohet varësia e intensitetit të kimilumineshencës nga koha t. Vëzhgimet e kimilumineshencës kryhen deri në kohën t1, në të cilën ndryshimi në I1 nga koha t është minimal: I1 = f1(t).

5. Një pjesë e tretësirës së analizuar furnizohet duke përdorur një shpërndarës.

6. Vërehet kimilumineshencë e kampionit të analizuar, kinetika e së cilës është I = f(t).

Në Fig. Figura 3 tregon një grafik të varësisë së funksioneve (I1 = f1(t)), të shoqëruar me grafikun (I = f(t)), pas futjes së zgjidhjes së analizuar.

Siç mund të shihet nga Fig. 3, intensiteti i kemilumineshencës së luminolit ndryshon: një rritje e mprehtë pasohet nga një rënie e mprehtë e luminescencës pas shtimit të mostrës së analizuar.

Meqenëse rritja e kimilumineshencës gjatë oksidimit të luminolit shoqërohet me formimin e peroksideve, një rënie në intensitetin e kimilumineshencës pas futjes së mostrës së analizuar tregon një ulje të sasisë së tyre. Rrjedhimisht, mund të flasim për praninë e aktivitetit antioksidues në përbërjet e përfshira në kampionin e analizuar.

Duhet theksuar se kampioni i analizuar ishte një ekstrakt luleradhiqesh i marrë nga distilimi i thatë në temperaturë të ulët, i cili përmban komponime fenolike të njohura për aktivitetin e tyre të lartë antioksidues.

Oriz. 3. Grafiku i varësisë së funksionit (I1 = f1(t)), i shoqëruar me grafikun (I = f(t)), pas futjes së zgjidhjes së analizuar

Për më tepër, eksperimenti vërtetoi se duke përdorur kimilumineshencën është e mundur të përcaktohet sasia e peroksideve në sistemet ultra të holluara, gjë që është e rëndësishme për vlerësimin e fillimit të oksidimit të produkteve, për shembull, gjatë ruajtjes.

Kështu, studimet kanë treguar se metoda për përcaktimin e peroksideve në produkte, bazuar në kimilumineshencën e luminolit në një mjedis alkalik, bën të mundur vlerësimin e aktivitetit antioksidues të substancave ushqimore dhe mund të përdoret për të përcaktuar vetitë antioksiduese të përbërjeve të ndryshme ushqimore. .

Rishikuesit:

Litvinova E.V., Doktor i Shkencave Teknike, Profesor i Departamentit të Teknologjisë, Organizimit dhe Higjienës Ushqimore, Institucioni Arsimor Buxhetor i Shtetit Federal i Arsimit të Lartë Profesional "OrelGIET", Orel;

Kovaleva O.A., Doktor i Shkencave Biologjike, Drejtor i Institutit, Institucioni Arsimor Buxhetor Federal i Shtetit të Arsimit të Lartë Profesional "Universiteti Shtetëror Agrare Oryol", Orel.

Vepra u prit nga redaktori më 8 nëntor 2013.

Lidhje bibliografike

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. PËRDORIMI I KIMILUMINESCENTËS PËR TË VLERËSUAR VETITË ANTIOXIDANTE TË SUBSTANCAVE USHQIMORE // Kërkime Themelore. – 2013. – Nr.10-11. – Fq 2436-2439;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32810 (data e hyrjes: 12/17/2019). Ne sjellim në vëmendjen tuaj revistat e botuara nga shtëpia botuese "Akademia e Shkencave të Natyrës"

shënim artikull shkencor mbi shkencat kimike, autor i veprës shkencore - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Tema të ngjashme punime shkencore në shkencat kimike, autor i veprës shkencore - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Përcaktimi kimilumineshent i kapacitetit total antioksidant në materialin bimor mjekësor

Teksti i punës shkencore me temën “Metodë kimilumineshente për përcaktimin e kapacitetit total antioksidant në materialet bimore mjekësore”

Lidhje bibliografike

1.4 Metodat e kërkimit antioksidues

Lidhje bibliografike

Funksionet e organeleve qelizore

Algoritmi për të shkruar një ese në studimet sociale

Çernobili në kujtimet e dëshmitarëve okularë Tregime të frikshme të Çernobilit